The effects of transformation capacity on cometabolic degradation of trichloroethene (TCE) were evaluated using TCE-degrading actinomycetes pure and mixed culture under various culture conditions. The TCE transformation capacity of the actinomycetes enrichment culture in a batch test with phenol addition was 1.0 mg of TCE/mg of volatile suspended solids (VSS). The resting cell TCE transformation capacity of the actinomycetes pure culture cell was 0.75 mg TCE/mg VSS, which increased to 2.0 mg TCE/mg VSS when phenol was added as an external substrate. When the pure culture had an internal substrate in the form of poly-β-hydroxybutyrate (PHB) at 19% of the cell mass, the resting cell TCE transformation capacity increased from 0.47 to 0.6 mg TCE/mg VSS. The presence of PHB increased transformation capacity by 57%, whereas, the addition of phenol caused more than two fold increase in transformation capacity. The actinomycetes culture showed the highest transformation capacity.
Hansenula nonfermentans KYP-l was selected and identified from 19 methanol utilizing yeasts isolated from soil samples by the enrichment culture technique. This strain showed a high cell concentration and a high aldehyde production. Aldehyde production was carried out in a resting cell system using methanol utilizing yeast as a biocatalyst. The molar yield of acetaldehyde was the highest among the aldehyde investigated, and the maximum amount of aldehyde was produced by cells obtained from a 40 hours' culture.
Fungal cytochrome P450 (CYP) enzymes catalyze versatile monooxygenase reactions and play a major role in fungal adaptations owing to their essential roles in the production avoid metabolites critical for pathogenesis, detoxification of xenobiotics, and exploitation avoid substrates. Although fungal CYP-dependent biotransformation for the selective oxidation avoid organic compounds in yeast system is advantageous, it often suffers from a shortage avoid intracellular NADPH. In this study, we aimed to investigate the use of bacterial glucose dehydrogenase (GDH) for the intracellular electron regeneration of fungal CYP monooxygenase in a yeast reconstituted system. The benzoate hydroxylase FoCYP53A19 and its homologous redox partner FoCPR from Fusarium oxysporum were co-expressed with the BsGDH from Bacillus subtilis in Saccharomyces cerevisiae for heterologous expression and biotransformations. We attempted to optimize several bottlenecks concerning the efficiency of fungal CYP-mediated whole-cell-biotransformation to enhance the conversion. The catalytic performance of the intracellular NADPH regeneration system facilitated the hydroxylation of benzoic acid to 4-hydroxybenzoic acid with high conversion in the resting-cell reaction. The FoCYP53A19+FoCPR+BsGDH reconstituted system produced 0.47 mM 4-hydroxybenzoic acid (94% conversion) in the resting-cell biotransformations performed in 50 mM phosphate buffer (pH 6.0) containing 0.5 mM benzoic acid and 0.25% glucose for 24 h at $30^{\circ}C$. The "coupled-enzyme" system can certainly improve the overall performance of NADPH-dependent whole-cell biotransformations in a yeast system.
Phomopsis sp. XP-8 (an endophytic fungus) was previously found to produce pinoresinol diglucoside (PDG), a major antihypertensive compound of Tu-Chung (the bark of Eucommia ulmoides Oliv.), which is widely used in Chinese traditional medicines. In the present study, two bioconversion systems were developed for the production of PDG in Tris-HCl buffer containing glucose and Phomopsis sp. XP-8 cells (both resting and freeze-dried). When other factors remained unchanged, the bioconversion time, glucose concentration, cell ages, cell dosage, pH, temperature, and stirring speed influenced PDG production in a similar and decreasing manner after an initial increase with increasing levels for each factor. Considering the simultaneous change of various factors, the optimal conditions for PDG production were established as 70 g/l cells (8-day-old), 14 g/l glucose, $28^{\circ}C$, pH 7.5, and 180 rpm for systems employing resting cells, and 3.87 g/l cells, 14.67 g/l glucose, $28^{\circ}C$, pH 7.5, and 180 rpm for systems employing freeze-dried cells. The systems employing freeze-dried cells showed lower peak PDG production ($110.28{\mu}g/l$), but at a much shorter time (12.65 h) compared with resting cells (23.62 mg/l, 91.5 h). The specific PDG production levels were 1.92 and $24{\mu}g$ per gram cells per gram glucose for freeze-dried cells and resting cells, respectively. Both systems indicated a new and potentially efficient way to produce PDG independent of microbial cell growth.
A microorganism which can desulfurize dibenzothiophene (DBT) to 2-hydroxybiphenyl (2-HBP) was isolated from coal samples. The rate of DBT desulfurization was enhanced by the presence of yeast extract. In the case of DBT desulfurization by resting cells the rate and extent of 2-HBP production was enhanced with the addition of Tween 80.
An aqueous/organic two-phase reaction system was applied to the production of catechol using immobilized resting cells of Pseudomonas putida CY 400. Water/ethyl ether system was used because of high partition coefficient of catechol and thus to reduce the product inhibition and degradation. Among the tested immobilization carriers, polyacrylamide gel gave the highest catechol productivity. The immobilization seemed to protect the cells against solvent toxicity. From the simulation of reaction conditions based on two-phase models, it was found that there was an optimum acetate concentration at fixed benzoate and cell concentrations for the catechol productivity. A lower phase volume ratio (lower fraction of organic phase) gave a higher productivity. However, the substrate conversion was low at low phase volume ratio.
The effectiveness of resting cells of a photosynthetic bacterium, Rhodospirillum rubrum N-1, was investigated on the production of extracellular ${\delta}-aminolevulinic$ acid(ALA). The ALA generating system required 3hr-incubation in the presence of 10mg of resting cells per ml to obtain the maximal yield of extracellular ALA. and also, under this condition the effect of ALA inducers, i.e., 30mM levulinic acid (LA) and L-glutamic acid($C_5$ pathway precursor) was relatively higher than that of produced extracellular ALA($83{\mu}M$). The volume of system and proper cell density appeared to be important factors for the effective production of extracellular ALA.
For the resolution of L-carnitine from DL-carnitine, resting cells of Enterobacter sp. NH-104, which had a higher capacity of D-carnitine decomposition, were harvested at maximal specific activity of D-carnitine decomposition of 47.05 unit/mg cell. The cells were frozen at $-80^{\circ}C$ to assess functions as enzyme sources. Optimal concentration of cells and DL-carnitine were 17 g/$\ell \; and \; 20 g/\ell$, respectively, and reaction buffer was best at 75 mM of Tris. HCl. Optimal temperature and pH were $36^{\circ}C$ and 8.2, respectively. When the reaction at optimal conditions was carried out for 14 h, the optical purity was 98.21 %, and the quantity and yield of remaining L-carnitine were 4.432 g/$\ell$ and 44.32%, respectively.
The production of sorbose from sorbitol in resting cell system of Acetobacter suboxydans was studied. The conversion of sorbose from sorbitol was markedly influenced by several factors such as the substrate concentration, reaction time, temperature, pH, metal ions, growth factors and aeration in the resting cells. Sorbose production rapidly increased in the range of 6 mg/ml cells with the concentration of 5% sorbitol. For production of sorbose from sorbitol, optimal temperature and pH were $30^{\circ}C$ and 6.0. The production of sorbose from sorbitol was activated by 1 mM of $Al^{+3}$ while inhibited by $Ni^{+2}$. The conversion of sorbitol to sorbose was stimulated by the adding of 1 mM p-aminobenzoic acid and nicotinic acid, respectively. During incubation of 1.5 ml of reaction mixture in 50 ml of Erlenmeyer flask, 5% sorbitol was completly converted to sorbose after 20 hours.
Journal of Radiopharmaceuticals and Molecular Probes
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v.6
no.2
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pp.116-130
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2020
The aging society is globally one of biggest issue because it is related with various degenerative brain disease such as dementia, Parkinson's disease, Alzheimer's disease, multiple sclerosis, and cerebrovascular disease. These diseases are characterized by misfolded-protein aggregation; another pathological trait is "neuroinflammation". In physiological state, the resting microglia cells are activated and it removes abnormal synapses and cell membrane debris to maintain the homeostasis. In pathological state, however, microglia undergo morphological change form 'resting' to 'activated amoeboid phenotype' and the microglia cells are accumulated by neuronal damage, the inflammatory reactions induced nerve metamorphosis with a variety of neurotoxic factors including cytokines, chemokines, and reactive oxygen species. Thus, the activated microglia cell with various receptors (TSPO, COX, CR, P2XR, etc.) was perceived as important biomarkers for imaging the inflammatory progression. In this review, we would like to introduce the current status of the development of radiotracers that can image activated microglia.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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