• Journal of Plant Biotechnology
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• 제30권3호
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• pp.241-244
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• 2003

Root cluster section culture, showing high efficient Protocorm-like body (PLB) formation capacity, were established in Doritaenopsis hybrids. Three types of root were obtained from excised shoots in 1/2MS medium containing different concentrations of NAA; \circled1normal roots, \circled2multiple roots and \circled3abnormal root clusters. Those were placed on 1/2MS medium supplemented with 0.5 mg/L thidiazuron for PLB regeneration. PLB regeneration rate was greater in root cluster section cultures (77.8%) compare to normal root tip cultures(30%). Number of PLBs regenerated from root cluster sections were counted over 11 per explant (5.3 per normal root tip).High frequency of PLB regeneration was achieved in root cluster section culture. This result can be used as an efficient method for clonal proliferation of Doritaenopsis hybrids.

• Journal of Plant Biotechnology
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• 제33권2호
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• pp.75-84
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• 2006

Heteroplasmic rice plastid transformant was generated using suspension cells as bombardment materials. PCR analyses confirmed incorporation of aadA and cp4-epsps genes into the rice plastid genome by homologous recombination events via the flanking sequences of the trnI and trnA. Transplastomic calli were actively proliferated when cultured on AAM2 medium supplemented with various concentrations (500-3000 mg/L) of streptomycin in dark condition, and transplastomic suspension cells showed resistance to nonselective herbicide, glyphosate. Through 'agarose pie selection' method, heteroplastomic calli, containing considerably high level of transplastome and expressing the CP4 EPSPS protein, were obtained. They were further regenerated to green shoots with healthy roots.

• Journal of Forest and Environmental Science
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• 제39권3호
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• pp.150-154
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• 2023

Heloniopsis orientalis (Liliaceae) is an important horticultural crop native to Korea. Under natural conditions, germination is poor and plant growth is delayed. Therefore, we have developed a vegetative propagation method to produce plants with vigorous growth characteristics via tissue culture. The regenerated shoots were then initiated directly from leaf explants on an MS medium containing either 0.5 to 2.0 mg/L 2,4-D or 1.0 to 3.0 mg/L BA. Healthy plantlets with adventitious roots were formed on the medium supplemented with 1.0 mg/L BA (81%). BA triggered callus initiation without caulogenesis or rhizogenesis, and callus formation was better on the half-strength MS medium than on the full-strength medium. This in vitro propagation protocol will be useful for conservation, as well as for mass propagation.

• 식물조직배양학회지
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• 제27권2호
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• pp.89-94
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• 2000

큰용담의 기내배양에서 EMS를 처리한 경우 돌연변이체를 선발하기에 최적의 농도는 200 uM이며 농도가 높아질수록 생존률이 저하되었으며 줄기는 가늘고 나선형으로 꼬이고 백화현상이 가장 심하였다. Colchicine의 경우 30일 까지는 전 농도에서 84~97%의 높은 생존률을 보였으나 60일 이후에는 농도에 따라 생존률의 차이가 보였다 변이체가 단간이며 왜소하였다. MNU의 경우 10 $\mu$M에서 200$\mu$M까지는 89~97%의 높은 생존률을 보이다가 500$\mu$M이상에서는 18.2%로 급격한 감소를 보였으며 변이체의 잎의 형태가 도피침형에서 주걱형과 도란형으로 변형된 것과 잎의 청색에서 진보라색으로 변형된 2가지 type의 변이체가 형성되었다. Sodium azide를 처리한 경우 적정농도는 80$\mu$M였고 60일 배양 시 전반적으로 30~50%의 균일한 생존률을 보였고 초장이 아주 작고 다분얼성 변이체를 형성하였다. 형성된 shoot의 길이를 비교하여 보면 sodium azide, MNU의 경우에서는 약 1.0cm내외인 반면 colchicine의 경우 0.5 cm내외로 저조한 길이 생장을 보였다. RAPD에 의한 돌연변이체의 확인에서 농도가 가장 높은 500$\mu$M에서 변이 band가 관찰되었으며 돌연변이 계통에서 새로 형성된 band의 수는 MNU에서 2개 NaN3에서 1개로 전부 3개 (8.1%)의 변이 band가 나타났다.

• Journal of Plant Biotechnology
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• 제44권2호
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• pp.171-177
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• 2017

우리나라에서 멸종위기 해안식물로 지정된 갯봄맞이의 캘루스배양을 통한 재분화 프로토콜을 보고한다. 마디배양을 통해 육성한 기내 유식물체의 절편은 유전자형, 절편의 종류, 광조건 및 2,4-D 첨가농도에 따라 캘루스 형성에 상이한 반응을 보였다. 특히, 다른 처리와는 무관하게 연속 암배양이 절편으로부터 캘루스 유도에 결정적인 영향을 미쳤다. 2,4-D 0.1-3.0mg/L 농도 범위의 배지에서 유도된 캘루스를 동일한 조성의 배지로 이식하여 암배양했을 때왕성하게 캘루스가 증식하였다. 연속 암조건에서 zeatin 1.0mg/L 첨가배지에 'Pistachio' 유전자형의 캘루스를 배양했을 때만 유일하게 정상적인 신초가 재분화 되었고, 이 때 신초는 캘루스로부터 형성된 마디구조에서 발달하였으며 신초의 재분화율은 24.4%였다. 재분화 신초를 식물호르몬 무첨가 배지로 이식하여 명배양 했을 때 지상부 녹화와 더불어 뿌리가 발생하여 유식물체로 발달하였다. 기내 유식물체를 기 보고된 마디배양 프로토콜(Bae et al. 2016)에 따라 배양했을 때 효과적으로 유식물체를 증식시킬 수 있었다. 기외 순화시킨 유식물체는 내륙 자연 환경하에서 성숙식물체로 생육하였으며 이듬 해 4월에 개화하였다. 본 연구의 결과는 Bae et al. (2016)이 제안한 마디배양 프로토콜과 통합하여 운용될 수 있고, 통합된 프로토콜은 갯봄맞이의 기내 번식 시스템으로서 갯봄맞이 자생지 복원에 기여할 수 있을 것이다.

• Journal of Plant Biotechnology
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• 제37권3호
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• pp.337-342
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• 2010

범부채 (Belamcanda chinensis)의 기내 식물체 재분화 체계를 확립하기 위하여, 생장조절물질이 자엽, 뿌리줄기, 뿌리 절편체로부터 캘러스 유도와 식물체 재분화에 미치는 영향을 조사하였다. 조직별 캘러스 유도율은 자엽절 편체 보다 뿌리절편체에서 더 왕성하게 관찰되었으며, 3.0 mg/L 2,4-D의 단독처리와 1.0 mg/L 2,4-D와 3.0 mg/L BA의 혼합처리에서 캘러스가 가장 효과적으로 유도되었다. 또한, 3.0 mg/L 2,4-D를 단독처리 한 배지에서 유도된 캘러스를 치상하여 4주간 배양하였을 때 가장 많은 신초가 유도되었으며, BA를 혼합 처리한 배지에서는 다발성 신초가 유도되었고 신초의 생장이 양호하였다. 2,4-D와 BA를 혼합처리 한 배지로부터 유도된 신초를 생장조절 물질을 첨가하지 않은 MS 배지로 옮겨 주었을 때 보다 더 정상적이며 성장이 양호한 뿌리의 분화가 관찰되었다. 재분화 식물체는 순화처리를 위하여 당과 식물생장 조절물질이 첨가되지 않은 MS배지로 계대배양 한 후 인공토양의 화분으로 옮겨 이식하여 관찰한 결과 100%의 생존률을 보였으며 정상적인 재분화 식물체를 대량으로 획득하였다.

• Journal of Plant Biotechnology
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• 제35권2호
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• pp.121-126
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• 2008

양배추와 무로부터 원형질체를 분리하였고 PEG 처리를 통하여 융합을 하였다. 고농도의 원형질체 혼합물로부터 많은 미소괴를 관찰할 수 있었다. 미소괴는 정상적인 캘러스로 자랐고 이들 캘러스로부터 총 218개의 신초가 재분화 되었다. 재분화된 개체는 순화 과정을 거처 온실에서 재배하였다. 순화된 208개체를 대상으로 마커 검정을 통하여 융합 여부를 확인한 결과, 모두 무의 NWB-CMS에 특이적인 PCR 산물을 확인할 수 없었다. 그러나 ISSR분석을 통하여 208개체 중 3개체에서 양배추와 무의 세포가 융합됨을 확인하였다. 이를 통하여 원형질체의 융합이 성공적으로 일어났음을 증명할 수 있었다. 세포융합이 일어난 3개체는 모두 양배추와 무의 형질을 보이는 중간적인 형태를 가지고 있었다. 이들은 춘화처리를 거쳐 모두 개화 되었으나 꽃의 색깔이 무의 형질과 같은 흰색이었고 이중 한 개체에서만 역교배를 통하여 3개의 종자를 얻었다.

• Journal of Plant Biotechnology
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• 제38권1호
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• pp.69-76
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• 2011

This study describes the effect of myo-inositol on sustained cell division and plant regeneration from cotyledon-derived protoplast of cabbage (Brassica oleracea var. capitata). Freshly isolated protoplasts were cultured in modified Murashige and Skoog (MS) medium removed ammonia ions and containing $0.4\;mg\;l^{-1}$ thiamine HCl, $100\;mg\;l^{-1}$ myo-inositol, $2\;mgl^{-1}$ 2,4-D, $0.5\;mgl^{-1}$ BA, $30\;gl^{-1}$ sucrose and several concentrations of myo-inositol (2, 4, 6, 8, 10% (w/v)) as an osmotic stabilizer. After 3 weeks of culture in the dark at $25^{\circ}C$, the plating efficiency of cabbage protoplasts reached to $22.5{\pm}2.9%$ when cultured in modified MS medium supplemented with $2\;mgl^{-1}$ 2,4-D, $0.5\;mgl^{-1}$ BA, $30\;gl^{-1}$ sucrose and 8% (w/v) of myo-inositol at a density of $2{\times}10^5$ protoplasts/ml. Rapidly growing cell colonies after 3 weeks of culture were transferred to the same culture medium removed osmoticum. To induce shoot regeneration from calluses, calluses with about 2 mm in diameter were transferred to the MS medium containing $2\;mgl^{-1}$ BA and $0.5\;mgl^{-1}$ NAA. After further three weeks of incubation onto the medium in the light, green shoots were formed on the surface of calluses at a frequency of 30%. Upon transfer to half-strength MS basal medium, roots were formed onto the bottom of regenerated shoots without auxin treatments. These regenerated plantlets were successfully acclimatized to soil transfer, grown to normal mature plants. The cabbage protoplast culture system established in this study could be applied for production of somatic hybrids or cybrids by asymmetric protoplast fusion and mass proliferation of elite somatic clones of cabbage.

• 한국자원식물학회지
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• 제34권2호
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• pp.156-165
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• 2021

바이오에너지작물의 중요한 소재를 제공하는 화본과 식물인 홍띠(Imperata cylindrica 'Rubra')의 기내재생 식물체의 유전적 안정성을 조사하고자 생장점 부위를 기내배양하여 재분화시킨 녹색 재생식물체의 변이성을 ISSR 마커로 조사하였다. MS(Murashige and Skoog, 1962) 배지에 식물체 기부의 생장점 부위를 적출하여 캘러스를 유도하고(0.1 mg/L 2,4-D와 2 mg/L BA), 캘러스 증식(0.1 mg/L 2,4-D와 0.05 mg/L BA), 신초 재분화(0.01 mg/L NAA와 2 mg/L BA) 후 MS 배지에서 발근시켜 재분화 식물체를 유도하고 100% 활착시켰다. 대조구인 모식물체 홍띠 8개체, 1년간 노지 포장에서 재배중인 재분화 녹색 식물체 10개체와 실험실 내 화분에서 재배중인 재분화 녹색 식물체 10개체, 총 28개체에 대하여 ISSR 분석한 결과 유전적 다형성은 재분화 식물체가 실내포트 재배식물체 4.1% 및 노지 재배식물체 3.1%로 0%인 대조구보다 높게 나타났다. 또한, 총 28개체들 간의 유전적 유사도를 평가한 결과, 유전적 유사도 지수는 0.919~1.0 사이에 분포하며, 평균 0.972로 유전적 충실도가 높게 나타났다. 군집분석 결과 노지에서 재배한 재분화 식물체와 모식물체(대조군)가 독립적으로 유집되었다.

• Journal of Plant Biotechnology
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• 제50권
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• pp.176-182
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• 2023

사과 '후지'의 잎 절편체로부터 신초 기관형성을 통한 효율적인 식물체 재생 시스템을 확립하기 위하여 암처리 기간, 전처리 방법, 배양 용기당 치상 절편체 수, 배양 용기의 종류와 배지 위의 절편체 치상방향 등을 달리하여 실험을 실시하였다. 배양 초기 암조건에서의 배양은 신초 형성에 필수적이며, 4주 동안 배양한 후 명조건으로 옮겨 배양하는 것이 신초 재생에 가장 효과적이었다. 배양 전 전처리로는 sorbitol 40 g/L가 포함된 액체 재생배지에 2시간 동안 침지하였을 때 신초 형성율이 87.5%까지 증가하였으며, 신초 형성 시기가 빨라지는 것으로 나타났다. 배양 용기당 치상 절편체 수는 9개를 치상하는 것이 신초 재생에 효과적이었으며, 배양 용기는 100 ml 삼각플라스크를 사용하는 것이 petri dish를 사용하는 것에 비해 신초 형성율이 약 3배 정도 증가하였다. 잎절편체의 배지 위 치상방향은 배축면이 배지에 닿게 치상했을 때, 신초 형성율과 재생된 신초수가 다소 높게 나왔다. 암조건에서 4주간 배양한 후 명조건으로 옮겨총8주간 배양하여 재생된 신초는 1/4 MS에 0.2 mg/L의 IBA가 첨가된 배지에서 발근을 유도한 후 활착시켜 온실에서 재배하였을 때 정상적인 표현형을 보여주었다.