• BMB Reports
• /
• 제29권4호
• /
• pp.380-385
• /
• 1996

Ovomucoid third domain is a serine proteinase inhibitor protein which consists of 56 amino acid residues. A fifty picosecond molecular dynamics (MD) simulation was carried out for ovomucoid third domain protein with 5 $\AA$ layer of water molecules. A comparison of main chain atoms in the MD averaged structure with the crystal structure showed that most of the backbone structures are maintained during the simulation. Investigation of the intramolecular hydrogen bondings indicated that most of the interactions between main chain atoms were conserved, whereas those between side chains were reorganized for the period of the simulation. Especially, the side chain interactions around the scissile bond of reactive site P1 (Met18) were found to be more extensive for the MD structures. During the simulation, hydrogen bonds were maintained between the side chains of Glu19 and Arg21 as well as those of Thr17 and Glu19. Extensive side chain interactions observed in the MD structures may shed light on the question of why protein proteinase inhibitors are strong inhibitors for proteinases rather than good substrates.

• 한국균학회지
• /
• 제14권2호
• /
• pp.101-107
• /
• 1986

The properties of carboxyl proteinase which was contained in Poria cocos (Schw.) Wolf were investigated by means of the purification with 0.65 ammonium sulfate saturation, DEAE cellulose and Sephadex G-75 gel filtration. This enzyme was found to hydrolyze only peptide bond between glutamyl-L-tyrosine of carbobenzoxy-L-glutamyl-L-tyrosine among the synthetic substrates of carbobenzoxy-L-glutamyl-L-tyrosine, hippuryl- L-phenylalanine and hippuryl-L-arginine. This enzyme was inhibited by $Zn^{+2},\;Fe^{+2},\;Ca^{+2},\;CN^{-1},\;P_2O_7^{-4}$ ions, but stimulated by $Hg^{+2}$ ion. Also, this enzyme was inhibited by organic compounds such as L-lysine, L-phenylalanine, hippuryl-L-phenylalanine, diazoacetyl-DL-norleucine methyl ester (DAN) and 1,2-epoxy-3-(P-nitrophenoxy)propane(EPNP). In particular, the activity was inhibited by L-lysine till 20 minutes of preincubation time rapidly, and by DAN in the presence of $Cu^{+2}$ ion more rapidly after 30 minutes than DAN in the absence of $Cu^{+2}$ ion. L-Lysine was found to be a competitive inhibitor and its $K_i$ value was determined to be 0.12 mmole by Dixon plot.

• 대한의생명과학회지
• /
• 제8권3호
• /
• pp.161-165
• /
• 2002

Apoptosis can be difficult to detect in routine histological sections. Since extensive DNA fragmentation is an important characteristic of this process, visualization of DNA breaks could greatly facilitate the identification of apoptotic cells. Several techniques for the qualitative and quantitative detection of this process have been established; recently, an in situ nick end-labelling technique based on the detection of DNA fragmentation, which is a molecular characteristic of apoptotic cell death, was described. Applying this method to paraffin sections of rat tissues, sensitivity was observed to be inconsistently low with regard to the expected number of apoptotic cells. I describe a new modified method for formalin-fixed, paraffin-embedded tissue sections, pretense pretreatment to permeate the tissue sections that involves an TUNEL (terminal deoxynucleotidyl transferase-mediated dUTP nick end-labeling) is acknowledged as a method of choice in the rapid identification and quantification of the apoptotic cell fraction in paraffin tissue preparations. TUNEL was performed without apoptosis and with apopotosis samples to each of the three concentrations of proteinase K (10, 25, 40 mg/ml) pretreatments. In this study, I show that chemical pretreatments of the tissue sections in proteinase K (25 mg/ml for 15 min at room temperature) considerably enhances the sensitivity of this nick end labelling technique.

• Parasites, Hosts and Diseases
• /
• 제40권2호
• /
• pp.93-99
• /
• 2002

The effect of a secretory proteinase from the pathogenic amoebae Acanthamoeba castellanii on host's defense-oriented or regulatory proteins such as immunoglobulins, interleukin-1, and protease inhibitors was investigated. The enzyme was found to degrade secretory immunoglobulin A (slgA), IgG, and IgM. It also degraded $interleukin-1{\alpha}$ ($IL-l{\alpha}$) and $IL-l{\beta}$. Its activity was not inhibited by endogenous protease inhibitors, such as ${\alpha}$2-macroglobulin, ${\alpha}l-trypsin$ inhibitor, and ${\alpha}2-antiplasmin$. Furthermore, the enzyme rapidly degraded those endogenous protease inhibitors as well. The degradation of host's defense-oriented or regulatory proteins by the Acanthanoeba proteinase suggested that the enzyme might be an important virulence factor in the pathogenesis of Acanthamoeba infection.

• Applied Biological Chemistry
• /
• 제33권4호
• /
• pp.287-292
• /
• 1990

황금종 대두로 부터 8종의 Bowman-Birk형 proteinase inhibitor들을 DEAE-Sephadex A-50으로 전기영동상 단일 band로 순수하게 분리하였다. 이중 inhibitor VII cysteine함량이 17%로 높고 trypsin 및 chymotrypsin에 대해 각각 독립적인 결합부위를 가지고 있으며 상기 두 효소에 대한 저해활성도의 비(TIA/CIA)가 1.0으로 전형적인 Bowman-Birk trypsin inhibitor(BBTI)로 확인되었다. 본 inhibitor와 trypsin 및 chymotrypsin complex의 dissociation constant는 각각 $9.17{\times}10^{-9}M$과 $5.14{\times}10^{-8}M$로 매우 안정하였다. 또한 inhibitor Vll은 열에 매우 안정한 단백질로 $100^{\circ}C$, 6시간 처리에도 저해활성도 감소가 50%밖에 안되었다. 순수분리된 7종의 다른 isoinhibitor중 inhibitor III만이 TIA/CIA값이 1.2로 BBTI와 비슷하였으나 그외 inhibitor I, II, IV, V,및 VIII은 그 값이 $3{\sim}29$로 BBTI와는 성질이 다른 isoinhibitnr로 추정되었다.

• 한국미생물·생명공학회지
• /
• 제15권2호
• /
• pp.135-139
• /
• 1987

Aspergillus 속 균주 MK-24로부터 venom proteinase inhibitor의 생산조건을 검토한 결과 질소원으로서는 유기능질소가 균생육에 있어서는 매우 좋았으나 물질생성에 있어서는 무기능질소보다 못하였다. 무기질소원으로서는 sodium nitrate가 가장 좋은 효과를 보였다. 단소원으로서는 glucose가 대부분 당류와 비슷한 결과를 나타내었고 특히 arabitol, xylitol, salicin 등은 본 균주가 단소원으로 사용치 못하는 것으로 추정되었으며, vitamin 류는 물질생성에 무관하였으며 금속염류로서는 효과적인 것은 없으나, Ag$^+$, Co$^{++}$, $Zn^{++}$ 등은 억제하였다. 배양온도와 pH는 각각 3$0^{\circ}C$와 pH 5가 균의 생육과 저해물질생성에 제일 적당하였고, 단소원과 질소원으로서 glucose 2%, NaNo$_3$ 0.3%을 가한 액체배지에서 7일간 정치배양 하였을 때 저해물질생육이 가장 좋았다.

• Journal of Microbiology and Biotechnology
• /
• 제6권6호
• /
• pp.381-385
• /
• 1996

Three distinct plasmids, with approximate molecular weights of 1, 4.5, and 33 megadaltons, were found in Lactococcus lactis subsp. lactis (L. lactis) ML8. Slow acid-producing mutants of L. lactis ML8, isolated by plasmid curing with acriflavine treatment, lacked the 33-megadalton plasmids. The plasmid-cured mutant showed lactose-negative (Lac) characteristics and the alteration of extracellular proteinase pattern. The possible involvement of extracellular proteinase with the 33-megadalton plasmid is highlighted in this research.

• 생명과학회지
• /
• 제12권6호
• /
• pp.752-758
• /
• 2002

본 연구에서는 단백질분해효소의 산업적 이용을 위하여 kiwifruit 과육 속에 들어 있는 gelatin분해활성을 조사하였다. Kiwifruit 과육에는 3개의 단백질분해효소의 활성 밴드(PI, PII, PIII)가 관찰되었다. 단백질분해효소 PI은 220 kD, PII는 51 kD, PIII는 26 kD에 해당하는 것으로 추정할 수 있었다. 이들 단백질분해효소 PI, PII, PIII는 모두 pH 2.0~5.0 범위에서 높은 활성을 보였으며 pH 4.0에서 가장 높게 나타났다. 이들 단백질분해효소 PI, PII, PIII는 모두 cysteine proteinase 저해제인 E-64와 iodoacetate에 의해서 저해되었으며, cysteine proteinase를 촉진하는 DTT, cysteine 및 $\beta$-mercaptoethanol에 의해서 활성이 증가하였다. 그 중 단백질분해효소 PIII는 분자량과 효소의 특성으로 보아 actinidin (EC 3.4.22.14)과 동일한 것으로 판단되었다. 단백질분해효소 PI, PII, PIII는 모두 $Ca^{2+}$, $Mg^{2+}$과 $Mn^{2+}$에 의해 촉진되었으며 $Zn^{2+}$과 $Hg^{2+}$에 의해 완전히 저해되는 것으로 나타났다. 하지만, $Co^{2+}$, $Cu^{2+}$, $Al^{3+}$, $Fe^{3+}$ 등 금속이온의 영향이 다소 다르게 나타났다. Kiwifruit 과육의 단백질분해효소 PI, PII, PIII 중에서 PI과 PII는 온도가 증가함에 따라 활성이 점차 낮아졌으나 PIII는 비교적 안정한 것으로 조사되었다. 특히, PIII는 $50^{\circ}C$ 이내의 범위에서 48시간 경과시에도 75% 이상의 활성을 보여 이 범위의 온도에서는 상당 시간 동안 안정한 것으로 나타났다.

• 한국발생생물학회지:발생과생식
• /
• 제10권4호
• /
• pp.263-269
• /
• 2006

Tilapia 난과 혈청의 cysteine proteinase 저해제(cystatin)의 산업적 이용 적성을 평가하고자 이의 저온 저장성과 가열에 대한 열 안정성을 살펴보았다. Tilapia 난과 난의 균질 상등액을 $4^{\circ}C$에서 3일간 보관하면서 cystatin 활성도의 변화를 측정한 결과 난의 경우는 저장 중 큰 변화가 없었으나, 난 균질 상등액의 경우는 활성이 차츰 감소하여 저장 3일 후에는 초기 활성의 약 65%로 줄어들었다. 냉동과 해동에 따른 cystatin의 안정성을 살펴보기 위하여 난과 혈청을 $-20^{\circ}C$ 냉동과 상온 해동을 하루에 한 차례씩 반복한 결과, 난의 경우 5회 이상 냉동과 해동이 반복된 경우에는 활성이 차츰 감소하였으나, 혈청의 경우는 냉동-해동 cycle을 5회 반복하여도 cystatin 활성에 영향을 미치지 않았다. 난 cystatin의 열 안정성을 측정하기 위하여 $35^{\circ}C$와 $50^{\circ}C$에서 각각 30분간 가열하여 cystatin 활성을 측정한 결과 $35^{\circ}C$에서는 80% 이상의 활성이 유지되었으나 $50^{\circ}C$에서는 10% 미만으로 감소되었다. 반면에 혈청의 경우는 $50^{\circ}C$에서 30분 가열하여도 cystatin 활성이 감소하지 않고, $80^{\circ}C$의 고온에서 30분 동안 가열하여도 약 74%의 활성이 남아 있어 열에 매우 강한 특성을 보였다. 이상의 결과를 종합하면 난을 냉장저장할 때는 난을 파괴하지 않고 원상대로 보관하는 것이 난을 균질하여 원심분리한 상등액으로 저장하는 것보다 cysteine proteinase 저해제 활성을 더 오래 보존하는 방법이며, 난 cysteine proteinase 저해제는 냉동-해동 반복처리에도 비교적 안정하였으나 혈청은 난에 비하여 냉동-해동 반복처리에 대해 더욱 안정하였다. 열 안정성에 있어서는 난 cystatin은 열에 비교적 약한 반면 혈청 cystatin은 열에 매우 안정하였다. 따라서 tilapia 난과 혈청은 surimi 제조시 cysteine proteinase 저해제로서 활용가치가 있으며, 특히 혈청은 더욱 유용하다고 사료된다.

• BMB Reports
• /
• 제41권11호
• /
• pp.814-819
• /
• 2008

Interleukin-32 (IL-32) induces a variety of proinflammatory cytokines and chemokines. The IL-32 transcript was reported originally in activated T cells; subsequently, it was demonstrated to be abundantly expressed in epithelial and endothelial cells upon stimulation with inflammatory cytokines. IL-32 is regulated robustly by other major proinflammatory cytokines, thereby suggesting that IL-32 is crucial to inflammation and immune responses. Recently, an IL-32$\alpha$-affinity column was employed in order to isolate an IL-32 binding protein, neutrophil proteinase 3 (PR3). Proteinase 3 processes a variety of inflammatory cytokines, including TNF$\alpha$, IL-$1{\beta}$, IL-8, and IL-32, thereby enhancing their biological activities. In the current study, we designed four PR3-cleaved IL-32 separate domains, identified by potential PR3 cleavage sites in the IL-32$\alpha$ and $\gamma$ polypeptides. The separate domains of the IL-32 isoforms $\alpha$ and $\gamma$ were more active than the intrinsic $\alpha$ and $\gamma$ isoforms. Interestingly, the N-terminal IL-32 isoform $\gamma$ separate domain evidenced the highest levels of biological activity among the IL-32 separate domains.