• 제목/요약/키워드: protein in cystic fluid

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인체 유구낭미충증 환자에서 수거한 낭미충 낭액의 성분 단백질의 양상 (Component proteins in cystic fluid of Taenia sodium metacestodes collected surgically from neurocysticercosis patients)

  • Yoon Kong;Shin-Yong Kang;Seung-Yull Cho
    • Parasites, Hosts and Diseases
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    • 제28권2호
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    • pp.101-108
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    • 1990
  • 포도낭미충증을 포함한 유구낭미충증 환자의 신경외과적 수술 과정에서 수거한 낭미충 낭액의 성분 단백질을 비교 검토하였다. 7.5% gel에서 Disc-PAGE와 reducing condition의 10~15% gel에 SDS-PAGE를 실시하여 다음과 같은 결과를 얻었다. 1. 7.5% gel에서 실시한 Disc-PAGE 소견상 제주도와 Ecuador에서 수집한 돼지의 유구낭미충 낭액은 U, A, B, C, E, S의 6개 band로 구성되어 있었고 그 중 band C가 주 구성 성분이었다. 그리고 인체에서 수집한 낭액 은 band C가 주 구성 성분이었고 경우에 따라 band E가 주 구성 성분으로 관찰되고 있었다. 정상 뇌척수액은 band C, E 위치에서 ${\gamma}-globulin$과 albumin이 보이고 있었다. 2. 10~15% gel에서 실시한 SDS-PAGE상 제주도 낭액은 최소 25개 이상의 subunit로 구성되어 있었고 그 중 95, 64, 48, 39, 34, 24, 15, 10및 7 kDa band가 주 구성 성분이었다. 그리고 Ecuador감염 돼지의 유구낭미충 낭액은 전체적으로 비슷했으나 48, 39, 34, 24 kDa band가 의미한 반면 21, 17 kDa가 진하게 염색되었다. 인체 뇌낭미충증 환자에서 수집한 낭액들은 15~21개 정도의 band가 보이고 있었다. 그 중 94, 64, 15, 10 그리고 7 kDa band는 모든 낭액에 공통적으로 포함되어 있었다. 한편, 정상 뇌척수액의 SDS-PAGE에서는 77, 66 (albumin), 55 (heavy chain of ${\gamma}-globulin$), 22.5 (light chain of ${\gamma}-globulin$) 그리고 17 kDa band가 보였다. 환자의 낭액은 77, 66, 55, 22.5 kDa에서 진하게 염색되는 경우가 있었다. 이상의 결과로 인채 유구낭미충증에서 수집한 낭액에도 15, 10, 7kDa의 subunit로 구성된 150kDa의 band C protein이 주 성분으로 구성되어 있으며 수술장에서 수집하는 과정에서 뇌척수액이 섞이는 경우가 많음을 알 수 있었다.

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Serodiagnosis of Echinococcosis by ELISA Using Cystic Fluid from Uzbekistan Sheep

  • Jin, Yan;Anvarov, Khikmat;Khajibaev, Abdukhakim;Hong, Samin;Hong, Sung-Tae
    • Parasites, Hosts and Diseases
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    • 제51권3호
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    • pp.313-317
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    • 2013
  • According to increase of travel, the cases of imported echinococcosis have been increasing in Korea. The present study was undertaken to develop a serodiagnostic system for echinococcosis in Korea. For diagnosis of echinococcosis, the fluid of Echinococcus granulosus hydatid cysts was collected from naturally infected sheep in Uzbekistan. Also serum samples of infected patients who were surgically confirmed were collected in a hospital in Tashkent, Uzbekistan. According to the absorbance of 59 echinococcosis positive and 39 negative control serum samples, the cut-off value was determined as 0.27. The sensitivity and specificity of ELISA with hydatid fluid antigen were 91.5% and 96%, respectively. The antigen cross-reacted with the serum of some cysticercosis or clonorchiasis patients. However, immunoblot analysis on the cystic fluid recognized antigenic proteins of 7-, 16-, and 24-kDa bands in their dominant protein quantity and strong blotting reactivity. In conclusion, the present ELISA system using hydatid cyst fluid antigen from Uzbekistan sheep is sensitive and specific for diagnosis of echinococcosis cases.

면역전기영동법에 의한 유구낭미충 낭액의 구성 단백질 분석 (Immunoelectrophoretic analysis of major component proteins In cystic fluid of Taenia solium metacestodes)

  • Yoon Kong;Seung-Yull Cho;Suk-Il Kim;Shin-Yong Kang
    • Parasites, Hosts and Diseases
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    • 제30권3호
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    • pp.209-218
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    • 1992
  • 혈청이나 뇌척수액에서 특이항체를 증명하여 유구낭미충증을 진단함에 있어 유구낭미충의 낭액이 가장 민감하고도 특이한 항원임은 이미 알려졌다. 낭액을 항원으로 사용하여도 다른 기생충증과 빈도는 낮지만 교차반응이 발생하므로 교차반응을 일으키는 구성단백질에 대하여 더 관찰할 필요가 있다. 이 연구에서는 유구낭미충 낭액을 Sephacryl S-300 Superfine 젤로 분획하고, 낭액 및 그 분획이 낭액을 면역시켜 만든 토끼 항혈청 (RACF)과 반응하는 양상을 면역전기영동법으로 관찰하여 낭액의 구성 단백질의 성질을 분석하고자 하였다. 유구낭미충 장액을 젤여과법으로 분획하면 제 3분회과 제 4분회에 단백질이 가장 많이 포함되었다. 제 3분획은 disc-PAGE상 분자량 150 kDa인 것으로 이미 알려진 Band C가 주(주) 구성 단백질이었다. 제 4분획은 분자량이 약 65kDa일 것으로 추정되는 Band N 단백질이 주 구성단백질이었다. 낭액에 대한 토끼 항혈청을 낭액과 면역전기영동법으로 반응시키면 주 침강대 2개와 작은 침강대 7∼8개를 형성하였는데 낭액의 제 3분획은 주 침강대 중 밖에 위치한 긴 침강대를 형성한 반면, 제4분획은 주 침강대 중 안쪽으로 위치한 짧은 침강대를 형성하였다. 유구낭미충과 혈청학적 교차반응을 가장 많이 일으키는 포충(포충, hydatid cyst)의 낭액과 RACF(유구낭미충 낭액에 대한 토끼 항혈청)을 면역전기영동법으로 반응시킨 바, 제 4분획이 반응한 위치에서 침강대를 형성하여 제 4분획의 주구성 단백질이 포충증과의 혈청학적 교차반응의 원인인 것으로 추정하였다. 유구낭미충증으로 이미 진단한 환자의 혈청 중 효소면역 측정 법으로 항체가가 매우 높았던 혈청 8개를 선택하여 유구낭미충 낭액 및 유구낭미충 충체 추출액과 각각 면역전기영동법으로 반응시킨 바 각각 7명에서 침강대를 형성하였고, 제 3분회 및 제 4분회으로 면역전기영동법으로 반응시킨 환자혈청 4개 중에서는 제 3분획에서는 4개 모두가 침강대를 형성한 반면 제 4분 회에서는 침강대가 혈청 2개에서 형성되었다.

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유조낭고충 낭액에서 친화성 크로마토그래피로 분리한 항원 단백질의 생화학적 성상 (Biochemical properties of a purified protein in cystic quid of Taenia solium metacestodes)

  • 조승열;김석일;강신영;공윤
    • Parasites, Hosts and Diseases
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    • 제26권2호
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    • pp.87-94
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    • 1988
  • Kim et at.(1986)은 유구낭미충 낭액을 감작시켜 만든 단세포군 항체를 CNBr활성화 Sepharose 4B에 연결시켜 친화성 크로마토그래피를 실시하고 낭액에서 A-항원을 분리한 바 있다. 이 연구는 그 항원 단백질의 생화학적 성상을 관찰한 것이다. Disc-PAGE에 의해 4.5~10% 폴리아크릴아마이드 젤에서 나타내는 Rf간을 기초로 분자량을 측정한 결과 A 항원의 분자량은 150,000 dalton이었다. A-항원은 SDS-PAGE에서 15,000, 10,000, 7,000 dalton에 해당하는 polypeptide로 분획이 구별되었다. 10% 2-mcrcaptoethanol로 처리하지 않거나 $95^{\circ}C$에서 5분간 처리하지 않은 A-항원의 SDS-PAGE에서는 7,000 dalton의 polypeptide가 분리되지 않았다. A-항원의 등전점(PI)은 pH6.8이었다. 낭액항원의 각 분획에 반응하는 항체를 갖는 환자혈청으로 A-항원을 SDS-PAGE/EITB한 바 환자혈청은 15,000, 10,000, 7,000 dalton에 해당하는 부위에서만 반응하였다. 낭액 단백질의 약70%를 차지하는 A-항원은 면역학적으로 내열성을 가졌으며 포충(hydatid cyst) 낭액 항원중 Oriol et at.(1971)의 "Antigen B"와 생화학적 성상이 비슷한 단백질이었다.

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Transcriptomic Features of Echinococcus granulosus Protoscolex during the Encystation Process

  • Fan, Junjie;Wu, Hongye;Li, Kai;Liu, Xunuo;Tan, Qingqing;Cao, Wenqiao;Liang, Bo;Ye, Bin
    • Parasites, Hosts and Diseases
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    • 제58권3호
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    • pp.287-299
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    • 2020
  • Cystic echinococcosis (CE) is a zoonotic infection caused by Echinococcus granulosus larvae. It seriously affects the development of animal husbandry and endangers human health. Due to a poor understanding of the cystic fluid formation pathway, there is currently a lack of innovative methods for the prevention and treatment of CE. In this study, the protoscoleces (PSCs) in the encystation process were analyzed by high-throughput RNA sequencing. A total of 32,401 transcripts and 14,903 cDNAs revealed numbers of new genes and transcripts, stage-specific genes, and differently expressed genes. Genes encoding proteins involved in signaling pathways, such as putative G-protein coupled receptor, tyrosine kinases, and serine/threonine protein kinase, were predominantly up-regulated during the encystation process. Antioxidant enzymes included cytochrome c oxidase, thioredoxin glutathione, and glutathione peroxidase were a high expression level. Intriguingly, KEGG enrichment suggested that differentially up-regulated genes involved in the vasopressin-regulated water reabsorption metabolic pathway may play important roles in the transport of proteins, carbohydrates, and other substances. These results provide valuable information on the mechanism of cystic fluid production during the encystation process, and provide a basis for further studies on the molecular mechanisms of growth and development of PSCs.

백악-골화섬유종에서 보이는 동맥류성 낭종변화의 면역조직화학염색 배열분석 (Immunohistochemical Array Analysis of Cemento-Ossifying Fibroma Exhibiting aneurysmal Cystic Changes)

  • 이상신;김연숙;이석근
    • 대한구강악안면병리학회지
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    • 제42권6호
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    • pp.189-198
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    • 2018
  • A 31 years old female had been suffered from a bony swelling in right premolar region of the mandible for 12 years, recently grown rapidly. A fistula tract developed on the right anterior mandibular border, but the lesion was relatively asymptomatic. In the radiological examination, the tumor mass was irregularly mixed with radiolucent and radiopaque areas, forming multiple cystic spaces. Under the diagnosis of calcifying odontogenic cyst, the mandibular mass was resected and examined pathologically. After decalcification, the dissected tumor mass showed multiple small cystic spaces and calcifying fibrous tissue, mimicking calcifying odontogenic cyst or ameloblastoma. Histological observation showed many calcifying cementoid materials and ossifying trabeculae. The cystic spaces were turned out to be dilated vascular channels lined by endothelial cells, containing plasma fluid. However, the main lesion was diagnosed as cemento-ossifying fibroma (COF), and the atypical vascular channels were greatly dilated and gradually expanded the whole tumor mass. The present COF was examined through immunohistochemical (IHC) array, and investigated for tumor cell characteristics, exhibiting abnormal ossification and aneurysmal cystic changes. IHC array disclosed that the tumor cells grew progressively in the lack of apoptosis, and that they showed lower expression of RUNX2 than BMP-2, RANKL, and OPG, and increases of protein expression in $HIF-1{\alpha}$, VEGF-A, and CMG2. These data suggested that the reduced expression of RUNX2, osteoblast differentiation factor, be relevant to abnormal ossification of COF, and that the consistent expressions of angiogenesis factors be relevant to de novo angiogenesis in COF, subsequently resulted in aneurysmal cystic changes.

유구낭미충(有鉤囊尾蟲) 낭액(囊液)의 아미노산(酸) 및 유리지방산(遊離脂肪酸)의 정량분석(定量分析) (Quantitative Analysis of Cystic Fluid Components in Cysticercus cellulosae)

  • 문준;정명숙;주경환;임한종
    • 농촌의학ㆍ지역보건
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    • 제16권2호
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    • pp.141-153
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    • 1991
  • Free amino acid(FAA), free fatty acid(FFA), and amino acid obtained by hydrolysis of protein components of cystic fluid(CF) of Cysticercus cellulosae in pig and man were analyzed. FFA was analyzed by gas chromatography using Varian model 2700, and flame ionization detector with 6 feet${\times}$1/4inch glass column. Flow rate of $N_2$ was 30 ml/min, $H_2$ was 30 ml/min, air was 350 ml/min respectively and chart speed was 1 cm/min. Amino acid was analyzed by high performance liquid chromatography using Waters model 441, and fluorescence detector at 338nm/425nm with column of amino acid analyzer. Buffer A of mobile phase was pH 3.05 and pH of buffer B was 9.6 respectively. The results obtained were as follows : Seven FFAs containing 12~18 carbons were detected : Saturated fatty acids were lauric acid ($C_{12}$), myristic acid($C_{14}$), palmitic acid($C_{16}$), Stearic acid($C_{18}$). Unsaturated fatty acids were oleic acid($C_{12}^{=1}$), linoleic acid($C_{12}^{=2}$), and one unidentified fatty acid was detected. Generally much more quantity of FFA was determined in CF obtained from pig than that from man. FFA of the largest quantity was palmitic acid; 0.078 mg/ml. Eighteen FAAs were detected and the largest quantity was alanine. Ouantity of alanine was 386 ug/ml in CF from pig 108 ug/ml in CF from man respectively. while histidine in CF from pig was 273 ug/ml, that from man was only 4.3 ug/ml. Eighteen amino acids were identified by hydrolysis of protein in CF from man. But, histidine was not identified in CF from pig. Amino from pig and ug/ml from man.

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효소면역전기영동이적법을 이용한 유조설고충 단세후군항체 및 환기혈청에 대한 항원특리성 분석 (Analysis of antigen specificity using monoclonal and polyclonal antibodies to cysticercus cellulosae by enzyme-linked immunoelectrotransfer blot technique)

  • 조승열;강신영;김석일
    • Parasites, Hosts and Diseases
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    • 제25권2호
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    • pp.159-167
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    • 1987
  • 기생충질환의 진단에도 이용하는 혈청학적 진단에서는 근록기생충항원과 교우반응이 나타나 특이도를 떨어뜨리는 경우가 있어 문제가 되고 있다. 진단용으로 사용하는 기생충노항원의 단백질 구성성분중 교*반응을 가장 잘 일으키는 것이 어떤 것인지를 알 수 있다면 특이도가 높은 항원을 제작하는 기본정보로 사용할 수 있을 것이다. 최근 SDS-폴리아크릴아마이드젤 전기영동(SDS-PAGE)과 효소면역전기영동이적법(EITB)을 이용하여 항원항체반응을 일으키는 단백질성분을 노항원중에서 구별할 수 있게 되었다. 이 연구에서는 유구낭미충의 낭액, 두절의 생리식염수추출액, 전낭미충추출액과 스파르가눔추출액, 포충낭액, 간질추출액, 간흡충추출액, 폐흡충추출액 등 8종의 항원에 대하여 유약낭미충증 환자 24명의 혈청과 본교실에서 제작한 단세포군항체가 어떻게 반응하는지 관찰하여 항원특이성을 분석하고자 하였다. SDS-폴리아크릴아마이드젤 전기영동은 길이 9cm, 두께 1.5mm인 10~15% linear gradient gel을 사용하였고 시료 $30{mu}l$를 sample buffier와 합께 $95^{\circ}C$에서 5분간 가열한 후 3~4시간 전기영동하였다. 분리된 단백질을 다시 100V에서 2시간 동안 Towbin buffer에서 전기영동하여 nitrocellulose 종이로 이적하였다. 그후 환자혈청(1 : 100), 단세포군항체(1 : 100)과 반응시키고 peroBidase-conjugated antihuman IgG(또는 perozidase-conjugated antimouse IgG), 기질의 순으로 반응시켜 발색하였다. 그 결과를 요약하면 다음과 같다. 1. SDS-폴리아크릴아마이드젤 전기영동후 Coomassie brilliant blue R-250으로 염색한 바 유구낭미충 낭액에는 단백질대가 최소 23개 나타나고 그중 94, 64, 48, 39, 34, 24, 15, 10, 7kDa가 주단백질이었다. 두절추출액에는 단백질대 34개가 보였고 그중 94, 64, 39, 34, 26, 24, 21, 15, 10, 7kDa가 주단백질대이었다. 전낭미충추출액도 두절추출액과 동일한 소견을 보였다. 낭액항원과 충체추출액간에는 단백질 구성성분보다는 구성비의 차이가 심하였다. 스파르가눔 추출액은 28%, 포충낭액은 15%, 간질추출액은 22%, 간흡충추출액은 6개, 폐흡충추출액은 11개의 단백질대를 보였다. 2. 환자혈청 24개를 SDS-PAGE로 분리된 단백질대와 반응시킨 결과, 낭액항원에서는 평균 7.4개와 반응하였는 바 그중 152, 94, 72, 64, 48, 24, 15, 10, 7kDa 단백질이 가장 중요하였다. 두절 추출액과는 평균 6.3개와 반응하였고 그중 94, 64, 52, 39, 34, 15, 10kDa가 중요하였다. 스파르가눔추출액과는 평균 2.7개가 반응하였고 그중 130, 64kDa가 중요하였으며 포충낭액과는 평균 1개가 반응하였고 52, 27kDa가 중요하였다. 간질, 간흡충 및 폐흡충추출액과는 반응대가 관찰되지 않았다. 3. 단세포군항체는 낭미충낭액의 15, 10, 7kDa 및 두절추출액 10kDa와 반응하였다. 이상의 결과에서 유구낭미충의 구성단백질중 15, 10, 7kDa 등 저분자량단백질이 진단특이성이 높은 분획으로 판단하였다.

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단세포군항체에 의한 유구낭미충 낭액 특이항원의 순수분리 및 항원특성 관찰 (Purification of cystic fluid antigen of Taenia solium metacestodes by affinity chromatography using monoclonal antibody and its antigenic characterization)

  • 김석일;강신영;조승열;황응수;차창용
    • Parasites, Hosts and Diseases
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    • 제24권2호
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    • pp.145-158
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    • 1986
  • 이 연구는 특이 단세포군항체를 이용하여 친화 크로마토그래피를 실시함으로써 유구낭미충의 낭액에 특이한 항원을 순수분리하고 분리한 항원의 진단용 항원으로서의 특성을 관찰하고자 실시하였다. 유구낭미충 낭액을 BALB/c 마우스에 면역시켜 얻은 비장세포와 마우스 형질세포종을 융합하여 얻은 하이브리도마세포가 분비하는 항체의 항원 결합특이성을 면역효소측정 법으로 먼저 관찰하였다. 하이브리도마 세포는 대부분(54.9%) 유구낭미충 낭액에만 반응하는 항체를 생산하였다. 그러나 낭액항원과 기타 기생충항원에 같이 반응하는 항체 또는 기타 기생충항원 한가지에만 반응하는 항체등을 분비하는 하이브리도마세포 집락도 있었다. 무한대 희석법으로 하이브리도마세포를 희석 분주하여 단세포배양을 하였다. 이 경우에도 배양액에 분비한 단세포군 항체는 낭액항원에만 반응하는 경우에 대부분이었으나 기타 기생충 항원에 반응하는 단세포군 항체도 얻을 수 있었다. 따라서 유구낭미충 낭액에는 낭액에 특이한 항원결정기 이외에 유구낭미충의 두절 및 낭벽항원, 무구조충 및 간흡충등과 같은 항원결정기도 갖고 있음을 알 수 있었다. 단세포군 항체중 낭액항원과 가장 높은 항원항체 반응을 일으키며 두절 및 낭벽항원에도 약한 반응을 보였던 단세포군 항체를 선택하고 이를 이용하여 친화 크로마토그래피를 시행하였다. 낭액항원은 순수분리항원(A-Ag) 및 단세포군 항체와 결합하지 않았던 단백질의 총합(U-Ag)으로 분리하였다. 폴리아크릴아마이드 젤 전기영동법으로 낭액항원, A-Ag 및 U-Ag의 단백질 조성을 관찰한 바 낭액항원과 U-Ag는 6개의 band로 되어 있었으나 A-Ag은 band A 및 band C 두가지로 구성되어 있고 그중 대부분은 band C이었다. 순수분리한 A-Ag의 진단용 항원으로서의 가치를 면역효소측정법으로 관찰하였다. 낭액항원을 이용하여 혈청 및 뇌척수액내 IgG 항체가가 양성이었던 뇌유구낭미충증 환자에 대하여 A-Ag(같은 단백질함량)를 항원으로 면역효소측정법을 실시한 바 민감도는 낭액 항원이나 U-Ag에 비하여 70%로 낮아졌다. 그러나 낭액항원 및 U-Ag이 무구조충 감염자, 스파르가눔증 환자 및 체흡충증 환자에 대해 나타내는 교차반응이 A-Ag를 항원으로 사용하였을 때에는 모두 사라졌다. 이와같은 결과에서 단세포군 항체를 친화 크로마토그래피의 반응고리로 사용하여 순수분리한 항원은 유구낭미충 낭액항원중 특이한 항원결정기를 갖는 단백질로 구성되어 있음을 알 수 있었다. 그러나 순수분리항원은 유구낭미충증 환자의 혈청 및 뇌척수액에 존재하는 다세포기원 항체증 A-Ag의 특이항원결정기에만 반응하는 단세포군 항체 하나 또는 몇가지와만 반응하게 함으로써 특이성은 높아지나 혈청학적 민감도는 저하하였다고 판단하였다.

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개에서 Staphylococcus intermedius에 의한 복막후농양 발생례 (Retroperitoneal Abscess Caused by Staphylococcus intermedius in a Dog)

  • 이상관;허우필;엄기동;이근우;오태호
    • 한국임상수의학회지
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    • 제26권2호
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    • pp.176-180
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    • 2009
  • 2년령의 암컷 miniature schnauzer가 침울, 복통 및 식욕부진으로 내원하였다. 신체검사를 통해 빈맥, 발열과 복통을 확인하였다. 총혈구계수 검사에서 호중구수의 증가를 동반한 백혈구증가증이 관찰되었다. 방사선 검사에서 하행결장의 변위와 척추와 평행하게 방사선투과가 감소한 부위가 관찰되었다. 초음파검사시 방광내 결석과 슬러지, 우측 신장의 수신증 및 근위뇨관의 확장이 관찰되었다. 뇨검사결과 단백뇨와 혈뇨가 나타났으며 뇨침사검사에서 다수의 상피세포, calcium oxalate 결정, struvite 결정, 무정형 결정과 과립원주, 백혈구 및 구균이 관찰되었다. 상기의 결과와 배설성 요로 조영술을 통해 신우신염과 편측성 뇨관 완전폐색증으로 진단하였다. 신장절제술을 위한 개복술시 후복막강에 풍선형의 구조물을 발견하였다. 구조물로부터 채취한 시료의 세포검사와 배양검사결과 다수의 퇴행성 호중구와 탐식된 구균을 관찰하였다. 결론적으로 뇨관폐색과 방광결석을 동반한 Staphylococcus intermedius에 의한 복막후농양으로 최종 진단하였고 우측신장의 절제를 실시하여 치료하였다.