Hee Song Kim;Dong Hun Yang;Seok Jun Park;Hye Jin Kim;Hyoung Su Park;Eui-Jong Lee;Mee-Ryung Lee
Journal of Dairy Science and Biotechnology
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제41권3호
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pp.149-156
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2023
Milk protein is often fractionated/concentrated by using various techniques in dairy industries. Among these techniques, ultrafiltration (UF) is particularly efficient at concentrating the casein fraction of milk protein. The objectives of this study were to produce casein hydrolysates by concentrating the casein fraction in skim milk using the UF technique and to investigate the chemical composition of the casein hydrolysates. The skim milk was concentrated using a UF laboratory test unit equipped with 10 kDa and 30 kDa membranes. After UF, the protein content of the milk was concentrated up to ~7.2% and the Ca was concentrated up to ~196 mg/100 g of milk. Trypsin was then added to the concentrated skim milk to produce the casein hydrolysates. The results of sodium dodecyl sulphate-polyacrylamide gel electrophoresis showed that the casein fraction was not present after hydrolysis, indicating that casein in the milk had been hydrolyzed. The Ca content in the casein hydrolysates was much higher (p<0.05) compared to Ca content in commercial casein phosphopeptides (CPP) indicating that was acidified during the manufacture of commercial CPP. In conclusion, it seems that casein hydrolysates containing large concentrations of protein and Ca can also be made from concentrated UF milk without acidification or renneting.
Mackerel muscle protein hydrolysates, which were prepared from defatted mackerel meal by proteases such as complex enzyme, alcalase, bromelain, pancrease, pepsin, w-chymotrypsin, trypsin and papain, were tested for the antioxidative action against linoleic acid. Among proteases tested, the hydrolysates obtained from the treatment of complex enzyme, bromelain and alcalase showed higher antioxidative effects. Also, the hydrolysates showed the synergistic effects with o-tocopherol and the inhibitory effects for peroxidation of metal ions(Fe3+, Cua+) From the profiles of fractionation of the hydrolysates with Bio-gel P-2 column, the most active fractions, part I(complex enzyme-derived) and part e(bromelain-derived), had below MW 1,400 and the antioxidative effects were closely related to the binding capacity with metal ion(Cua+). Amno acid composition of the part I was abundant in histidine, arginine, phenylalanine and lysine, and the part e was abundant in lysine, glutamic acid and leucine.
Mussel adhesive protein (MAP) was extracted from Korean Mytilus edulis and then partially purified using Sephacryl S-300 gel permeation chromatography and reversed-phase high performance liquid chromatography. As an indicator of adhesiveness, is 3,4-dihydroxyphenylalanine (DOPA) content was determined. Its DOPA/protein ratio of 0.19 was higher than those of other reports, indicating a good adhesive. The partially purified MAP was confirmed by acid-urea polyacrylamide gel electrophoresis using cetylpiridinium bromide as a cationic detergent. Sea mussel hydrolysates were prepared using three commercial proteases to provide value-added functional materials and their angiotensin converting enzyme (ACE) inhibitory activities were determined. Among hydrolysates of sea mussel, Protamex was the best and further purification would improved ACE inhibitory activity.
본 연구는 누에고치를 가수분해하여 얻은 실크단백질 효소 가수분해물이 비만형 당뇨병 모델인 OLETF 쥐의 당뇨병 개선에 미치는 영향을 조사하였다. 27주령의 OLETF 쥐를 당뇨대조군과 실크단백질 효소 가수분해물 0.5%, 0.8% 섭취군으로 나누어 19주 동안 음수로 섭취시켰다. 19주 동안 실험동물의 체중, 식이 섭취량, 음수 섭취량을 측정하고, 매주 2회씩 비공복과 공복 혈당변화를 관찰하였으며, 19주 후 모든 동물을 희생시킨 후 혈액을 채취하여 혈청지질과 인슐린 및 렙틴의 농도를 분석하였다. 당뇨대조군의 체중은 실크단백질 효소 가수분해물 섭취군에 비해 크게 감소하는 경향을 보였고, 총 콜레스테롤은 농도 의존적으로 그 수치가 낮아지는 경향을 보였으나 유의적 차이는 없었다. 또한 중성지질이나 HDL-cholesterol 함량 변화에도 큰 영향을 미치지 못하였다. 실크단백질 효소 가수분해물 섭취군은 대조군에 비하여 혈당 상승이 유의적으로 억제되었다. 17주 후 내당능 측정결과 실크단백질 효소 가수분해물 섭취군의 최고 혈당치가 농도 의존적으로 낮게 나타나는 경향을 보였으며 회복도 빨랐다. 인슐린과 렙틴은 농도 의존적으로 증가하였으며, 유의적인 차이를 보였다. 실크단백질 효소 가수분해물의 섭취는 인슐린과 렙틴의 대사에 관여하여 혈당상승을 억제하는 것으로 사료된다.
닭털 단백질을 단백질 가수분해 효소인 Flavouzyme을 이용하여 8시간 동안 가수분해하여 가수분해물을 제조하였다. 닭털 단백질 가수분해물로부터 저분자량 펩타이드를 얻고자 한외여과를 하였고, 철분 결합 펩타이드를 분리하기 위해 Q-Sepharose와 Sephadex G-15 컬럼을 사용하여 분리하였다. 그 결과, 철분 결합력이 높은 펩타이드 분획, F12를 분리하였고, 향후 철분 보충제로써 활용이 가능하다고 판단된다.
본 연구는 누에고치를 효소 가수분해하여 얻은 실크단백질 효소 가수분해물이 2형 당뇨병 모델인 C57BL/KsJ db/db mouse에 혈당조절 및 혈장지질 개선에 미치는 영향을 조사하였다. 12주령의 C57BL/KsJ db/db 마우스를 대조군과 실크단백질 효소 가수분해물 섭취군으로 나누어 8주 동안 음수로 섭취시켰다. 8주 동안 실험동물의 체중, 식이섭취량, 음수섭취량을 측정하고 매주 1회씩 4시간 공복 후 혈당변화를 관찰하였으며, 8주 후 모든 동물을 희생시킨 후 장기무게와 혈액을 채취하여 혈중 triglyceride와 cholesterol을 측정하였다. 실험동물의 체중은 실크단백질 효소 가수분해물 섭취군에서 증가하는 경향을 보였다. 장기무게는 간장의 경우 실크단백질 효소 가수분해물 섭취군에서 약간 증가하는 경향을 보였으며, 신장은 당뇨대조군에서 약간 증가하였으나 간장과 신장 모두에서 각 군간의 유의적 차이는 없었다. 혈당은 실크단백질 효소 가수분해물 섭취 1주 후부터 유의적인 차이를 보였으며, 실크단백질 효소 가수분해물 섭취군이 대조군에 비해 유의적으로 혈당상승을 억제하는 효과가 나타났다. 당뇨대조군의 경우 초기 혈당에 비해 8주후 혈당은 약 18% 증가하였고, 실크단백질 효소 가수분해물은 초기혈당과 비교 시 약 5.8%증가하여 실크단백질 효소 가수분해물이 혈당상승을 억제하는 것으로 나타났다. 포도당 부하후 측정한 내당능의 결과에서도 실크단백질 효소 가수분해물 섭취는 혈당 개선에 영향을 미치는 것으로 나타났다. 실크단백질 효소 가수분해물 섭취군의 혈청지질 중 total cholesterol과 non-HDL cholesterol은 당뇨대조군과 비교시 큰 차이가 없었으나, HDL-cholesterol을 유의적으로 증가시키고 triglyceride 함량을 유의적으로 감소시켰다. 실크단백질 효소 가수분해물의 섭취는 혈당상승을 억제하며, 혈청 지질 중 triglyceride를 낮추고 HDL-cholesterol을 높여 혈청지질 개선에 도움을 주는 것으로 사료된다.
옥수수 전분가수분해물의 용해도는 D.E. 값이 높을수록 증가하였고, 10 이상에서는 거의 차이가 없었다. $T_g^{'}$ 값은 D.E. 값이 증가함에 따라 감소하는 직선적인 관계를 나타내었다. Alkaline phosphatase의 동결계에서 거동은 glass cynamic mechanism, 즉 효소의 가수분해 속도는 첨가된 물질의 $T_g^{'}$ 이하의 온도에서 지연되거나 억제되었다. 옥수수전분 가수분해물은 동결계에서 유리전이온도를 높임으로서 동결계가 유리상태로 되고 따라서 점도는 높아지고 단백질은 분자간 접촉의 기회가 줄어들어 단백질이 보호된다는 cryostabilization mechanism으로 설명 가능하였다.
누에고치를 2N HCl 용액으로 11$0^{\circ}C$, 48시간 가수분해한후 중화하여 냉동건조하여 얻는 누에고치 산가수분해물의 아미노산 조성은 glycin이 43.25%, alanine이 34.39%, serine 10.05%, valine이 2.44%였고 필수 아미노산은 7.12% 차지하였다. 누에고치 산가수분해물의 사료이용효율은 카제인과 같았다. 1~5% 실크분말의 첨가에 의한 간의 무게, 간효소활성(GOT, GPT), 혈청알부민, 혈청 총단백질의 함량은 영향이 없어 단백질의 질이 낮은 것으로 평가되었다. 흰주에 고콜레스테롤, 고지질, 고설탕사료를 각각 섭취시키면서 5% 누에고치 산가수분해물을 첨가하였을 때 혈장 지질농도에 미치는 영향은 중성지질의 감소, 인지질과 HDL의 증가 등 혈액지질조정에 바람직한 결과를 보였으나, LDL과 총콜레스테롤을 높이는 좋지 못한 효과도 나타냈다. 그러므로 누에고치 산가수분해물은 단백질 급원 식품으로보다는 이를 이용한 펩타이드의 생리기능 또는 식용 이외의 화장품재료, 의약용재료, 포장제 등과 기타 물리 화학적 특성을 기초로 한 다양한 범위의 응용이 더욱 적합하다고 생각되며, 혈액지질 개선효과에 대해서는 심층적인 연구가 필요하다.
동결건조된 쌍별귀뚜라미 분말을 4%(w/v)의 기질용액으로 제조한 후, 기질 대비 단백질 가수분해 효소(alcalase, flavourzyme, neutrase, bromelain, papain)를 1%(w/v) 첨가 하여 24시간 가수분해시킨 단백가수분해물을 제조하였다. 각 효소별 가수분해물을 이용하여 SDS-PAGE와 available amino group 함량을 측정하여 확인한 결과, flavourzyme 단백가수분해물이 가장 높은 가수분해도를 보인 반면 bromelain과 papain은 상대적으로 낮은 가수분해도를 보였다. 가수분해도가 높았던 3종의 효소(alcalase, flavourzyme, neutrase)를 이용하여 제조한 단백가수분해물을 각각 한외여과막을 통해 분자량 3 kDa 이하로 분리한 후 항산화 활성을 측정하였다. DPPH 라디칼 소거활성의 경우 flavourzyme이 항산화 활성이 가장 우수하였으며, ABTS 라디칼 소거활성은 neutrase, flavourzyme 및 alcalase 단백가수분해물 순으로 높게 나타났다. $H_2O_2$ 소거활성은 alcalase와 flavourzyme 단백가수분해물이 neutrase 단백가수분해물에 비해 상대적으로 높게 나타났으며, FRAP법은 flavourzyme, alcalase, neutrase 단백가수분해물 순으로 높게 나타났다. 저분자 펩타이드 생산 효율이 가장 높았던 쌍별귀뚜라미 flavourzyme 단백가수분해물을 이용하여 농도별 linoleic acid 과산화 억제 활성을 측정한 결과 농도 의존적으로 유의적인 과산화 억제 활성을 보였다. 최종적으로 본 연구를 통해 고단백질 소재인 쌍별귀뚜라미로부터 여러 단백분해효소원들을 이용한 단백가수분해물 제조 특성 및 우수한 항산화 활성을 확인할 수 있었으며, 이번 연구는 향후 식용곤충 유래 기능성 식품소재 개발을 위한 기초자료로 활용이 가능할 뿐만 아니라 식용곤충 산업 활성화에도 기여할 수 있을 것으로 기대된다.
The functional peptides from protein hydrolysates of various fishery sources have been identified such as antioxidant activity. The main intention of this study was purification and characterization of antioxidative peptide from black eelpout muscle. The antioxidative peptides were purified from black eelpout (Lycodes diapterus) muscle using different proteases. Antioxidant activity of black eelpout hydrolysates was evaluated using DPPH radical scavenging activity. Among six hydrolysates, the pepsin hydrolysate had the highest antioxidant activity compared to the other hydrolysates. Therefore, it was further purified and a peptide with seven amino acid residues of DLVKVEA (784 Da) was identified by amino acid sequence analysis. The EC50 value for scavenging DPPH radicals by purified peptide was 688.77 μM. Additionally, the purified peptide exhibited protective effect against DNA damage induces by oxidation in mouse macrophages (RAW 264.7 cells). The results of this study suggest that black eelpout muscle protein hydrolysate could potentially contribute to development of bioactive peptides in basic research.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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