Cronobacter is a major foodborne pathogen in powdered infant formula and can lead to serious developmental after-effect and death to infants. The contamination of Cronobacter may be a high risk for the powdered foods. To isolate and identify Cronobacter from the powdered foods such as powdered infant formula and Saengsik in Korea, a conventional culture method, rapid identification system, PCR, and 16S rDNA sequencing were performed. As the results of isolation, seven Cronobacter spp. were isolated from seven out of 102 powdered infant formulas and 41 Cronobacter were isolated from 41 out of 86 Saengsiks. Forty-eight Cronobacter isolates were identified to be C. sakazakii and C. dublenisis by 16S rDNA sequence analysis. Most of the isolates were C. sakazakii and 13% of the isolates were C. dublinesis. One fourth of the C. sakazakii isolates showed different biochemical characteristics of negative nitrate reduction and nonmotility activities compared with the other strains reported previously.
2010년 국내 4개 제조업체에서 제조한 조제분유 190개, 성장기용 조제분유 95개, 조제우유 15개 등 300개 조제유류를 수집하여 일반세균, 대장균군 및 위해세균에 대한 오염실태를 조사하였다. 그 결과 멸균제품인 조제우유는 일반 세균수, 대장균군을 포함하여 모든 검사에서 음성을 나타내었다. 이에 반하여 비멸균제품인 조제분유와 성장기용 조제분유에서의 일반세균수는 전체 시료 중 83.9%가 검출되었다. 조제분유는 전체 시료 중 72.6%가 g당 10~100 cfu를, 100~1,000 cfu가 7.9%로 조사되었으며, 성장기용조제분유는 전체 시료 중 79.0%가 g당 1~100 cfu를, 100~1,000 cfu가 11.6%로 조사되어 모든 제품이 1,000 cfu/g 이하를 나타내었다. 대장균군에 대한 검사에서는 전제 제품 중 조제분유와 성장기용조제분유가 각각 3건(1.6%)과 1건(1.1%)이 검출되었으며, 그 수준은 3.6, 3.0, 9.1, 9.1 MPN/g으로 조사되어 국내 기준 규격 (n = 5, c = 1, m = 0, M = 10)에 모두 적합한 것으로 나타났다. 또한, FAO/WHO에서 category A 세균으로 분류하고 있는 Salmonella spp.와 Ent. sakazakii에 대한 검사에서는 모두 불검출로 조사되었다. category C group인 c. perfringens, E. coli O157, S. aureus, L. monocytogenes 4종의 식중독 유발 세균에 대한 검사에서도 모두 음성으로 나타났다. category C 세균 종 B. cereus는 조제분유와 성장기조제분유에서 전체 사료 중 12개 제품에서 g당 10-100 cfu의 수준의 균수가 검출되었다. 이와 같이 조제유류의 오염지표 세균 및 위해세균에 대한 검사에서 모두 국내 기준에 적합한 것으로 조사되었다.
국내에서 생산, 유통되고 있는 영유아용 분말 조제분유 99제품을 수집하여 일반세균, 대장균군, FAO/WHO Category A, B, C 위해세균 분류에 따른 오염현황을 분석하였다. 일반세균수는 총 99개의 제품 중 92개의 제품에서 검출(93%)되었으며 $1.83{\pm}0.68\;Log\;CFU/g$의 분포를 보였다. 최고 $4.5\;Log\;CFU/g$가 검출된 한 제품을 제외하고는 조제분유의 총균수의 기준규격에 적합하였다. 대장균군은 조제분유 대장균군의 기준규격이 음성인 것에 비해 99개의 제품 중 12개의 제품에서 검출(12%)되었으며 $1.26{\pm}1.03\;\log\;MPN/g$의 분포를 보였다. 대장균은 한 제품에서 0.48 log MPN/g으로 검출되었다. Category A 세균인 Salmonella와 En. sakazakii의 오염도 분석 결과 총 99개의 모든 제품에서 검출되지 않았다. Category B group인 세균 중에서 장내세균은 99개의 제품 중 25개의 제품에서 검출(25%)되었고 오염수준은 $0.83{\pm}1.37\;\log\;MPN/g$으로 나타났다. 검출된 Category B group 세균들로는 Escherichia vulneris, Es. hermannii, Pantoea spp., Citrobacter koseri, Klebsiella pneumoniae, Enterobacter cloaceae 등이었다. Category C세균의 오염은 Bacillus cereus가 조제분유 99개의 제품 중에서 29개의 제품이 검출(29%)되어 비교적 높은 오염도를 보였지만 오염수준은 $0.69{\pm}0.32\;\log\;MPN/g$으로서 B. cereus의 국내 기준규격에 모두 적합하였다. 그 외의 Category C 세균은 검출되지 않았다. 국내 유통 조제분유의 주요 위해세균의 대한 미생물 오염정도가 낮아 미생물 기준 규격에 적합한 것으로 평가되었다. 그러나 Category B의 장내세균은 높은 검출율을 보였고 질환을 유발시킬 수 있는 균들이 확인되어 잠재적인 위험이 있다고 사료된다. 따라서 비살균식품인 조제분유의 특성상 잠재적인 위해세균 모니터링이 지속적으로 필요하며 그에 대한 안전성 확보에 능동적 자세가 필요하다.
Enterobacter sakazakii, designated as an unique microbial species in 1980, may cause bacteremia, necrotizing enterocolitis and infant meningitis. The distribution and the thermostability of E. sakazakii in unprocessed ready-to-eat (RTE) agricultural products of 252 and in 25 powdered infant formulas (PIF) were analyzed. Eighty one, 50, 43, and 47% of brown rice, pumpkin, potato, and carrot samples, respectively, had aerobic plate counts (ARC) in the range of 5 log CFU/g or more. Almost all the other products sampled had APC of approximately 2 log CFU/g. Fifty three, 75, 67, and 68% of banana, pumpkin, soybean, and carrot had Enterobacteriaceae counts approximating 3 log CFU/g. Sixty six percent of the brown rice tested had Enterobacteriaceae counts approximating 5-6 log CFU/g. E. sakazakii was isolated from 3/25(12%), 4/23(17%), 1/24(4%), and 1/27(4%) of PIF, brown rice, laver, and tomato samples, respectively. D-values were 3.52-4.79 min at 60 and $D_{60}-values$ were similar as the isolates reported. Thermal inactivation of four thermovariant E. sakazakii strains during the rehydration of PIF with hot water were investigated. At $50^{\circ}C$, the levels of E. sakazakii decreased one log CFU/g for 4-6 min and thereafter the levels remained stable for 20 min. At $60^{\circ}C$, inactivation by about 2 log CFU/g occurred for 20 min. Therefore, the unprocessed agricultural products might be a source of contamination for PIF when used as an ingredient after drying and pulverization. Rehydration of PIF for infant feeding with a water temperature of $60^{\circ}C$ rather than $50^{\circ}C$, as recommended by the manufacturers, may be helpful in the reduction of potential E. sakazakii risk.
Neonatal infection caused by Cronobacter species can result in serious illnesses such as bacteremia, septicemia, meningitis, and death in at-risk infants who are orally fed contaminated reconstituted powdered infant formulas. The objective of this study was to compare the virulence among three Cronobacter species strains by using an animal model for human neonatal Cronobacter species infections. We acquired timed-pregnant ICR mice and all owed them to give birth naturally. On postnatal day 3, each pup was administered orally a total dose of $1{\times}10^7$ CFU Cronobacter species strain 3439, CDC 1123-79, and 3231. Mice were observed twice daily for morbidity and mortality. At postnatal day 10, the remaining pups were euthanized, and brain, liver, and cecum were excised and analyzed for the presence of Cronobacter species. Cronobacter species were isolated from cecum and other tissues in inoculated mice. In the tissues of Cronobacter species infected mice, meningitis and gliosis were detected in the brain. In this study, we identified the virulence among Cronobacter species strains by using a neonatal mice model which was a very effective animal model for human neonatal Cronobacter species infections.
본 연구에서는 조제분유 중의 콜레스테롤을 신속하고 정확하게 분석하기 위해 지방 추출 과정을 거치지 않는 직접 검화 방법을 선택하여 분석법 개발을 시도하였다. 조제분유 분말시료를 직접 검화 수기에 취하여 검화 온도, 검화 시간, KOH 농도의 3가지 인자에 대해 콜레스테롤 회수율이 가장 양호하게 나타나는 최적 검화조건을 확립하고, 검화 후 수세과정에서 액액 분배가 용이한 용매 조건도 확립하였다. 또한 콜레스테롤 피크의 완전한 분리를 위한 적정 기기 조건을 확립하였다. 그 결과, 시료 약 2 g에 16 M-KOH 10 mL를 넣고 $90^{\circ}C$에서 60분 가열하여 검화한 후 diethyl ether로 3회 추출하고 hexane을 최종시험용액으로 하여 기기분석을 했을 때의 회수율이 98.80%로서 가장 양호하게 나타났다. 본 연구를 통해 개발된 조제분유의 효율적인 액액분배 및 직접가열 검화법은 일원배치 분산법에 의해 유화가공식품의 콜레스테롤 분석법으로 유효성이 검증되었으며, 아울러 개발된 전처리 방법 및 기기 분석 조건을 활용해 다양한 분석 기관에서 신속 정확하고 효율적인 콜레스테롤 분석을 수행할 수 있을 것으로 기대된다. 또한 산업체의 품질관리 및 검증기관에서 필요시 모니터링에 적극 활용 가능할 것으로 사료되며, 이를 통해 유화가공식품 류의 함량표시 및 규격관리의 정확성과 효율성 증대에 기여하여 제조업체의 정확하고도 효과적인 품질 및 안전성 확보에 기여할 수 있을 것으로 판단된다. 특히 위해 물질에 대한 정확한 함량 판단이 중요한 조제분유 등의 영 유아용 식품의 안전성 확보에 지대한 공헌을 할 수 있을 것으로 기대된다.
Kim, Gyeong-Hwuii;Kim, Jaegon;Kim, Ki-Hwan;Lee, Jin-Sun;Lee, Na-Gyeong;Lim, Tae-Hyun;Yoon, Sung-Sik
Journal of Microbiology and Biotechnology
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제29권5호
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pp.696-703
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2019
Cronobacter sakazakii is an opportunistic pathogen causing serious infections in neonates. In this study, a bacteriophage ${\Phi}CS01$, which infects C. sakazakii, was isolated from swine feces and its morphology, growth parameters, and genomic analysis were investigated. Transmission electron microscopy revealed that ${\Phi}CS01$ has a spherical head and is 65.74 nm in diameter with a 98.75 nm contracted tail, suggesting that it belongs to the family Myoviridae. The major viral proteins are approximately 71 kDa and 64 kDa in size. The latent period of ${\Phi}CS01$ was shown to be 60 min, and the burst size was 90.7 pfu (plaque-forming units)/infected cell. Bacteriophage ${\Phi}CS01$ was stable at $4-60^{\circ}C$ for 1 h and lost infectivity after 1 h of heating at $70^{\circ}C$. Infectivity remained unaffected at pH 4-9 for 2 h, while the bacteriophage was inactivated at pH <3 or >10. The double-stranded ${\Phi}CS01$ DNA genome consists of 48,195 base pairs, with 75 predicted open reading frames. Phylogenetic analysis is closely related to that of the previously reported C. sakazakii phage ESP2949-1. The newly isolated ${\Phi}CS01$ shows infectivity in the host bacterium C. sakazakii, indicating that it may be a promising alternative to antibacterial agents for the removal of C. sakazakii from powdered infant formulas.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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