Porphyromonas gingivalis has been implicated as an important periodontophathic bacterium in the etiology and progression of periodontal diseases. It has been reported that P.gingivalis may mediate periodontal destruction not only directly through its virulence factors, but also indirectly by including complex host mediated inflammatory reponses. The purpose of this study was t o evaluate the effects of P.gingivalis on the bone formation and resorption by osteoblasts. For this purpose, after determining the concentration below which sonicated P.gingivalis extracts (SPEs) have no cytotoxicity on mouse calvarial primary osteoblastic (POB) cells, we investigated the effects of SPEs on the alkaline phosphatase (ALP) activity, matrix metalloproteinase (MMP) expression (MMP-2, -9, 13), and prostaglandin $E_2$ ($PGE_2$) release in POB cells by treatment with SPEs below that concentration. The results were as follows; 1. SPEs showed no cytotoxic effect on POB cells up to a concentration of 1 ${\mu}m$/ml. 2. The treatment with SPEs reduced ALP activity in a dose-dependent manner in POB cells, In addition, when we investigated the effect of SPEs (1 ${\mu}m$/ml) on ALP activity for different exposure periods, statistically significant inhibition of ALP activity was shown at 2 days of exposure, and further significant inhibition occurred by extending the periods of exposure. 3. The treatment with SPEs stimulated the gene expression of MMP-9 in POB cells. 4. The pre-treatment with SPEs increased the amount of $PGE_2$ released in POB cells. In summary, the present study shows that P.gingivalis could inhibit osteogenesis and stimulate bone resorption not only by reducing ALP activity but also by increasing MMP-9 mRNA expression in osteoblasts, possibly through an endogenous $PGE_2$ pathway. In addition, our results suggest that if P.gingivalis affects osteoblasts in early differentiation stage, such effects by P. gingivalis could be irreversible.
Jinuk Jeong;Yunseok Oh;Junhyeon Jeon;Dong-Heon Baek;Dong Hee Kim;Kornsorn Srikulnath;Kyudong Han
Genomics & Informatics
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제21권1호
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pp.13.1-13.8
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2023
Importance of accurate molecular diagnosis and quantification of particular disease-related pathogenic microorganisms is highlighted as an introductory step to prevent and care for diseases. In this study, we designed a primer/probe set for quantitative real-time polymerase chain reaction (qRT-PCR) targeting rgpA gene, known as the specific virulence factor of periodontitis-related pathogenic bacteria 'Porphyromonas gingivalis', and evaluated its diagnostic efficiency by detecting and quantifying relative bacterial load of P. gingivalis within saliva samples collected from clinical subjects. As a result of qRT-PCR, we confirmed that relative bacterial load of P. gingivalis was detected and quantified within all samples of positive control and periodontitis groups. On the contrary, negative results were confirmed in both negative control and healthy groups. Additionally, as a result of comparison with next-generation sequencing (NGS)-based 16S metagenome profiling data, we confirmed relative bacterial load of P. gingivalis, which was not identified on bacterial classification table created through 16S microbiome analysis, in qRT-PCR results. It showed that an approach to quantifying specific microorganisms by applying qRT-PCR method could solve microbial misclassification issues at species level of an NGS-based 16S microbiome study. In this respect, we suggest that P. gingivalis-specific primer/probe set introduced in present study has efficient applicability in various oral healthcare industries, including periodontitis-related microbial molecular diagnosis field.
Background: Periodontal disease is a major cause of tooth loss in adults and is a representative oral disease commonly suffered by most people around the world. Mainly the proliferation of Gram-negative bacteria and secreted virulence factors cause an inflammatory response and destroy periodontal tissue. Gossypetin, isolated from Hibiscus sabdariffa L, is known to have various pharmacological effects, including antibacterial and anticancer activities. We aimed to confirm the anti-inflammatory effect of gossypetin through interleukin-6 (IL-6) regulation in human gingival fibroblasts (HGFs) stimulated with lipopolysaccharide (LPS) of Porphyromonas gingivalis, a major cause of adult periodontitis. Methods: CCK-8 assay was performed to confirm the concentration-dependent cytotoxicity of gossypetin against HGFs. The secretion level and mRNA expression of IL-6, an inflammation-related cytokine, and the effect of gossypetin on these in HGFs stimulated with P. gingivalis LPS were confirmed by ELISA and qRT-PCR analysis, respectively. Results: Up to a concentration of 100 µM gossypetin with or without P. gingivalis LPS, the survival rate for HGFs was maintained at over 95% and showed no toxicity. ELISA and qRT-PCR analysis results showed that P. gingivalis LPS increased IL-6 secretion and mRNA levels in HGFs compared to the control group. However, this increase in IL-6 was significantly down-regulated by gossypetin treatment in a dose-dependent manner. In particular, 80 µM gossypetin inhibited IL-6 production to the level of the control group. Conclusion: These results indicated that gossypetin attenuated IL-6 production in HGFs stimulated by P. gingivalis LPS, which may ultimately suppress the inflammatory response in periodontal tissue. Therefore, gossypetin may have potential as a natural ingredient for the prevention and treatment of periodontal disease.
In oriental medicine, the fruit of Actinidia polygama has long been used to alleviate the symptoms of gout, arthritis, and inflammation. In this study, it was to designed to analyze the antibacterial activity of A. polygama ethanol extract (APEE) against Streptococcus mutans, one of the major strains for dental caries, and Porphyromonas gingivalis, one of the critical strains for periodontal disease. The antibacterial activity of APEE was analyzed by disk diffusion, minimum inhibitory concentration (MIC), and minimum bactericidal concentration (MBC) assays. In addition, it was also analyzed the inhibitory effect of APEE on bacterial growth and biofilm formation against both oral pathogens. APEE exhibited its antibacterial effect through the inhibited bacterial diffusion as well as low concentration of MIC and MBC. In addition, APEE significantly inhibited not only bacterial growth but also biofilm formation in a dose-dependent manner. Consequently, APEE showed potent antibacterial activity against both S. mutans and P. gingivalis, which indicates that APEE might be used as a potential antibacterial material for the improvement of oral healthcare.
Kim, Jae-Yoon;Kim, Kyoung-Hwa;Kwag, Eun-Hye;Seol, Yang Jo;Lee, Yong Moo;Ku, Young;Rhyu, In-Chul
Journal of Periodontal and Implant Science
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제48권2호
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pp.70-83
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2018
Purpose: The aim of this study was to evaluate the capacity of single and combined applications of the bark of the stems and roots of Magnolia officinalis Rehd. et Wils. (Magnoliae Cortex) and Zea mays L. (maize) to modulate inflammation in RAW 264.7 cells stimulated with Porphyromonas gingivalis. Methods: RAW 264.7 cells were stimulated with P. gingivalis, and Magnoliae Cortex and/or maize was added. Cytotoxicity and the capacity to modulate inflammation were determined with a methylthiazol tetrazolium (MTT) assay, nitrite production, enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA), and western blotting. Results: Treatment with Magnoliae Cortex and/or maize inhibited nuclear transcription factor ${\kappa}B$ ($NF-{\kappa}B$) pathway activation and nuclear p44/42 mitogen-activated protein kinase (MAPK) and inducible nitric oxide synthase (iNOS) protein expression in P. gingivalis-stimulated RAW 264.7 cells. Moreover, the treatments suppressed cytokines (prostaglandin $E_2$ [$PGE_2$], interleukin $[IL]-1{\beta}$, and IL-6) and nitrite production. Conclusions: Both Magnoliae Cortex and maize exerted an anti-inflammatory effect on P. gingivalis-stimulated RAW 264.7 cells, and this effect was more pronounced when the extracts were combined. These findings show that these extracts may be beneficial for slowing the progression of periodontal disease.
Tavares, Livia Jacovassi;Klein, Marlise Inez;Panariello, Beatriz Helena Dias;de Avila, Erica Dorigatti;Pavarina, Ana Claudia
Journal of Periodontal and Implant Science
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제48권1호
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pp.12-21
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2018
Purpose: The goal of this study was to develop and validate a standardized in vitro pathogenic biofilm attached onto saliva-coated surfaces. Methods: Fusobacterium nucleatum (F. nucleatum) and Porphyromonas gingivalis (P. gingivalis) strains were grown under anaerobic conditions as single species and in dual-species cultures. Initially, the bacterial biomass was evaluated at 24 and 48 hours to determine the optimal timing for the adhesion phase onto saliva-coated polystyrene surfaces. Thereafter, biofilm development was assessed over time by crystal violet staining and scanning electron microscopy. Results: The data showed no significant difference in the overall biomass after 48 hours for P. gingivalis in single- and dual-species conditions. After adhesion, P. gingivalis in single- and dual-species biofilms accumulated a substantially higher biomass after 7 days of incubation than after 3 days, but no significant difference was found between 5 and 7 days. Although the biomass of the F. nucleatum biofilm was higher at 3 days, no difference was found at 3, 5, or 7 days of incubation. Conclusions: Polystyrene substrates from well plates work as a standard surface and provide reproducible results for in vitro biofilm models. Our biofilm model could serve as a reference point for studies investigating biofilms on different surfaces.
Purpose: Direct application of atmospheric-pressure plasma jets (APPJs) has been established as an effective method of microbial decontamination. This study aimed to investigate the bactericidal effect of direct application of an APPJ using helium gas (He-APPJ) on Porphyromonas gingivalis biofilms on sandblasted and acid-etched (SLA) titanium discs. Methods: On the SLA discs covered by P. gingivalis biofilms, an APPJ with helium (He) as a discharge gas was applied at 3 different time intervals (0, 3, and 5 minutes). To evaluate the effect of the plasma itself, the He gas-only group was used as the control group. The bactericidal effect of the He-APPJ was determined by the number of colony-forming units. Bacterial viability was observed by confocal laser scanning microscopy (CLSM), and bacterial morphology was examined by scanning electron microscopy (SEM). Results: As the plasma treatment time increased, the amount of P. gingivalis decreased, and the difference was statistically significant. In the SEM images, compared to the control group, the bacterial biofilm structure on SLA discs treated by the He-APPJ for more than 3 minutes was destroyed. In addition, the CLSM images showed consistent results. Even in sites distant from the area of direct He-APPJ exposure, decontamination effects were observed in both SEM and CLSM images. Conclusions: He-APPJ application was effective in removing P. gingivalis biofilm on SLA titanium discs in an in vitro experiment.
Periodontitis is generally a chronic disorder characterized by breakdown of tooth-supporting tissues, producing dentition loss. Porphyromonas gingivalis (P. gingivalis), a Gramnegative anaerobic rod, is one of the major pathogens associated with periodontitis. Neutrophils are first line defense cells in the oral cavity that play a significant role in inflammatory response. Xylitol is a known anti-caries agent and has anti-inflammatory effects. In this study, we conducted experiments to evaluate anti-inflammatory effects of xylitol on P. gingivalis infected neutrophils for possible usage in prevention and treatment of periodontal infections. P. gingivalis was intraperitoneally injected and peritoneal lavage was collected for cytokine determination. For in vitro study, neutrophils were collected from mouse peritoneal cells after zymosan injection or bone marrow cells. Neutrophils were stimulated with live P. gingivalis and ELISA was used to determine the effect of xylitol on P. gingivalis induced cytokine production. $IL-1{\beta}$, IL-6, $TNF-{\alpha}$ concentration and neutrophil population in the peritoneal lavage was increased in P. gingivalis-infected mouse. Peritoneal cells infected with live P. gingivalis revealed significantly increased production of $IL-1{\beta}$, IL-6 and $TNF-{\alpha}$ at multiplicity of infection of 10. Neutrophils from bone marrow and peritoneal lavage revealed increased production of $IL-1{\beta}$, IL-6 and $TNF-{\alpha}$. Xylitol significantly mitigated P. gingivalis induced cytokine production in neutrophils. Findings indicate that xylitol is an anti-inflammatory agent in neutrophils infected with live P. gingivalis, that suggests its use in periodontitis management.
Porpilyromonas endodontalis is specifically involved in endodontic infections. The bacterium can be isolated almost exclusively only from infected rool canals. P. gingivalis also has been implicated in endodontic infection. Pathogemcity of P. gingival is is attributed to a variety of virulence factors, especially proteases, produced by the bacterium. Importance of P. endodontalis in endodontic infection has been revealed. However, the pathogenic property of P. endodontalis has not been extensively studied. The present study was undertaken to characterize the proteolytic activity of P. endodontalis and compare the activity with that of P. gingivalis which has the most potent and diverse proteases among oral bacteria. For this purpose, culture supematants(SUP) and cell extracts(CE) were obtained from these two bacteria and were subjected to zymography using 15% polyacrylamide gel copolymerized with gelatin, type I, IV collagens or albumin. Hydrolysis of the collagens was further investigated by the cleavage assay using native type I and IV collagens in solution-phase. The results were as follows: 1. P. endodontalis apparently has a proteolytic activity that is comparable with that of P. gingivalis. 2. SUP and CE obtained from P. endodontalis and P. gingival is showed the strongest activity for gelatin, followed by type I and IV collagens, and albumin. 3. In the zymography, no noticeable difference in proteolytic activity for gelatin and albumin between the SUP and CE was observed, but in the cleavage assay using native collagens, the SUP showed a stronger collagenolytic activity than the CE. 4. The gelatinolytic activity of both the SUP and CE from these two bacteria was diminished in the presence of $CaCl_2$ or reducing agents such as ${\beta}$-mercaptoethanol and dithiothreitol(DTT). 5. Type I(calf skin and human placenta) collagenolytic activity of P. endodontalis and P. gingivalis was reduced by DTT but not affected by $CaCl_2$. The inhibitory effect of DTT, however, was reduced to some extent by $CaCl_2$. 6. Type IV collagenolytic activity of these two bacteria was not affected by $CaCl_2$ but increased to some extent in association with the reducing agents. 7. Hydrolysis of albumin by P. endodontalis and P. gingivalis was demonstrated only in the presence of the reducing agents. The overall results indicate that with respect to proteolytic activity, P. endodontalis appears to be as potent as P. gingivalis, or maybe more, and its proteolytic characteristic is similar to that of P. gingivalis. This suggests that P. endodontalis has so potent proteolytic activity that can participate by itself in endodontic infections and apical periodontitis, causing tissue destruction.
문제 진술: 임플랜트 시스템은 임플랜트와 지대주 사이에서 빈 공간이 발생하여 세균의 저장소로서 작용하게 되어 임플랜트 주위 연조직에 염증반응을 야기할 수 있다. 목 적: 이 연구의 목적은 임플랜트-지대주 간극의 미세 누출에 관여하는 치주질환원인균으로 추정되는 Porpyromonas gingivalis, Prevotella intermedia, Tannerella forsythia, Treponema denticola, Aggregatibacter actinomycetemcomitans의 검출률을 조사하는 것이다. 연구재료 및 방법: 시료채취는 27명의 환자들에서 행하였고 소독된 페이퍼포인트를 이용하여 $1{\times}PBS$로 옮겼다. 치주질환원인균의 검출은 16 rDNA에 근거한 종특이적인 프라이머를 지닌 중합효소체인반응을 이용하였다. 결과: 임플랜트 고정체내에서의 Porphyromonas gingivalis와 Prevotella intermedia의 검출률은 59%와 82%였다. 환자의 임플랜트 연구에서는 Porphyromonas gingivalis와 Prevotella intermedia의 검출률은 44%와 82%였다. 환자혀에서의 Porphyromonas gingivalis와 Prevotella intermedia의 검출률은 82%와 82%였다. 결 론: 현재의 임플랜트 시스템은 임플랜트 내부의 세균 군집화와 미세누출을 안전하게 예방할 수 없다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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