Developmental changes of chlorophyll-protein (CP)-complex and plastid membrane proteins during the greening of rape (Brassica napus L.) cotyledons were examined in order to investigate the effect of benzymladenine (BA) on plastid development. The formation of CP-complexes was slightly promoted by BA treatment in early greening stage, at 24 h and 48 h after illumination. However, BA inhibited the development of CP-complexes at 72 h after illumination. On the profiles of plastid membrane proteins with greening time, it was found that the 24 kd protein was increased and the 56 kd protein was decreased in both water control and BA-treated cotyledons. However, the above two traits were retarded under BA treatment, respectively. From the obtained result, plastid development of rape cotyledon during greening was partially affected by interaction between light and BA dependent on its physiological age.
Spermine이 녹화중인 녹두자엽의 엽록소-단백질 복합체(CPs) 및 틸라코이드막 단백질의 변화에 미치는 효과를 조사하였다. 녹화가 진행됨에 따라 Cps형성이 촉진되었으며, 특히 광계의 엽록소-단백질(CP I)이 다량 추척되었다. 광수화 엽록소 단백질(LHCP)은 48시간의 초기 녹화과정에서 중요한 단백질로 나타났다.Spermine처리는 초기녹화과정에서 틸라코이드막의 CPs 축척에 효과적이었다. 색소체막 단백질은 녹화과정에서 많은 변화를 나타내었는데, 56kD단백질은 전 엽록체체서 다량 관찰되었꼬 24kD 단백질은 전 처리구에서 뚜렷한 증가를 보여주었다.Spermine처리에 의해 틸라코이드막 단백질 형성은 대조구에 비해 다소 증가되었다. 이러한 결과들로부터 spermine은 녹화과정에서 색소체의 발달과 색소체막의 안정화에 중요한 작용을 하는 것으로 생각된다.
Spermine이 녹화중인 녹두자엽의 엽록소-단백질 복합체(CPs) 및 틸라코이드막 단백질의 변화에 미치는 효과를 조사하였다. 녹화가 진행됨에 따라 Cps형성이 촉진되었으며, 특히 광계의 엽록소-단백질(CP I)이 다량 추척되었다. 광수화 엽록소 단백질(LHCP)은 48시간의 초기 녹화과정에서 중요한 단백질로 나타났다.Spermine처리는 초기녹화과정에서 틸라코이드막의 CPs 축척에 효과적이었다. 색소체막 단백질은 녹화과정에서 많은 변화를 나타내었는데, 56kD단백질은 전 엽록체체서 다량 관찰되었꼬 24kD 단백질은 전 처리구에서 뚜렷한 증가를 보여주었다.Spermine처리에 의해 틸라코이드막 단백질 형성은 대조구에 비해 다소 증가되었다. 이러한 결과들로부터 spermine은 녹화과정에서 색소체의 발달과 색소체막의 안정화에 중요한 작용을 하는 것으로 생각된다.
This study has been carried out to investigate the development of dictyosome, and roles of dictyosome about the formation of spherosome in the endosperm cell during seed formation of Panax ginseng with electron microscope. The result is as follows; In the endosperm cells of early stage during seed formation of Panax ginseng, plastid, mitochondria, endoplasmic reticulum, dictyosome and ribosomes are evenly distributed in cytoplasm. Electron lucent vesicles derived from dictyosome are observed in endosperm cells. Vesicles that contain low electron density are derived from forming face of dictyosome and releases into the cytosol. This vesicles formed multi vesicular body or fused with the plasma membrane. The spherical spherosomes are formed from dictyosome containing the lipid materials of even electron density and are gradually increased in size and number. Dictyosome is located in between vacuole and spherosome and it's cisternae form a semicircle and a circle. Some membrane of the protein body that accumulate the storage protein are originate from the spherical vacuole which interfused between vesicles and vacuoles derived from dictyosome.
Lincomycin, an inhibitor of plastid protein synthesis, was found to block the synthesis of apoprotein P700 with a molecular mass of 72 kDa and the assembly of the Chl a-protein of PS I. Synthesis of the polypeptides of 48, 43.5, and 32 kDa of the PS II complex is also suppressed. This process is accompanied by the disappearance of the PS Two reaction center Chl a at 683 nm, and of the PS One reaction center Chl a at 690, 696, and 705 nm on the fourth derivative of the absorption spectra at 77K. Lincomycin does not affect the synthesis of LHC subunits. It increases the content of the two main Chl forms of LHC at 648 nm (Chl b) and 676 nm (Chl a). The low-temperature fluorescence ratio F736/F685 is also increased. However, the effect of cycloheximide (an inhibitor of cytoplasmic protein synthesis) leads to the reduction of polypeptides of the light-harvesting Chl a/b-protein complex in the range of 29.5-22 kDa. Under these conditions, the relative amount of Chl b and the F736/ F685 fluorescence ratio decrease significantly. This is obviously the result of blocking the LHC I and LHC II synthesis. At the same time rifampicin and actinomycin D (inhibitors which block transcription in chloroplast and nuclear genome, respectively) inessentially affect the characteristics of these complexes.
과피가 녹색이고 배의 길이가 $250{\mu}$인 미성숙 과정을 거쳐 발아시까지 배 및 배유세포의 미세구조 변화를 관찰한 결과를 요약하면 다음과 같다. 1. 배의 길이가 $250{\mu}$인 미성숙 종자의 배세포는 세포질이 비교적 충실하나 mitochondria의 Cristae 및 plastid는 미분화상태이고 가끔 dictyosome이 관찰되었다. 액포안에는 전자밀도가 높은 globoid 를 함유하는 것도 있었다. 소포체는 대부분 한면소포체이고 외형질에는 spherosome을 많이 함유하고 있었다. 배유세포는 spherosome과 이들로 둘러싸인 전자밀도가 높고 균질성인 protein body로 충만되었고 이들로 인하여 세포기관은 관찰되지 않았다. 2. 과피가 홍색인 종자의 배세포는 cristae가 발달한 mitochondria가 관찰되었으며, 전자밀도가 높은 globoid가 증가하였고 액포는 확장되었다. 배유세포에는 spherosome이 증가하고 있었으며 protein body는 확장되어. 그 내부에는 전자밀도가 높은 globoidal crystal이 분산되어 있었다. 3. 종피가 열개한 종자의 배축의 전형성층과 유아세포에서는 Golgi vacuole과 vesicle이 발달되었으며 mitochondria의 cristae는 매우 분화되었다. spherosome은 매우 많이 나타났고 유근세포, 배축의 주변세포 및 자엽세포의 액포는 매우 분화되었다. 배유세포는 spherosome으로 충만되어 있고 그 내질에는 전자밀도가 높고 작은 입자를 지니고 있었다. Protein body는 단일막으로 둘러싸여 있음이 확인되었다. 세포질내에는 구형체와 spherosome 주변의 세포질에 acid phosphatase의 활성을 나타냈다. 4. 파종시 자엽의 외면부 세포는 spherosome이 급격히 증가하였고 protein body도 관찰되었다. 세포기관들은 분화되어 있었고 전분을 함유하는 색소체가 출현하였다. 5. 파종시킨 후 발아할 때까지 자엽의 외측 $2{\sim}3$열세포, 배축의 주변세포, 유근부 세포에서는 spherosome이 증가하였고 전분립을 함유하는 plastid 도 증가하였다. 배를 구성하는 세포의 내형질의 액포부근에는 mitochondria와 microbody 가 혼재하고 있음이 관찰되었다. 발아시기가 가까워 질수록 배와 연접하는 배유세포에는 액포가 매우 분화되고 spherosome은 감소되는 반면 액포내에는 무정형의 전자밀도가 높은 물질이 증가하였다. 그밖의 배유세포에는 spherosome이 감소됨에 따라 mitochondria는 증가되고 전자밀도가 높은 소구체가 형성되어 증가되었다. Protein body의 외질은 감소되고 전자밀도가 낮은 부위는 확장되며 이는 서로 융합하여 외연부는 없어지고 기질속에 소입자들이 형성되었다. 6. 발아기의 배유세포안에는 spherosome이 감소되고, protein body는 서로 융합되어 한 세포내에 $2{\sim}3$개로 충만되어 있었다.
Plastid proteomics are essential organelles present in virtually all cells in plants and green algae. Plastids are responsible for the synthesis and storage of key molecules required for the basic architecture and functions of plant cells. The proteome of plastid, and in particular of chloroplast, have received significant amounts of attention in recent years. Various fractionation and mass spectrometry (MS) techniques have been applied to catalogue the chloroplast proteome and its sub-organelles compartments. To better understanding the function of the lumenal sub-organelles within the thylakoid network, we have carried out a systematical analysis and identification of the lumenal proteins in the thylakoid of wheat by using Tricine-SDS-PAGE, and LTQ-ESI-FTICR mass spectrometry followed by SWISS-PROT database searching. We isolation and fractionation these membrane from fully developed wheat leaves using a combination of differential and gradient centrifugation couple to high speed ultra-centrifuge. After collecting all proteins to eliminate possible same proteins, we estimated that there are 407 different proteins including chloroplast, chloroplast stroma, lumenal, and thylakoid membrane proteins excluding 20 proteins, which were identified in nucleus, cytoplasm and mitochondria. A combination of these three programs (PSORT, TargetP, TMHMM, and TOPPRED) was found to provide a useful tool for evaluating chloroplast localization, transit peptide, transmembranes, and also could reveal possible alternative processing sites and dual targeting. Finally, we report also sub-cellular location specific protein interaction network using Cytoscape software, which provides further insight into the biochemical pathways of photosynthesis. The present work helps understanding photosynthesis process in wheat at the molecular level and provides a new overview of the biochemical machinery of the thylakoid in wheat.
In order to modify lipid production of Perilla qualitatively as well as quantitatively by genetic engineering, genes involved in carbon metabolism were isolated and characterized. These include acyl-ACP thioesterases from Perilla frutescens and Iris sp., four different $\beta$-ketoacyl- ACP synthases from Perilla frutescens, and two $\Delta$15 a-cyl-ACP desaturases(Pffad7, pffad3). Δ15 acyl-ACP desa turase (Δ15-DES) is responsible for the conversion of linoleic acid (18:2) to $\alpha$-linolenic acid (ALA, 18:3). pffad 3 encodes Δ15 acyl-desaturase which is localized in ER membrane. On the other hand, Pffad7 encodes a 50 kD plastid protein (438 residues), which showed highest sequence similarity to Sesamum indicum fad7 protein. Northern blot analysis revealed that the Pffad7 is highly expressed in leaves but not in roots and seeds. And Pffad3 is expressed throughout the seed developmental stage except very early and fully mature stage. We constructed Pffad7 gene under 355 promoter and Pffad3 gene under seed specific vicillin promoter. Using Pffad7 construct, Perilla, an oil seed crop in Korea, was transformed by Agrobacterium leaf disc method. $\alpha$-linolenic acid contents increased in leaves but decreased in seeds of transgenic Perilla. Currently, we are transforming Perilla with Pffad3 construct to change Perilla seed oil composition. We isolated three ADP-glucose pyrophosphorylase (AGP) genes from Perilla immature seed specific cDNA library. Nucleotide sequence analysis showed that two of three AGP (Psagpl, Psagp2) genes encode AGP small subunit polypeptides and the remaining (Plagp) encodes an AGP large subunit. PSAGPs, AGP small subunit peptide, form active heterotetramers with potato AGP large subunit in E. coli expressing plant AGP genes.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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