In clonal sublines with different metastatic ability derived from Dunning rat prostate tumor, phosphoamino acid levels of cellular proteins were determined. Cell lines with high metastatic ability exhibited 5-fold higher phosphotyrosine level than did cell lines with low metastatic ability, while the contents of phosphoserine and phosphothreonine were similar among cell lines examined, All cell lines showed similar activities of protein tyrosine kinases as well as overall protein kinases. Phosphotyrosine protein phosphatase (PTPP) activities of the cells with high metastatic ability were very low, compared to those of the cells with low metastatic ability, suggesting that the different phosphotyrosine levels among the cell lines were due to the difference in PTPP activities rather than protein tyrosine kinase activities. Cellular activities of prostatic acid phosphatase (PAcP), which has been reported to possess phosphotyrosine protein phosphatase activity, were shown to be inversely related to the phosphotyrosine levels and metastatic abilities of the prostate tumor cells, These results suggest that cellular PAcP activity, regulating phosphotyrosine levels of cellular proteins, is closely connected with the metastatic process in prostate tumor cells and can be utilized as a good biochemical marker for the diagnosis of metastasis of prostate tumor.
Effects of several cytokines($IL-1{\beta},\;TNF_{\alpha},\;and\;IFN_{\gamma}$) have been examined on fetal rat osteoblast-like cells. To investigate whether cytokines play direct causal roles in production of lysosomal enzyme, fetal rat osteoblast-like cells were treated with $IL-1{\beta},\;TNF_{\alpha},\;and\;IFN_{\gamma}$, respectively or combined. And acid phosphatase was determined by biochemical method. Alkaline phosphatase was assayed to determine the effects of $IL-1{\beta},\;TNF_{\alpha},\;and\;IFN_{\gamma}$ on the expression of this enzyme. And also experiment of calcified nodule formation was performed to assess the effects of cytokines on the bone-forming activity of osteoblast-like cells in vitro. Acid phosphatase activity was significantly increased by the addition of $IL-1{\beta}\;and\;TNF_{\alpha}$, whereas decreased by $IFN_{\gamma}$. However, no significant change:: in alkaline phosphatase activity was observed when the osteoblast-like cells were treated with $IL-1{\beta}\;and\;TNF_{\alpha}$. Interestingly, $IFN_{\gamma}$ showed stimulatory effect on alkaline phosphatase activity. The number of calcified nodules was decreased by treatment of cultures with 1 ng/ml $IL-1{\beta},\;20\;ng/ml\;TNF_{\alpha}$, and 500 u/ml $IFN_{\gamma}$ continuously for 21 days, while considerable number of calcified nodules were formed in control group of osteoblast-like cell in culture for 21 days. These results seem to suggest that cytokines may play crucial roles in bone remodeling through the direct action on the osteoblast-like cell.
본 실험은 인산염 분해균을 밀의 근권토양으로부터 분리 동정하고 인산염 분해균의 유기산 생성과 pH와의 관계를 조사하기 위해 실시하였다. 인산염 분해균은 36시간 배양후 선명한 투명대(clear zone)를 형성하였다. API 20E System과 BIOLOG$^{TM}$ analysis를 사용하여 동정한 결과 이 균주는 Entrobacter agglomerans로 동정되었다. Similarity와 distance는 각자 0.656과 4.790로 나타났다. Hydroxyapatite를 함유한 배지에서 E. agglomerans를 배양하는 동안 인산의 농도가 현저히 증가하였으며, pH와 인산의 농도와는 고도의 역상관($r^2=0.933$)을 보였다. HPLC로 분석한 결과 이 균주는 여러 가지 유기산을 생성하였으며 그 중 oxalic acid가 가장 많이 생성되었다. Acid phosphatase는 alkaline phosphatase에 비해서 10-15배의 활성을 보였으며, alkaline phosphatase는 배양 동안 거의 0에 가까운 활성을 보였다. E. agglomerans의 population은 배양 하루 동안 현저히 증가하였으나 그 후 급격히 감소하였다.
Crude extracts of 69 marine organisms (27 salt marsh plants and 42 seaweeds) were screened for the inhibitory activity against the protein tyrosine phosphatase 1B (PTP1) in vitro. The most active extracts were methanol extracts from Derbesia marina (80.6% in inhibitory activity) and Symphycladia latiscula (85.6%) at the concentration of $15{\mu}g/mL$. Methanol extracts of Codium adhaerens and Hisikia fuziformis were moderately inhibitory with 71.2 and 69.1% inhibition, respectively. It was peculiar that only the extracts from seaweeds show inhibitory activity where those from salt marsh plants do not show any significant effect.
The growth and phosphatase (phosphomonoesterase) activity of Chroococcidiopsis culture isolated from the cryptoendoliths of the Antarctic were compared with a similar isolate from the Arizona hot desert. Such cyanobacteria living inside rocks share several features with the immobilized cells produced in the laboratory. This study has relevance because the availability of phosphorus is a key factor influencing the growth of these cyanobacteria in nature, in such unique ecological niches as the hot and cold deserts. Phosphatase activity therefore is of particular importance for these organisms if they are to survive without any other source of phosphorus availability. Also, there is paucity of knowledge regarding this aspect of study in cyanobacterial cultures from these extreme environments. The salient feature of this study shows the importance of specific pH and temperatures for growth and phosphatase activity of both cultures, although there were marked differences between the two isolates. The pH and temperature optima for growth and phosphatase activity (PMEase) of Chroococcidiopsis 1 and 2 were 9.5, $240^{\circ}C$ and 8.5, $40^{\circ}C$ respectively. The $K_m and V_max$ values of cultured Chroococcidiopsis 1 showed lower affinity of PMEase for the substrate compared to the enzyme affinity of the same organism when found within the rocks; Chroococcidiopsis 2 and Arizona rocks containing the same alga however showed similar affinity of PMEase for the substrate. An interesting observation was the similarity in response of immobilized Chroococcidiopsis 1 culture and the same organism in the Antarctic rocks to low light and low temperature stimulation of PMEase. This thermal response seems to be related to the ability of the immobilized Antarctic isolate and the rocks to either cryoprotect the PMEase or undergo a change to save the enzyme from becoming nonfunctional under low temperatures. The free cells of Chroococcidiopsis 1 culture however did not show such responses.
Anisakis simplex sensu stricto와 A. pegreffii의 3기 유충과 4기 유충에서 얻은 excretory-secretory (ES) products 및 somatic extracts의 가수분해효소 활성을 API ZYM kit를 이용하여 비교하였다. Esterase 그룹의 가수분해효소 중 acid phosphatase는 A. simplex (s.s.)와 A. pegreffii 모두에서 높은 활성을 나타냈으며, esterase (C 4)의 경우 somatic extracts에서만 가수분해효소 활성이 나타났는데 A. simplex (s.s.)가 A. pegreffii와 비교하여 3기와 4기 유충 모두에서 2배 가량 높은 활성을 나타냈다. alkaline phosphatase, acid phosphatase 그리고 naphthol-AS-BI-phosphohydrolase의 경우 A. simplex (s.s.)와 A. pegreffii 모두 3기 유충보다 4기 유충에서 더 높은 가수분해효소 활성이 확인되었다. Aminopeptidase 그룹의 가수분해효소 활성은 leucine arylamidase에서 관찰되었는데, somatic extracts의 경우 A. pegreffii 보다 A. simplex (s.s.)에서 가수분해 효소 활성이 두 배 가량 높게 확인되었으며, 대부분의 다른 효소들에서는 활성이 거의 나타나지 않았다. Glycosidase 그룹의 가수분해효소 활성은 N-acetyl-${\beta}$-glucosaminidase, ${\alpha}$-mannosidase 그리고 ${\alpha}$-fucosidase에서 확인되었는데, A. simplex (s.s.) 보다 A. pegreffii에서 높은 가수분해효소 활성을 확인할 수 있었으며, 대부분 4기 유충보다 3기 유충에서 더 높은 가수분해효소 활성이 확인되었다. 이러한 아니사키스속 선충의 종과 유충단계에 따른 가수분해 효소의 활성 차이는 선충의 성장, 탈피, 소화, 섭이 등의 대사과정의 차이에 기인한 것으로 생각된다.
The alkaline phosphatase (K-ALPase) gene of Kluyveromyces fragilis has been cloned (1) and determined its base sequences (2) previously in our laboratory. When the K-ALPase gene was expressed in Escherichia coli and Saccharomyces cerevisiae, it showed a constitutive activity in E. coli, and a derepressed activity in S. cerevisiae in phosphate-limited medium. Northem hybridization experiment was performed to elucidate the transcription level of the K-ALPase gene. Northern experiment showed that transcription level of K-ALPase gene in S. cerevisiae was higher in phosphate depletion, but it was higher in high phosphate medium than in phosphate limited medium in K. fragilis. The transcription initiation site of the K-ALPase gene was determined by primer extension analysis. It matched nucleotide position - 169 in relation to the putative trnslational start site.
조사해역에서의 Phosphatase에 의한 최대분해속도(Vmax)는 $0.26\;{\sim}\;7.09{\mu}M/L/hr$ 로서, 식물플랑크톤 bloom을 보였던 6월27일 조사 시에 높게 나타났으며 수온이 하강하고 클로로필 농도가 낮았던 9월13일 조사결과에서 가장 낮게 나타났다. 식물플랑크톤에 의한 유기 인산염 분해를 알아보기 위해 Specific activity를 구하였다. Phosphatase activity와 Chlorophyll. a의 변화는 유사한 변화를 보여주고 있으며, 이는 식물플랑크톤 이 Phosphatase의 분비에 큰 기여를 하는 것으로 나타났다.
정자기장과 맥동전자기장이 배양 조골세포에 미치는 영향을 알아보고자 MC3T3-E1세포를 각 자기장하에서 배양하여 ALP활성도와 DNA의 합성능을 평가한 결과 다음과 같은 결과를 얻었다. 1. 정자기장을 가한 군에서 자석을 1,2,3개 가한 군($51\~114.8mT$)에서 대조군에 비하여 ALP의 유의성있는 증가가 나타났으며(P<0.05), 자석을 4개 5개 가한 군(150mT)에서는 대조군에 비하여 ALP활성도에 차이가 나타나지 않았다. 2. 맥동성 전자기장에서는 대조군에 비하여 ALP활성도에 유의한 차이가 나타나지 않았다. 3. DNA합성능은 정자기장과 맥동성 전자기장을 가한 군 모두 대조군에 비하여 유의한 차이가 나타나지 않았다. 이상의 결과 정자기장에 의한 교정력은 골세포의 대사과정에 변화를 줄 수 있으므로, 치아이동에 어떠한 영항을 줄 수 있을 것으로 사료된다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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