In order to pursue some physiological studies on organogenesis in ginseng tissue culture, ginseng root explants were cultured on a modified MS medium containing NAA and kinetin. The activities of peroxidase and some enzymes were investigated and their isoenzyme patterns were also observed. The activity of peroxidase decreased by 20% in one week's culture and increased thereafter by 80% in culturing for 7 weeks compared with the control group. Glucose-6-phosphate dehydrogenase activity increased by 400% after culturing for 5 weeks and increased during the days preceeding root formation. The activities of glutamate dehydrogenase and acid phosphatase also increased during the culture. After 3 weeks' culture, new peroxidase isozyme (pH 7.6) appeared and 7 weeks' culture, another new peroxidase isozyme (pH unidentified) appeared. These patterns were also identified by using FPLC. After 7 weeks' culture, a new esterase isozyme of pH 8.5 appeared and isozyme patterns of acid phosphatase were quite changed compared with the isozyme patterns of tissue cultured for 5 weeks. In so far as these new isoenzymes appear distinctively after 7 weeks' culture, root differentiation is supposed to be induced after 7 weeks' culture.
녹두의 자엽에서 peroxidase isozyme을 $(NH_4)_2SO_4$ 침전, Sephadex G-75, DEAE-cellulose 및 DEAE-Sephadex A-50 column chromatography 등으로 63배 정제하여 그 특성 및 결정구조를 조사하였다. Isozyme C는 Rm 값이 0.24로서 분자량이 50,000 dalton인 단량체였다. 이 효소의 반응 최적 PH는 o-dianisidine에 대하여 5.0, guaiacol에 대해서는 6.0, 반응 최적온도는 $70^{\circ}C$였으며 열에 대해서도 비교적 안정하였다. o-dianisidine과 guaiacol에 대한 Km 값은 각각 0.11mM, 60.98mM이었으며, isozyme C에 대한 기질과 cyanide는 경쟁적 저해형식을 나타내었다. Isozyme C는 평면상 직사각형의 결정구조를 하고 있었다.
The microtuber was efficiently formed on SH medium containing 9% sucrose from the in vitro propagated shoot of potato (Solanum tuberosum cv. Sumi). In order to investigate gene expression depending on the development stage of microtuber, we examined the changes of peroxidase and esterase activities, and their isozyme patterns as well. Peroxidase and esterase activities were the highest at the 7 day-culture of the microtuber and subsequently decreased on the stage of microtuberization, whereas esterase activity increased at the stage of 60 day-culture. However, their activities in the ordinary tuber were higher than those of 60 day-cultured microtuber. In addition, in the peroxidase isozyme pattern two new bands of pI 7.05 and pI 4.65 were appeared at the 15- day and 60 day-cultures, respectively, as shown by isoelectric focusing. Various bands in the sterase isozyme pattern were shown at the 7 day-culture, and the band patterns were a large difference, comparing those of shoot and tuber. New bands in the esterase isozyme pattern also appeared at the 15 day- (pI4.52) and 60 day-cultures (pI 4.48). These results suggest that the changes of peroxidase and esterase activities and isozyme patterns are an important factor in the differentiation and development of potato.
동아(Benincasa hispida(Thunb) Cogn)와 달개비 (Commelina communis L.)의 종자, 잎 및 줄기등을 공시재료로 하여 몇가지 효소에 대한 전기영동적 특성을 비교한 결과는 다음과 같다 1. Esterase isozyme의 pattern은 band수나 Rf값에서 현저한 차이를 나타냈으며 동아의 육질에서는 단 1개의 band가 출현하였다. 2. Peroxidase isozyme은 동아의 육질에서 4개의 band가 출현하였으나, 달개비의 줄기에서는 band 가 전혀 없었다. 3. Amylase isozyme의 전기영동대는 동아의 종자 및 육질에서만 각각 1개씩 뚜렷한 band를 나타냈다.
A hydrogenperoxide sensor containing peroxidase extracted from horseradish was constructed and pH effect on its sensing ability was investigated. Current profiles of the biosensor with pH and the electrophoretic analysis showed that horseradish peroxidase consists of two isozymes. Assuming that it is a hypothetical twoisozyme mixture, the current profiles were deconvoluted into two Gaussians. Application of the new Michaelis-Menten equation connoting pH concept to this system enabled to find all the related dissociation constants of the isozyme-substrates and the isozyme-proton complexes and to determine pHs for the maximal isozyme activities.
고추의 잎 절편을 BAP(2 mg/l)와 IAA(1 mg/l)가 첨가된 MS 배지에서 분화를 유도하여 40일 후에 완전한 식물체를 얻을 수 있었다. 또한 분화 단계에 따라 peroxidase와 esterase의 효소 활성과 isozyme 양상을 조사하였는데, 조직별 peroxidase 활성은 발아 10일째의 잎에서 가장 높았으며, isozyme 양상은 10일째에 잎에서 pI 7.2와 pI 6.9의 새로운 band가 나타났고, 14일째에는 잎과 뿌리에서 새로운 pI 3.4 band가, 줄기에서는 pI 5.2의 새로운 band가 나타나 peroxidase의 조직 특이적 발현을 알 수 있었다. 또한, 잎의 재분화가 진행됨에 따라 peroxidase 효소활성이 증가하기 시작하여 배양 14일째에는 대조구에 비해 80% 정도 높은 효소 활성을 나타냈으며, 분화가 진행됨에 따라 band의 양이 증가하며 배양 14일째에는 pI 3.2와 pI 6.5의 새로운 isozyme이 유도되어 peroxidase가 분화와 발생에 관여하고 있음을 시사하였다. 한편, esterase 활성은 14일째에 대조구보다 2배 이상 높은 활성을 보였으며 esterase isozyme 양상은 배양 7일째에 3개의 cathodic band와 1개의 anodic band가 나타남으로써, 이들 isozyme이 분화시기에 밀접하게 연관되었음을 알 수 있었다.
본 연구는 고추 잎 절편으로부터 유도한 callus로부터 체세포 배형성에 따른 peroxidase, esterase 및 MDH의 활성 및 전기영동적 변화를 비교 분석하여 세포분화에 따른 생리, 생화학적인 변화를 알아보고자 하였다. 고추 잎 절편에서 유도된 callus는 호르몬이 첨가 되지 않은 MS 액체배지에서 체세포배를 유도하였을 때 배양 7일째 peroxidase, esterase, MDH의 효소 활성이 가장 높게 나타났으며 특히 peroxidase의 활성도는 배양 12일째 세포내에 비해 배로 방출된 효소의 활성이 4배 정도 높았다. 이와같이 페세포 배형성에 따른 isozyme 의 활성도 및 전기영동적 양상의 배형성과 재분화 과정을 연구하는데 유용할 것으로 사료된다.
The amino acid sequence of basic isozyme 55 of Horseradish Peroxidase (HRP E5) was determined by protein sequencing. HRP E5 consisted about 300 residues, and has a molecular weight of approximately 36,000 $\pm$ 500 dalton. The protein was rich In aspartic acid (14%), arginine(13%), and leucine(11%). The primary structure of HRP E5 was established by sequencing its tryptic (T1-T19) and lysylendopeptic (Al-A3) peptides. The sequence homology between HRP E5 and HRP C (neutral isozyme of horseradish peroxidase) is found to be more than 66%. The highest concentration of identical residues are found on residues 29~56, 90~123, and 155~173, but relatively low on 174~271.
표고버섯(Lentinula edodes)의 동위효소 양상을 표고 연구의 기초 연구의 일환으로 실시하였다. 균사체의 Tris-HCl 완충액에 용해되는 세포내 효소를 nondenaturing polyacrylamide gel 전기영동 법으로 분리후, peroxidase, esterase, superoxide dismutase, acid phosphatase, alkaline phosphatase, alcohol dehydrogenase, ${\alpha}-amylase$ 효소 활성을 측정하였다. 표고는 peroxidase, esterase, superoxide dismutase, acid phosphatase 활성이 검출되었으며, 본 연구에서 사용한 방법으로 alkaline phosphatase, alcohol dehydrogenase, ${\alpha}-amylase$ 효소 활성은 검출되지 않았다. 표고버섯의 peroxidase, esterase band는 배양 기간에 따라 큰 차이가 없이 안정하였으며, 동위효소는 표고의 유전적 연구 및 원형질체 융합 후 융합체의 특성 연구에 중요하다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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