Using the shuttle vector pECCGl between Escherichia coli and Corynebacterium glutamicum and C. glutamicum strain JS231 grown in the medium supplemented with penicillin-G, which inhibits the formation of cross-links in the peptidoglycan of bacterial cell wall, various parameters involved in electroporation system including resistance, electric field strength, capacitance, DNA concentration, and cell density were investigated independently and optimized for the high efficiency transformation of coryneform bacteria. Using cells grown with 0.3U/ml of penicillin-G and harvested at A600 of 0.7-0.8, transformation efficiencies of 107-l08 transformants/$\mu\textrm{g}$ of DNA with Corynebcctertum glutamicum strain JS231 and wild type ATCC13032 were achieved under conditions of 12.5kV/cm of electric field strength, 400 ohms of resistance, $25\mu$F of capacitance, 3$\times$108 cells per transformation(1.2$\times$1010 cells/ml) and 100ng of plasmid DNA per transformation.
This study was to determine the extent of bacteria contamination and resistance to various antibiotics used commonly in microalgal culture. Seven different dose levels of chloramphenicol, dihydrostreptomycin sulphate, neomycin, penicillin G, streptomycin sulphate, penicillin G + streptomycin sulphate, and penicillin G + streptomycin sulphate + chloramphenicol were added to each culture of microalgae. The lethal effects on microalgae and bacteria were the highest in chloramphenicol and the lowest in penicillin G. The axenic culture of bacillariophyceae and dinophyceae was more difficult than that of chlorophyceae and haptophyceae because of their complicate external morphology. The efficient antibiotics and their concentrations for axenic cultures varied with microalgal species. The optimum quantity for antibiotic treatments were 2,000 ppm of dihydrostreptomycin for Chlorella ellipsoidea, neomycin 500 ppm of Isochrysis galbana and Heterosigma ahashiwo, hloramphenicol 500 ppm of Cyclotella didymus, and dihydrostreptomycin sulphate and neomycin 6,000 ppm of Thalassiosira allenii.
Penicillin sensor was manufactured by immobillizing penicillinase with glutaraldehyde on the $H^+$-selective membrane based on PVC-COOH-TDDA. This membrane was not inter fered by $K^+$ ion in Pc-G potassium salt. When enzyme was immobilized with glutaraldehyde, the PVC-COOH matrix was more effective than PVC matrix. Calibration curve calculated from Nernst equation was not linear. But potential was relative to concentration of Pc-G. And maximal potentiometric velocity was also relative to concentration of Pc-G. Therefore, it may be applied to Michaelis-Menten equation. The penicillin sensor was useful for determination of Pc-G at concentration of 0.1~10mM level.
세제에 의하여 대장균의 periplasm에서 penicillin G amidase (PGA)를 방출하는 방법을 연구하였다. 결과적으로 세제와 lysozyme의 혼합 작용이 효과적인 것으로 나타났다. 세포 투과성의 최적 조건을 알아보기 위하여 세제의 종류, 농도, pH, 반응 시간, 온도 등의 영향을 살펴보았다. 그리하여 대장균에서 재조합 PGA를 periplasm에서 방출하는 모델을 만들 수 있었고 방출된 PGA를 농축할 수 있었다. 실리카 구슬을 이용한 고정화 시스템으로 PGA 용액을 농축할 수 있었으며, 더 이상의 정제 과정 없이 순수하게 추출 할 수 있었다. 고정화된 PGA는 penicillin G 생성의 원료인 6-APA를 생산하는데 사용할 수 있었다. 이 방법은 대장균으로부터 재조합 단백질을 추출하는 간단한 방법이며 고정화 PGA를 이용하여 ${\beta}-lactam$ 항생물질의 산업적 생산 이용될 수 있을 것으로 사료된다.
Chlamydophila psittaci is an important intracellular pathogen. Persistent infection is an important state of the host-parasite interaction in this chlamydial infection, which plays a significant role in spreading the organism within animal populations and in causing chronic chlamydiosis and serious sequelae. In this study, a C. psittaci persistent infection cell model was induced by penicillin G, and real-time quantitative PCR was used to study the transcriptional levels of 10 C. psittaci genes (dnaA, dnaK, ftsW, ftsY, grpE, rpsD, incC, omcB, CPSIT_0846, and CPSIT_0042) in acute and penicillin-G-induced persistent infection cultures. Compared with the acute cultures, the penicillin-G-treated cultures showed a reduced chlamydial inclusion size and a significantly decreased number of elementary body particles. Additionally, some enlarged aberrant reticulate body particles were present in the penicillin-G-treated cultures but not the acute ones. The expression levels of genes encoding products for cell division (FtsW, FtsY) and outer membrane protein E encoding gene (CPSIT_0042) were downregulated (p < 0.05) from 6 h post-infection onward in the persistent infection cultures. Also from 6 h post-infection, the expression levels of DnaA, DnaK, IncC, RpsD, GrpE, and CPSIT_0846 were upregulated (p < 0.05); however, the expression level of OmcB in the persistent infection was< almost the same as that in the acute infection (p > 0.05). These results provide new insight regarding molecular activities that accompany persistence of C. psittaci, which may play important roles in the pathogenesis of C. psittaci infection.
Bacillus megaterium ATCC 14945의 penicillin G acylase 유전자의 염기배열을 결정하였다. 이 유전자에는 2,406 염기쌍으로 이루어진 하나의 open reading frame이 존재하는데, 개시코돈의 5' 위쪽에서 Shine-Dalgarno 배열과 promoter로 여겨지는 부분을 발견하였으며, 종결코돈의 3' 아래쪽에서 rho-independent한 전사종결체와 dby사한 구조를 발견하였다. 염기배열로부터 폴리펩티드의 아미노산 배열을 유추하였다. 이 폴리펩티드의 분자량은 91,983 Da이었으며, 아미노 말단 부이에 signal sequence가 존재하였다. 이 아미노산 배열을 여러 다른 penicillin G acylase의 아미노산 배열과 비교하고 분리 정제한 효소를 SDS-polyacrylamide gel 전기영동으로 분석한 결과로부터 이 효소는 92kDa의 전구체로 해독된 후 processing 과정을 거쳐 각각 25kDa과 61kDa의 ${\alpha}$-, ${\beta}$-단위체로 구성됨을 알 수 있었다.
어패류를 포함한 식용 육류중에 잔류하는 항생물질 및 항균성물질을 검출하기 위하여, 분석기기로서 Gas chromatography/ Mass spectrometry(GC/MS)를 사용한 동시분석법을 개발하였다. 여러 항생.항균제중에서 penicillin G, chloramphenicol, thiamphenicol을 중심으로 간단한 전처리과정과 유도체화를 하여 GC/MS 분석을 시행하였다. 전처리 과정을 요약하면 pH 4.0의 0.01 M EDTA-2Na McIlvaine buffer로의 추출, n-hexane으로의 탈지, Bond-Elute $C_{18}$ cartridge에 흡착된 물질의 0.01 M-methnolic oxalic acid로의 용출 그리고 건조 후 유도체화의 순으로 되어 있다. 본 방법에 의한 1 ppm spike시의 회수율은 penicillin G, chloramphenicol, thiamphenicol 각각 63.5%, 76.3%, 84.7%이었고, 검출한계는 각각 시료 g당 0.6, 0.085, $0.084\;\mu\textrm{g}$이었다. 또한 GC/MS 확인과정에서 실제 잔류농도가 1 ppm 이상이면 full scan spectrum으로 확인이 가능하였다. 이와 같은 GC/MS에 의한 잔류물질의 정량 및 확인시험은 앞의 미생물학적 방법의 복원은 물론 식품의 안전성 재고 및 규제독성의 측면에서도 매우 뜻 있는 연구라 하겠다.
Penicillin antibiotics such as penicillin G, ampicillin and amoxicillin have been widely used in the pig industry to control salmonellosis, bacterial pneumonia, and urinary tract infections. Extensive use of antibiotics in veterinary clinics has resulted in tissue residues and bacterial resistance. To prevent unwanted drug residues entering the human food chain, extensive control measures have been established by both government authorities and industries. The demands for reliable, simple, sensitive, rapid and low-cost methods for residue analysis of foods are increasing. In this study, we established a rapid prediction test for the detection of pigs with unacceptable tissue residues of penicillins. The recommended therapeutic doses of three penicillins, penillin G (withdrawal time, 7 days), ampicillin (withdrawal time, 7 days) and amoxicillin (withdrawal time, 14 days), were administered to three groups of 20 pigs each. Blood was sampled before drug administration and during the withdrawal period. The concentration of penicillins in plasma, determined by a semi-quantitative ELISA, were compared to that of internal standard, 4 ppb, which corresponded to the Maximum Residue Limit in milk. The absorbance ratio of internal standard to sample (B/Bs) was employed as an index to determine whether drug residues in pig tissues were negative or positive. That is, a B/Bs ratio less than 1 was considered residue positive, and larger than 1 negative. All 60 plasma samples from pigs were negative to three penicillins at pretreatment. Penicillin G could be detected in the plasma of the treated pigs until day 4 post-treatment and ampicillin until day 2, whereas amoxicillin could be detected until day 10 of its withdrawal period. The present study showed that the semi-quantitative ELISA could be easily adapted to detect residues of penicillin antibiotics (penicillin G, ampicillin and amoxicillin) in live pigs.
Kim, Mee-Jeong;Kim, Su-Won;Bang, Jeong-Hee;Nam, Doo-Hyun
Journal of Microbiology and Biotechnology
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제7권3호
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pp.194-196
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1997
Using the polyclonal antibody for Xanthomonas citri ampicillin acylase raised in Pseudomonas-free Balb/c mice, the immunochemical similarity of several types of penicillin acylases including Erwinia aroideae penicillin V acylase, Escherichia coli penicillin G acylase, Pseudomonas melanogenum and Acetobacter turbidans ampicillin acylases, and Pseudomonas cephalosporin acylase was examined. Among tested, only P. melanogenum ampicillin acylase showed the cross-reactivity with the antibody.
Penicillin G potassium salt was transformed in high yield to 4-acetoxy-3-phenylacetaminoazetidinone by treatment of mercury acetate, ozonolysis and methanol in sequence.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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