• 생명과학회지
• /
• 제13권5호
• /
• pp.642-650
• /
• 2003

인체 신경아세포종의 성장에 미치는 cAMP의 영향을 조사하기 위하여 Ewing's sarcoma 세포주인 CHP-100 세포에 dibutyry1-cAMP 및 8-bromo-cAMP를 처리하였다. 두 종류의 cAMP analog처리 시간 증가에 따라 CHP-100 세포의 증식이 처리 시간 의존적으로 억제되었으며, 이는 핵의 형태변화 및 DNA 단편화 현상을 수반한 apoptosis 유발과 연관성이 있었다. 또한 DNA flow cytometry 분석결과 cAMP는 세포주기 G1기 특이적 arrest를 유발하였다. cAMP 처리에 의하여 retinoblastoma 단백질(pRB)의 인산화가 억제되었으며, 전사조절인자 E2F-1과의 결합이 증대되었다. cAMP는 cyclin-dependent kinase (Cdk) 2 및 cyclin E 단백질의 발현변화에는 영향을 미치지 않았으나, 그들의 kinase 활성은 처리시간 의존적으로 매우 감소되었다. 또한 cAMP 처리에 의하여 Cdk inhibitor인 $p21^{WAF1/CIP1$의 발현이 증가되었으며, 증가된 p21 단백질은 Cdk2와 강한 결합을 형성하고 있었다. 이상의 결과에서 cAMP의 암세포 성장억제 효과에 pRB 및 p21이 매우 중요한 역할을 함을 알 수 있었다.

• Journal of Microbiology and Biotechnology
• /
• 제31권6호
• /
• pp.833-839
• /
• 2021

Bacillus subtilis CH3-5 isolated from cheonggukjang secretes a 28 kDa protease with a strong fibrinolytic activity. Its gene, aprE3-5, was cloned and expressed in a heterologous host (Jeong et al., 2007). In this study, the promoter of aprE3-5 was replaced with other stronger promoters (P_cry3A, P₁₀, P_SG1, P_srfA) of Bacillus spp. using PCR. The constructed chimeric genes were cloned into pHY300PLK vector, and then introduced into B. subtilis WB600. The P10 promoter conferred the highest fibrinolytic activity, i.e., 1.7-fold higher than that conferred by the original promoter. Overproduction of the 28 kDa protease was confirmed using SDS-PAGE and fibrin zymography. RT-qPCR analysis showed that aprE3-5 expression was 2.0-fold higher with the P10 promoter than with the original promoter. Change of the initiation codon from GTG to ATG further increased the fibrinolytic activity. The highest aprE3-5 expression was observed when two copies of the P₁₀ promoter were placed in tandem upstream of the ATG initiation codon. The construct with P10 promoter and ATG and the construct with two copies of P10 promoter in tandem and ATG exhibited 117% and 148% higher fibrinolytic activity, respectively, than that exhibited by the construct containing P10 promoter and GTG. These results confirmed that significant overproduction of a fibrinolytic enzyme can be achieved by suitable promoter modification, and this approach may have applications in the industrial production of AprE3-5 and related fibrinolytic enzymes.

• Animal cells and systems
• /
• 제13권4호
• /
• pp.399-403
• /
• 2009

$p19^{ras}$ is an alternative splicing variant of the proto-oncogene c-H-ras pre-mRNA of $p21^{ras}$. In contrast to $p21^{ras}$, $p19^{ras}$ does not have a C-terminal CAAX motif that targets the plasma membrane and is localized to both the cytoplasm and nucleus. We found that $p19^{ras}$ activated the transcriptional activity of $p73{\beta}$ through protein-protein interactions in the nucleus. p73 is known to play an important role in cellular damage responses such as apoptosis. Although p73 is a structural and functional homologue of p53, p73-mediated apoptosis has not yet been clearly elucidated. In this study, we demonstrate that the interaction between $p19^{ras}$ and $p73{\beta}$ accelerated $p73{\beta}$-induced apoptosis through a caspase-3 dependent pathway. Treatment with DEVD-CHO, a caspase inhibitor, also strengthened $p73{\beta}$-mediated apoptosis through a caspase-3 dependent pathway. Furthermore, the enhanced transcriptional activity of endogenous $p73{\beta}$ by treatment with Taxol was amplified by $p19^{ras}$ overexpression, which markedly increased caspase-3 dependent apoptosis in the p53-null SAOS2 cancer cell line. Our findings indicate a functional linkage between $p19^{ras}$ and p73 in caspase-3 mediated apoptosis of cancer cells.

• 생명과학회지
• /
• 제28권11호
• /
• pp.1316-1320
• /
• 2018

녹차(GT) 추출물의 효과를 인간 유방암 유래 세포인 MCF-7 세포를 사용하여 조사 하였다. GT추출물의 세포 독성 효과를 MTT 방법을 사용하여 관찰한 결과, MCF-7 세포는 현저한 세포 독성 효과를 보였고, 이 독성 효과는 GT추출물 농도 의존적으로 증가하였다. p53과 관련 단백질인 p21/cip1과 CDK2의 연관성을 조사하기 위해 GT추출물 처리 후 웨스턴 분석법을 통해 이들 단백질의 발현을 조사하였다. GT추출물 처리 후, MCF-7 세포에서 p53 단백질의 양은 농도에 따라 현저하게 증가 하였다. p21/cip1 단백질의 발현은 낮은 농도의 GT추출물에서 증가되며, 고농도에서도 감소하지 않았다. 그러나 CDK2의 단백질의 양은 높은 농도의 GT추출물에서 CDK2 발현의 급격한 감소가 관찰되었다. 이 결과는 GT추출물의 처리는 MCF-7 세포에서 p53와 p21/cip1를 증가시켜, 그 결과로 활성화 된 p21/cip1는 CDK2의 발현을 억제 함을 나타내고 있다. GT추출물이 MCF-7 세포의 세포주기에 어떤 영향을 미치는지 확인하기 위하여 FACS 분석으로 관찰한 결과, MCF-7 세포에서 세포주기의 G1 단계가 점차 증가하는 결과를 보였다. 이 결과는 GT추출물의 유방암 세포에서의 항암 효과는 세포주기의 G1 단계에서 MCF-7 세포를 정지시키는 p53에 의해 조절된다는 사실을 명확하게 보여 주고 있다.

• 대한수학회논문집
• /
• 제21권4호
• /
• pp.749-758
• /
• 2006

In [1], we introduced the notion of p-stacks. In this paper, by using p-stacks we characterize $S^*-continuous$ functions, separation axioms, supracompactness and some properties on supratopological spaces. We also introduce the notion of p-supracompactness and study some properties.

• Journal of Yeungnam Medical Science
• /
• 제12권2호
• /
• pp.210-225
• /
• 1995

1983년 6월부터 1993년 5월까지 10년간 영남대학교 의과대학 부속병원에서 결장 및 직장암으로 절제되어, 병리조직학적으로 결장 및 직장암으로 확진된 예 중, 파라핀 포매조직의 상태가 양호한 선암종 67례를 대상으로 하여 면역조직화학적 방법을 이용해서 대장암에서의 $p62^{c-myc}$과 $p21^{ras}$의 발현양상을 검색함으로써 종양유전자 산물과 대장암의 유형, 분화도 및 Dukes stage에 따른 연관성 유무를 관찰한 바 다음과 같은 결과를 얻었다. 결장 및 직장암에서 $p62^{c-myc}$ 발현은 직장암에서 더 많았으며 그 양상은 주로 미만성 반응이 많았고(p<0.05), $p21^{ras}$ 발현은 여자에서 더 많았다(p<0.05). 분화도에 따라서는 고분화 선암종에서 미만성으로 나타났고 강양성 반응의 경향을 보였다. 수정된 Dukes stage와 두 종양유전자 산물의 발현은 비교적 초기에 미만성으로 나타났다. 종양유전자 $p62^{c-myc}$의 발현은 전이된 림프절에서 원발병소보다 미만성, 강양성으로 더 많이 관찰 되었고, $p21^{ras}$의 발현은 원발병소에서 더 양성반응이 많았고 주로 미만성, 강양성으로 나타나는 경향이었다. 환자의 나이, 종양의 육안소견과는 통계학적 유의성이 없었다. 이상의 연구를 요약하면 종양유전자 산물 $p62^{c-myc}$과 $p21^{ras}$의 발현은 대장암 초기 및 고분화 선암종에서 더 많이 나타나는 것으로 생각되었고 환자의 나이, 종양의 육안소견과는 관련이 없는 것으로 사료되었다.

• 한국가축번식학회지
• /
• 제18권3호
• /
• pp.157-165
• /
• 1994

This experiment was examined the effect of splenectomy on the hematology in pregnant wistar rat. Only animals that had been shown regular 4-day estrous cycles for more than two cycles were used. The day after mating with the same male animal ws designated Day 0 of pregnancy. Spleen was removed from Day 0(early), 6(middle) and 13(late) of pregnant rat, respectively. Blood sample was collected at Day 1, 7, 14 and 21 of the pregnancy. 1. RBC was increased significantly(P<0.05) to the progress of pregnancy in control rat. The late splenectomized rats were decreased significantly(P<0.05) at Day 21 of pregnancy than control rats. 2. Hb was increased significantly (P<0.05) at 21th day of pregnancy in late splenectomized groups than others group. 3. In the late splenectomized rats, Ht was decreased significant (P<0.05) due to the progress of pregnancy and decreased significantly (P<0.05) at Day 21 of pregnancy in all splenectomized groups. 4. WBC was increased significantly (P<0.05) at Day 1 of pregnancy in splenectomized groups compared with control. 5. In differential leukocyte rate, the Basophils and Monocytes was not significantly changed. Neutrophils was increased significantly(P<0.05) at Day 14 and 21 than Day 1 and 7 of pregnancy in control. Lymphocytes was decreased significantly(P<0.05) in control due to progress of pregnancy. Neutrophils was increased and Lymphocytes was decreased significantly(P<0.05) in splenectomized groups compared with control.

• Radiation Oncology Journal
• /
• 제15권3호
• /
• pp.187-195
• /
• 1997

목적 : 세포 독성 인자가 유도하는 아포프토시스에 관한 연구가 대부분 In Vitro 연구에 국한되어온 바, In VIVO에서 방사선에 의한 아포프토시스의 유도와 이에 관여하는 유전자들의 발현 양상을 분석하기 위하여 본 연구를 수행하였다. 대상 및 방법 : 마우스 동종암으로서 방사선 민감 종양인 난소암 (OC3-1)과 내성 종양인 간암 (HCa-1)을 모델로 하여 이들 종양이 평균 직경 8 mm로 자랐을 때 25 Gy의 방사선을 조사하였다. 조사 후 다양한 시간 간격으로 조직을 채취하여 아포프토시스의 유도 수준을 분석하며 동시에 이에 관련된 유전자 산물인 p53, $p21^{wart/cip1}$, bax, bel-2 등의 발현을 western blotting 을 이용하여 분석하였다. 종양의 p53 상태는 polymerase chain reaction-single strand conformation polymorphism assay로 분석하였다. 결과 : 모델 종양들의 p53 상태는 둘다 자연형으로 나타났다. 방사선 조사로 OCa-1에서는 아포프토시스가 유도되었으나 HCa-1에서는 아포프토시스가 관찰되지 않았다. OCa-1에서 방사선 조사로 p53, $p21^{wart/cip1}$의 발현이 증가되었으며 bel-2/ bax 비율은 감소하였다. HCa기에서는 p53, $p21^{wart/cip1}$의 발현이 증가되었으나 $p21^{wart/cip1}$은 OCa-1과 비교하여 증가 수준이 미약하였다. bel-2/bax 비율은 현저히 증가하였다. 이와 같은 변화들은 방사선 조사에 선행되거나 조사 후 수시간 내에 일어났으며 아포프토시스의 유도에 선행하거나 일치하였다. 결론 : 아포프토시스의 진행에는 p53, $p21^{wart/cip1}$의 증가 뿐만 아니라 bel-21 bax 비율의 변화 가 관여된다는 것이 In vivo에서 확인되었다. p53가 자연형인 경우에도 그 이하 단계의 유전자 발현 양상이 다르게 나타날 수 있으며 이는 세포 독성 요인을 이용한 암 치료시 결과를 예측하는데 있어서 단일 유전자 발현의 평가와 연계되는 복잡성을 시사하고 있다.

• BMB Reports
• /
• 제36권2호
• /
• pp.223-229
• /
• 2003

The product of a tree (Tabebuia avellanedae) from South America, $\beta$-lapachone, is known to exhibit various pharmacological properties, the mechanisms of which are poorly understood. The aim of the present study was to further elucidate the possible mechanisms by which $\beta$-lapachone exerts its anti-proliferative action in cultured human prostate cancer cells. We observed that the proliferation-inhibitory effect of $\beta$-lapachone was due to the induction of apoptosis, which was confirmed by observing the morphological changes and cleavage of the poly(ADP-ribose) polymerase protein. A DNA flow cytometric analysis also revealed that $\beta$-lapachone arrested the cell cycle progression at the G1 phase. The effects were associated with the down-regulation of the phosphorylation of the retinoblastoma protein (pRB) as well as the enhanced binding of pRB and the transcription factor E2F-1. Also, $\beta$-lapachone suppressed the cyclindependent kinases (Cdks) and cyclin E-associated kinase activity without changing their expressions. Furthermore, this compound induced the levels of the Cdk inhibitor $p21^{WAF1/CIP1}$ expression in a p53-independent manner, and the p21 proteins that were induced by $\beta$-lapachone were associated with Cdk2. $\beta$-lapachone also activated the reporter construct of a p21 promoter. Overall, our results demonstrate a combined mechanism that involves the inhibition of pRB phosphorylation and induction of p21 as targets for $\beta$-lapachone. This may explain some of its anticancer effects.

• 한국환경과학회지
• /
• 제27권5호
• /
• pp.333-340
• /
• 2018

This study aimed to estimate the effect of inoculant application level on chemical composition and bacterial count of fermented chestnut meal (FCM), and its rumen fermentation characteristics. The inoculant contained Lactobacillus acidophilus ($1.2{\times}10^{10}cfu/g$), Bacillus subtilis ($2.1{\times}10^{10}cfu/g$), and Saccharomyces cerevisiae ($2.3{\times}10^{10}cfu/g$). The chestnut meal mixed with molasses, double distilled water, and inoculant at 1 kg, 3 g, 480 mL, and 20 mL ratio for the basal chestnut meal diet. The double distilled water from basal chestnut meal diet was substituted with bacterial inoculant at a level of 0 (Control), 20 (Medium), and 40 mL (High) in the experimental diets. The mixed experimental diets were incubated at $39^{\circ}C$ for 7, 14, and 21 days, respectively. On 7 days of FCM incubation, the contents of crude protein (CP) (quadratic, P=0.043) and neutral detergent fiber (quadratic, P=0.071) decreased by increases of inoculant application levels, whereas bacterial count (quadratic, P=0.065) and rumen $NH_3-N$ (linear, P=0.063) increased. By increases of inoculant application levels on 14 days of FCM incubation, the increases were found on dry matter (DM) (quadratic, P=0.085), CP (quadratic, P=0.059), acid detergent fiber (quadratic, P=0.056), in vitro DM digestibility (linear, P=0.002), rumen total volatile fatty acid (VFA) (linear, P=0.057), and rumen iso-butyrate (linear, P=0.054). However, the decreases were found on bacterial count (linear, P=0.002), propionate (linear, P=0.099), and butyrate (quadratic, P=0.082). On 21 days of FCM incubation, in vitro DM digestibility (linear, P=0.002) and total VFA (linear, P=0.001) increased by increases of inoculant application levels, whereas the contents of CP (quadratic, P=0.034) and neutral detergent fiber (quadratic, P=0.047) decreased. These results indicate that the FCM with a medium level of inoculant application and 14 of fermentation had beneficial effects by increasing DM digestibility and rumen total VFA content, without altering bacterial count.