• Natural Product Sciences
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• 제22권1호
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• pp.41-45
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• 2016

Extraction and fractionation of Pulsatilla koreana flowers followed by, repeated open column chromatography for EtOAc and n-BuOH fractions yielded four flavonoid glycosides, namely, astragalin (1), tiliroside (2), buddlenoide A (3), and apigenin-7-O-(3"-E-p-coumaroyl)-glucopyranoside (4). The chemical structures of these flavonoid glycosides were elucidated on the basis of various spectroscopic methods including electronic ionization mass spectrometry (EI-MS), 1D NMR ($^1H$, $^{13}C$, DEPT), 2D NMR (gCOSY, gHSQC, gHMBC), and infrared (IR) spectrometry. This study represents the first report of the isolation of the flavonoid glycosides from the flowers of P. koreana.

• 한국식품과학회지
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• 제33권3호
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• pp.389-394
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• 2001

오미자 열매로부터 항균활성물질을 분리하기 위하여 methanol 조추출물의 용매분획의 항균력을 측정하였다. 항균활성을 나타낸 methanol 조추출물은 다시 여러 가지 용매로 순차적으로 분배하여 n-hexan층, dichloromethane층, ethyl acetate층, buthanol층과 water층을 얻은 다음, 이들 분배층에 대해 항균활성을 검색한 결과, ethyl acetate층에서 가장 활성이 높게 나타났다. 활성이 높게 나타난 ethyl acetate층은 감압증류한 후, 여러 가지 chromatography를 이용하여 분리, 정제한 다음, MS, $^1H-NMR,\;^{13}C-NMR,\;$, DEPT 및 2D NMR등을 이용하여 항균활성물질의 구조를 동정하였다. 그 결과 오미자의 약리기능을 나타내는 주요성분인 lignan계통의 화합물인 gomisin C로 추정되는 compound를 분리하였고, 다른 하나는 오미자의 정유성분인 trimethylcitrate로 동정하였다. 또한 오미자추출물의 균증식도와 분쇄육의 저장성에 미치는 효과를 검토하기 위하여 식품보장실험을 수행하였다. 그 결과 Salmonella typhimurium에 의해 문제시되는 식품에 천연보존료로서의 이용가능성을 시사하였다.

• 한국미생물·생명공학회지
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• 제33권2호
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• pp.96-105
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• 2005

공시균인 S. longwoodensis IFO 14251의 autoregulators 및 receptor gene 탐색의 일환으로 기존의 Streptomyces속 receptor gene의 공통배열을 primer로 이용하여 PCR을 수행하였다. 예상되는 100 bp 크기의 단편을 pUC19 vector에 ligation하여 E. coli $DH5{\alpha}$에 transformation한 후, plasmid를 분리하여 BamHI을 처리하여 $2\%$ agarose gel에 전기영동한 결과, pUC19 외에 receptor gene PCR product가 100 bp 위치에 존재하는 것을 확인하였다. 형질전환된 plasmid로 PCR을 수행한 후, 염기배열을 결정하여 분석한 결과, Streptomyces sp. 유래의 receptor gene의 일부분임이 확인되었다. 따라서 S. longwoodensis IFO 14251에는 lysocellin 생산에 관여한다고 추정되는 autoregulator receptor protein을 코드하는 유전자가 존재할 것으로 예상되어 100 bp의 PCR product를 probe로 이용하여 Southern 및 colony hybridization을 통하여 4.4 kb의 SphI 단편을 가지는 plasmid(pSLT)를 제작하였고 이를 sequencing한 결과, Streptomyces 속 유래의 autoregulator receptor 단백질을 코드하는 유전자와 3개의 open reading frame(651 bp)을 확인하여 sltR이라 명명하였다. 유전자 해석 결과, 기존의 autoregulator receptor proteins과 비교시 $35{\sim}46\%$의 homology를 나타내었다. 재조합 단백질의 발현을 위해, sltR/pET-l7b plasmid를 제작하고 E. coli BL21(DE3)/pLysS을 host cell로 이용하여 재조합 단백질을 발현시켰다. SltR 재조합 단백질의 정제는 DEAE-Sephacel column chromatography와 DEAE-5PW chromatography(HPLC)를 통해 수행하였다. Gel filtration chromatography(HPLC, 55 kDa)와 SDS-PAGE(28 kDa)를 통해 분자량을 확인한 결과, 재조합 단백질은 dimer형태로 존재하는 것으로 확인되었다. 또한, 결합활성에 있어 A-factor type의 autoregulator에 대해 가장 강한 결합활성을 나타내었다.

• 한국식품영양과학회지
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• 제37권8호
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• pp.979-984
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• 2008

본 연구에서는 머위 엽병의 에탄올 추출물을 용매 극성에 따라 hexane, chloroform, ethyl acetate 및 n-butanol로 분배한 분획물에 대해 전자공여능, 지질과산화 억제능 및 lipoxygenase 저해효과 효과를 살펴봄으로써 항산화능을 측정하였다. 분획물 중 ethyl acetate 분획물의 경우 $100\;{\mu}g/mL$ 농도에서 전자공여능, 지질과산화 억제능 및 lipoxygenase 저해능에서 각각 65.41%, 37.04%, 50.67%로 가장 우수한 항산화능을 나타내었다. 이를 근거로 하여 ethyl acetate 분획물로부터 머위 엽병의 항산화 활성 성분을 규명하기 위하여 open column chromatography를 이용하여 화합물 PJ-4를 분리, 정제하였으며, 1H- 및 13C-NMR 분석을 통해 kaempferol로 동정하였다. 단리된 kaempferol의 항산화 활성을 확인하기 위하여 앞에서 언급한 세 가지 항산화 측정법을 통해 실험한 결과, 농도 의존적으로 활성이 증가하는 양상을 보였다. 특히 $100\;{\mu}g/mL$의 농도에서 전자공여능, TBARS에 의한 지질과산화 억제 및 lipoxygenase 저해실험에서 각각 65.76%, 43.47%, 58.60%로 높은 항산화 활성을 나타내었다. 이와 같은 결과를 통해 kaempferol은 머위 엽병의 항산화 활성에 있어서 기여하는 물질일 것으로 보이며, 이로써 머위엽병을 이용한 천연항산화제 개발 및 활용에 긍정적인 가능성을 제시할 것으로 사료된다.

• 한국식품과학회지
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• 제21권3호
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• pp.391-398
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• 1989

Capillary column GLC를 사용하여 트리글리세리드를 분리하고 분리된 각 peak를 GC/MS의 selected ion monitoring 분석을 통하여 동정하는 트리글리세리드 분자종 분석방법의 적용 타당성을 검토하기 위하여 표준 트리글리세리드 및 옥수수유, 홍화유, 면실유의 트리글리세리드를 시료로 하며 실험하였다. 그 결과 시료유 트리글리세리드는 capillary column GLC(65% methylphenylsilicone)상에서 acyl기의 총탄소수별 및 이중결합수에 따라 분리되고, acyl기의 총탄소수와 이중결합수가 같을 경우는 구성 지방산의 극성차에 따라 분리되는 특성을 보였다. 그리고 분리된 각 분자종 peak의 동정을 위해 트리글리세리드의 GC/MS상의 질량 spectrum중 $RCO^+$와 $[M-OCOR]^+$를 선택차여 사용하였는데, 시료별 트리글리세리드의 주요 분자종은 옥수수유의 경우 OLL, LLL, SLL, PLL, PLO이었고, 홍화유의 경우는 LLL, OLL, PLL이었고, 면실유의 경우는 PLL, PLO, SOO, OLL이었다.

• 한국식품과학회지
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• 제45권2호
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• pp.174-179
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• 2013

본 연구에서는 동양배에 함유된 유용성분을 분자수준에서 밝히고자, 우리나라에서 가장 많이 섭취되고 있는 품종 중의 하나인 추황배를 대상으로 배 과피의 MeOH 추출물을 해리성을 이용하여 용매분획하였다. 얻어진 획분들을 대상으로 항산화 활성에 초점을 맞추어 open column chromatography와 high performance liquid chromatography를 행하여 3종의 항산화 화합물을 단리하였다, 그 결과, BuOH 획분으로부터 화합물 1을, EtOAc-산성 획분으로부터 화합물 2를, 그리고 EtOAc-페놀성 획분으로부터 화합물 3을 단리하고, 각각 NMR 및 MS 분석을 행하여 구조해석을 행하였다. 그 결과, 화합물 1-3은 각각 2-carboxyl 4(1H)-quinolinone (kynurenic acid, 화합물 1), cis-coumaric acid (화합물 2), 그리고 vanillin(화합물 3)으로 동정되었다. 이 3종의 화합물 모두 본 연구에 의해 배로부터 처음 동정되었다. 본 연구결과가 배의 유용성 및 기능성 연구를 위한 기초자료로 활용되길 기대한다.

• 한국작물학회지
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• 제43권3호
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• pp.179-183
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• 1998

The cyanidin 3-glucoside (C3G) extracted from pigmented rice seeds in 0.5% TFA (Trifluoro acetic acid) -95% ethanol was separated by High Performance Liquid Chromatography (HPLC). A HPLC system using a Develosil ODS-5 column and 0.1 % TFA-$H_2O$～0.1 % TFA-$CH_3CN$ gradient elution was selected for separation and quantitative determination of C3G. Regression equation obtained for the standard content of C3G pigment was as Y=21.95293$^*$X-14.726771 (r=0.99$^{**}$). Using this method, 326 domestic and introduced collections were evaluated for the C3G content. The Korean bred cultivar 'Heugjinjubyeo', showed highest C3G content (552 mg/100g seed) among the tested cultivars. Among the pigmented rice cultivars ten cultivars were selected for containing a high content of C3G. The content of C3G per 100g seeds was in high order as follows: Heugjinjubyeo (552mg)>Cheng Chang (321mg)>Kilimgeugmi (240mg)>PI160979-2 (224mg)>Hong Shei Lo (221mg)>Heugnambyeo (191 mg)>Mitak =PIl60979-1 (186mg)>Suwon425 (163mg)>Sanghaehyanghyeolla (108mg). The C3G pigment was not detected in the common white rice cultivars.

• Journal of Microbiology and Biotechnology
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• 제16권1호
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• pp.77-83
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• 2006

A gene encoding a $\gamma-butyrolactone$ autoregulator receptor was cloned from Saccharopolyspora erythraea, and the biochemical characteristics, including the autoregulator specificity, were determined with the purified recombinant protein. Using primers designed for the conserved amino acid sequence of Streptomyces $\gamma-butyrolactone$ autoregulator receptors, a 120 bp S. erythraea DNA fragment was obtained by PCR. Southern and colony hybridization with the 120 bp fragment as a probe allowed to select a genomic clone of S. erythraea, pESG, harboring a 3.2 kb SacI fragment. Nucleotide sequencing analysis revealed a 615 bp open reading frame (ORF), showing moderate homology (identity, $31-34\%$; similarity, $45-47\%$) with the $\gamma-butyrolactone$ autoregulator receptors from Streptomyces sp., and this ORF was named seaR (Saccharopolyspora erythraea autoregulator receptor). The seaR/pET-3d plasmid was constructed to overexpress the recombinant SeaR protein (rSeaR) in Escherichia coli, and the rSeaR protein was purified to homogeneity by DEAE-Sephacel column chromatography, followed by DEAE-ion-exchange HPLC. The molecular mass of the purified rSeaR protein was 52 kDa by HPLC gel-filtration chromatography and 27 kDa by SDS-polyacrylamide gel electrophoresis, indicating that the rSeaR protein is present as a dimer. A binding assay with tritium-labeled autoregulators revealed that rSeaR has clear binding activity with a VB-C-type autoregulator as the most effective ligand, demonstrating for the first time that the erythromycin producer S. erythraea possesses a gene for the $\gamma-butyrolactone$autoregulator receptor.

• Natural Product Sciences
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• 제17권4호
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• pp.367-371
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• 2011

Effects of the extract and fractions from Parasenecio pseudotaimingasa on rat lens aldose reductase (AR) inhibition have been investigated. Among them, the n-BuOH fraction was exhibited good inhibitory potencies ($IC_{50}$ value 1.42 ${\mu}g/ml$). Phytochemical constituents were isolated from the n-BuOH fraction by open column chromatography. Their structures were elucidated as luteolin-7-O-rutinoside (1) and luteolin-7-Oglucoside (2) on the basis of spectroscopic analysis. Compounds 1 and 2 exhibited strong AR inhibitory activity, with $IC_{50}$ values of 2.37 and 1.05 ${\mu}M$, respectively. This is the first report on the isolation of compounds 1 and 2 from P. pseudotaimingasa. These results suggest that P. pseudotaimingasa could be a useful material in the development of a novel AR inhibitory agent against diabetic complications.

• Journal of Microbiology and Biotechnology
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• 제13권1호
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• pp.139-145
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• 2003

The gene encoding Thermus caldophilus GK24 polyphosphate kinase (Tca PPK) was cloned and sequenced. The gene contains an open reading frame encoding 608 amino acids with a calculated molecular mass of 69,850 Da. The deduced amino acid sequence of Tca PPK showed a 40% homology to Escherichia coli PPK, and $39\%$ to Klebsiella aerogenes PPK. The Tca ppk gene was expressed under the control of the T7lac promoter on pET-22b(+) in E. coli and its enzyme was purified about 70-fold with $36\%$ yield, following heating and HiTrap chelating HP column chromatography. The native enzyme was found to have an approximate molecular mass of 580,000 Da and consisted of eight subunits. The optimum pH and temperature of the enzyme were 5.5 and $70^{\circ}C$, respectively. A divalent cation was required for the enzyme activity, with $Mg^2+$ being the most effective.