저온성 세균 Acinetobacter calcoaceticus A1-1의 유류분해 특성을 연구하기 위해 환경적 요인에 대한 영향을 살펴보았다. 이 세균의 성장율과 유화활성도에 대한 적정 환경조건은 온도 $15^{\circ}C$, pH 7.5, 염분도 0-3, 원유농도 0.1로 나타났고 질소원과 인원의 적정농도는$(NH_4)_2S0_4$과 $K_2HP0_4$, 형태로 각각 0.76 mM, 0.057mM이다. 온도에 따른 A.calcoaceticus A1-1의 유류분해 양상을 개스크로마토그라피로 분석한 결과 $10^{\circ}C$, $15^{\circ}C$에서 대부분의 탄화수소 피크가 감소되어 상당 정도의 유류분해를 관찰 할 수 있었다. 반면 $25^{\circ}C$의 경우에는 120시간 배양한 후에도 원유에 포함된 포화탄화수소 화합물들이 부분적으로만 분해되었다.
본 연구에서 분리된 phenanthrene 분해균주의 대부분이 소수성을 나타내었고, 미생물계면활성제를 생산하면서 분해하는 균주보다 phenanthrene 분해능이 높았다. 균주 H6의 경우 phenanthrene 분해시 생산되는 미생물계면활성제는 포도당을 분해할 때도 생산되면 미생물의 성장과 더불어 증가하다가 stationary phase에서 일정하게 유지되었다. H6는 Bacillus subtilis로서 분리된 미생물계면활성제는 lipopeptide이었으며 H6에서 추출한 미생물계면활성제는 pH 2 이하에서 거의 회수되었고, 분산력이 Tween 80이나 Brij 30 등 화학계면활성제보다 높았고 열에 강한 특성을 보였다.
유류분해에 있어 혼합미생물제제의 효과를 평가하기 위해 미생물제제의 처리성능과 microcosm test를 수행하였다. 유류분해세균은 0.5% Arabian heavy crude oil을 유일 탄소원으로 제공된 최소배지를 이용한 연속적인 농후배양을 통하여 분리하였다. 우수 유류분해 미생물조합인 3종의 균주(BS1, BS2, BS4)는 MSM배지에서 5일의 배양기간 동안 지방족 탄화수소를 48.4%, 방향족 탄화수소를 30.5% 생분해하였다. 처리성능 및 microcosm test는 Arabian heavy crude oil을 첨가한 후 3가지 처리조건인 무처리, 무기영양염처리 그리고 무기영양염 및 혼합미생물처리조건에서 유류화합물의 생물분해에 미치는 영향을 조사하였다. 무기영양염처리구와 무기영양염 및 혼합미생물처리구에서 지방족 탄화수소의 분해율은 실험기간 동안 유의하게 향상되었으며 두 실험구간 유의한 차이는 관찰되지 않았다. 그러나 무기영양염 및 혼합미생물처리구에서 방향족 탄화수소의 생분해율은 무기영양염제만을 처리한 시험구와 비교하여 처리성능 시험의 경우 50% 그리고 microcosm test의 경우 13%를 향상시켰다. 본 연구의 결과로부터 혼합미생물제제는 실험실, 처리성능 및 microcosm test에서 지방족뿐만 아니라 방향족 탄화수소의 생물분해를 촉진하였다. 특히 혼합미생물제제는 방향족 탄화수소의 제거를 위한 생물정화기술의 적용에 있어 유용한 도구로 판단된다.
To produce polyhydroxyalkanoate (PHA) from inexpensive substrates by bacteria, vegetable-oil-degrading bacteria were isolated from a rice field using enrichment cultivation. The isolated Pseudomonas sp. strain DR2 showed clear orange or red spots of accumulated PHA granules when grown on phosphate and nitrogen limited medium containing vegetable oil as the sole carbon source and stained with Nile blue A. Up to 37.34% (w/w) of intracellular PHA was produced from corn oil, which consisted of three major 3-hydroxyalkanoates; octanoic (C8:0, 37.75% of the total 3-hydroxyalkanoate content of PHA), decanoic (C10:0, 36.74%), and dodecanoic (C12:0, 11.36%). Pseudomonas sp. strain DR2 accumulated up to 23.52% (w/w) of $PHA_{MCL}$ from waste vegetable oil. The proportion of 3-hydroxyalkanoate of the waste vegetable-oil-derived PHA [hexanoic (5.86%), octanoic (45.67%), decanoic (34.88%), tetradecanoic (8.35%), and hexadecanoic (5.24%)] showed a composition ratio different from that of the corn-oil-derived PHA. Strain DR2 used three major fatty acids in the same ratio, and linoleic acid was the major source of PHA production. Interestingly, the production of PHA in Pseudomonas sp. strain DR2 could not occur in either acetate- or butyrate-amended media. Pseudomonas sp. strain DR2 accumulated a greater amount of PHA than other well-studied strains (Chromobacterium violaceum and Ralstonia eutropha H16) when grown on vegetable oil. The data showed that Pseudomonas sp. strain DR2 was capable of producing PHA from waste vegetable oil.
벙커 C유 1-5%가 주입되었을 경우에는 40.5%, 44.7%가 제거되었으며 본 유류분해균주는 A. calcoaceticus SEBCM-1로 명명하였다. pH 6과 pH 7에서 분해율이 약 73% 정도로 가장 높게 나타났으며 pH 4에서는 약 37% 정도가 미생물 분해에 의해 저감되는 것으로 나타났다. 본균은 다양한 pH조건에서도 생육이 가능하며 일정 수준의 분해력을 가지는 것으로 확인되었다. 본균은 비교적 넓은 온도 범위에서 왕성한 성장이 가능하며 분해가 가능할 것으로 판단된다. 본균의 영양분 조성 중 질소원의 주입량은 $0.5\;g/L{\sim}2\;g/L$ 범위에서 미생물 성장이 활발하였으며 0.1 g/L와 4 g/L로 주입했을 경우에는 미생물 성장이 크게 저하되는 것으로 관찰되었다.
원유를 분해하는 미생물을 석유화합물로 오염된 토양으로부터 분리하였고, 이들은 Acinetobacter sp. A132, Pseudomonas putida A422, Pseudomonas aeruginosa F721, F722, 그리고 Xanthomonas maltophilia B823으로 동정되었다. 이들 미생물의 유류 분해율을 조사한 결과, strain A132가 $6.04g/L{\cdot}day$로 가장 놓은 분해율을 나타내었다. 탄소수가 10개에서 32개 사이의 n-alkane 화합물을 기질로 사용하여 각각의 화합물에 대한 분해능력을 조사한 결과, strain A132와 F722는 대부분의 기질에 대하여 분해능력을 보였다. Strain A422는 n-alkane 화합물에 대한 분해능력은 높지 않았으나, benzene과 xylene을 분해하는 능력을 가지고 있었다. Strain B823은 원유에서는 조금 생장하였으나, 본 연구에서 사용한 다른 기질들에 대해서는 전혀 분해능력을 보이지 않았다. 한편, n-alkane 혼합화합물에 대한 분해율을 GC/FID로 분석한 결과, strain F722는 $nC_7{\sim}nC_{10}$에서 100%, $nC_{11}{\sim}nC_{24}$에서는 80% 이상 의 높은 분해율을 나타내었다.
Biodegradation of fat, oil, and grease (FOGs) plays an Important role in wastewater management and water pollution control. However, many industrial food-processing and food restaurants generate FOG-containing waste waters for which there Is no acceptable technology for their pretreatment. To solve these problems, this study evaluated the feasibility of effective FOG-degrading microorganisms on the biodegradation of olive oil and FOG-containing wastewater. Twenty-two strains capable of degrading FOGs were isolated from five FOG-contaminated sites for the evaluation of their FOG degradation capabilities. Among twenty-two strains tested, the lipase-producing Pseudomonas sp. strain D2D3 was selected for actual FOG wastewater treatment. Its biodegradability was performed at 3$0^{\circ}C$ and pH 8. The extent of FOG removal efficiency was varied for each FOG tested, being the highest for olive oil and animal fat (94.5% and 94.4%), and the lowest for safflower oil (62%). The addition of organic nitrogen sources such as yeast extract, soytone, and peptone enhanced the removal efficiency of FOGs, but the addition of the inorganic nitrogen nutrients such as $NH_4$Cl and $(NH_4)_2SO_4$ did not increase. The $KH_2PO_4$ sources in 0.25% to 0.5% concentrations showed more than 90% degradability. As a result, the main pathway for the oxidation of fatty acids results in the removal of two carbon atoms as acetyl-CoA with each reaction sequence: $\beta$-oxidation. Its lipase activity showed 38.5 U/g DCW using the optimal media after 9 h. Real wastewater and FOGs were used for determining the removal efficiency by using Pseudomonas sp. strain D2D3 bioadditive. The degradation by Pseudomonas sp. strain D2D3 was 41% higher than that of the naturally occurring bacteria. This result indicated that the use of isolated Pseudomonas sp. strain D2D3 in a bioaugmentating grease trap or other processes might possibly be sufficient to acclimate biological processes for degrading FOGs.
CHOI, SUNG-CHAN;KAE KYOUNG KWON;JAE HAK SOHN;SANG-JIN KIM
Journal of Microbiology and Biotechnology
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제12권3호
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pp.431-436
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2002
Effects of fertilizer additions for oil degradation were examined in sand seashore mesocosms. Within 37 days, up to $85\%$ removal was achieved by the addition of slow-release type fertilizer (SRF) with the initial degradation rate of 423.3 mg oil $(kg sand)^-1\;day^-1$. The removal was mostly of biological origin based on the changes of $C_17$ /pristane and $C_18$/phytane ratios from 2.60 to 0.81 and from 3.55 to 1.29, respectively. The addition of oleophilic fertilizer (Inipol EAP22) was less effective and resulted in the removal of $64\%$ of the added oil ($3\%$, v/v) with a lower initial degradation rate. Petroleum-degrading bacteria had achieved a value of $1{\times}10^8$ CFU $(g sand)^-1$ at Day 3 and this peak exactly coincided with the initial degradation in the SRF-treated mesocosm. In this mesocosm, surface tension values were decreased drastically during Days 3 and 8, suggesting that microbially-produced surface-active agents actively enhanced the oil degradation rate and cell proliferation. Although the Inipol-treated mesocosm appeared to show significantly enhanced oil degradation compared to that of the untreated control mesocosm, Inipol was found to be less effective than SRF in enhancing a true oil-degrader when compared under similar experimental conditions.
Microorganisms utilizing petroleum as substrate were screened from the seawater in Pusan coastal area. Among them, fifty strains utilized bunker-A oil as a sole carbon and energy source. Five of these fifty strains were selected to experiment this study. According to the taxonomic characteristics of its morphological, cultural and biochemical properties, the selected stains were named Pseudomonas sp. EL-12, Flavobacterium sp. EL-15, Acinetobacter sp. EL-18, Enterobacter sp. EL-27 and Micrococcus sp. EL-43, respectively. The optimal medium compositions and cultural conditions for assimilation of bunker-A oil by the selected strains were 1.5-2% bunker-A oil, 0.1% $NH_4NO_3$, 1-1.5% $MgSO_4$.$7H_2O$, 0.05-0.15% KCl, 0.1-0.15% $CaCl_2$.$2H_2O$, 2.5-3.5% NaCl, initial pH 8-9, temperature 3$0^{\circ}C$ and aeration, respectively. The utilization and degradation characteristics on the various hydrocarbons by the selected stains were showed that bunker oil, n-alkane and branched alkane compounds were highly activity than cyclic alkane and aromatic hydrocarbon compounds.
Biosurfactant-producing bacteria, showing strong crude oil degrading activity, were isolated from the caverns of National Oil Storage Basement. From the results of biochemical and molecular biological tests, the isolate was identified as Pseudomonas fluorescens PD101. It grows well on liquid media at temperature range from $20^{\circ}C\;to\;37^{\circ}C,$ but it does not produce biosurfactant when grown at $37^{\circ}C$ or at higher temperature. The biosurfactant was stable at broad pH range from 5 to 11 and under heat treatment condition of $100^{\circ}C$ for 30 min. The biosurfactant produced dark blue halo around the colony when grown on SW agar plates, which could confirm the biosurfactant as one of rhamnolipid group. The 700 bp of PCR product could be amplified from DNA of P. flurorescens PD101 by using PCR primers designed from rh1A gene of P. aeruginosa, and it showed $99\%$ of sequence homology with rh1A gene of P. aeruginosa encoding rhamnosyltransferase 1.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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