Ochratoxin A was produced from Aspergillus ochraceus ATCC 18472 which was then orally administered into the experimental mice to study the toxic levels of ochratoxin A. AELISA (enzyme-linked immunosorbent assay) method which is more rapid and safe than conventional analytical method, was developed by using ochratoxin A antibody. This method was successfully used to measure the levels of ochratoxin Ain blood, liver and kidney of mice. In order to produce a large amount of ochratoxin A to study toxicity in the mice, Aspergillus ochraceus ATCC 18412 was incubated in the rice medium and as a result 0.5 g of ochratoxin A form rice medium (kg) was produced after extraction and purification Feed consumption and gain in body weight of mice with ochratoxin A at a level of $10 \mu\textrm{g}/g$ body weight was significantly (p<0.05) reduced as compared with control during period of 3 weeks. Ochratoxin A-BSA conjugate was made by putting 13 mole of ochratoxin A on I mole of BSA. This conjugate was used to develop ELISA method. The minmum detection level of ochratoxin A by established ELISA method was 0.5 ppb. After oral adminstraton of ochratoxin A dose of $10\;\mu\textrm{g}/g$ every two day for 3 weeks, concentration of ochratoxin A was measured in the blood, liver and kidney by ELISA method. The level of ochratoxin A was $11\;\mu\textrm{g}/dl,\;0.9 \mu\textrm{g}/g\;and\;3.7\;\mu\textrm{g}/g$ in the blood, liver and kidney, respectively.
이전의 연구 결과에 나타난 바 있는 막걸리 중 ochratoxin A의 낮은 회수율(<50%)은 시료 내 본 곰팡이독소의 추출 혹은 전처리 과정의 개선이 필요함을 지적하였다. 본 연구에서 막걸리 시료의 균질화에 이용되던 추출 용액을 PBS 용액 대신 3% sodium bicarbonate 용액으로 채택할 경우, 80% 이상의 첨가된 ochratoxin A가 회수되어 그 검출이 용이해졌다. 한편 개선된 해당 분석법의 막걸리 시료에 대한 적용 가능성을 알아보기 위하여 국내 시판 중인 살균막걸리 30점을 대상으로 분석한 결과 밀 막걸리 2점에서 ochratoxin A가 검출되었고(0.8, 2.1 ppb), 그 결과를 다시 HPLC-ESI-MS로 확정하였다. 본 연구를 통해 수행된 개선된 시료 전처리 방법(3% sodium bicarbonate)과 병행된 IAC 및 HPLC-FD 분석법은 막걸리를 대상으로 한 ochratoxin A의 오염 조사에 유효한 분석법임이 확인되었다.
We established ELISA method which is more rapid and safe than conventional analytical method, and then analyzed concentration of ochratoxin A in the rices by ELISA method. The results were as follows: 1. Since ochratoxin A molecular does not contain the group for coupling reaction, it was first proposed to have the function of an antigen. As a result of conjugation of ochratoxin A-BSA derivatives, one molecular of BSA was conjugated with 13 moleculars of ochratoxin A. 2. On the basis of established ELISA to apply for immuno analytical method of ochratoxin A, the minimal level of detection by ELISA method was at 0.5 ppb. 3. Rices (42) were collected from homes of Kyoungnam districts through November 1992 to December 1992, as a result of analysis, two of these were positive. Rice samples of R-1 and R-9 represented ochratoxin A levels of 6.0 ng/g and 10 ng/g, respectively.
한국내에서 재래적인 방법에 의하여, 생산, 시판되고 있는 전통 발효식품인 메주 (12종), 된장 (28종) 및 간장 (28종)을 전국에서 수거하였다. 이들로부터 OA 생성하는 fungi를 분리하였다. 분리된 균으로 다시 Ochratoxin A 생성 유무를 관찰하였으며, 개괄적인 균 동정도 시도하였다. 1. Ochratoxin A를 정량조사(定量調査)한 표준곡선의 작성결과(作成結果), 감도 (Sensitivity)는 20 pg/tube 수준 이었다. 2. 본 실험에서 이용한 OA 의 분석 방법에서 OA 의 회수율(回收率)은 90% 이상 이었다. 3. 각 시료(試料)에서 분리(分離)해낸 222 fungi 중 Ochratoxin A를 생성하는 것은 39 isolates로 나타났으며, 이 중 대부분이 Aspergillus 속, Penicillium 속 그리고 Pae-cilomyces 속 이었다. 4. 전통 발효식품인 메주,된장,간장내의 곰팡이중 Ochratoxin A 생성곰팡이의 생성률은 각각 19.27%, 18.30%, 14.70%으로 나타났으며 0.2g / 2 petridish 이상의 OA 생성률은 20.5% (8/39)로 나타났다. 또한 Ochratoxin A 생성에 대한 몇가지 추론도 함께 하였다.
시설 원예산물 중 곰팡이 독소 생성능이 있는 균주의 오염여부를 조사하기 위해 진주를 비롯한 서부 경남 일원과 경북 안동 근교에서 가지, 메론, 배추, 상추, 오이, 수박, 참외, 토마토, 딸기, 및 그 토양 등의 시료를 수집하여 ochratoxin A 생성균의 오염정도를 관찰하였다. 분석방법은 indirect competitive ELISA 법을 사용하였으며, HPLC법과도 비교 분석하였다. 그 결과 경남 일원과 경북 안동 근교에서 총 192점의 시료를 분리하여 균분리를 실시한 결과 Aspergillus속 142균주, Penicillium속 153균주를 분리하였다. 분리된 균은 SLS배지로 $28^{\circ}C$, 15일간 배양한 후 indirect competitive ELISA 법에 의해 ochratoxin A의 생성여부를 검색하였다. 그 결과 Penicillium속 5균주에서 ochratoxin A 생성이 확인되었으며 검출량은 $0.084{\sim}2.128\;{\mu}g/mL$이었고, 수박에서 분리한 균주가 $2.128\;{\mu}g/mL$로 가장 많은 ochratoxin A를 생산하였다. 그러나 Aspergillus속은 모두 음성반응을 나타내었다. ELISA법에서 ochratoxin A를 생성하는 것으로 나타난 균주를 HPLC법에 의해 확인한 결과 ochratoxin A의 생성이 확인되었으며 생성량은 ELISA 결과와 비슷하였다.
국내 전통식품 중에 함유되어 있는 ochratoxin A를 검출할 수 있는 신속, 정확한 분석방법을 확립하고자 immunoaffinity column과 $C_{18}$ Sep-Pak cartridge를 비교 후 분리도와 회수율이 우수한 immunoaffinity column으로 전처리 방법을 사용하였으며 HPLC 검출한계는 $0.5{\mu}g/kg$로 나타났다. 오염도조사를 위하여 시판되는 장류(고추장, 된장, 간장 각 20건) 60건을 수거하여 분석한 결과 고추장 3건, 된장 2건, 간장 1건에서 $0.5-1.3{\mu}g/kg$ 수준으로 검출되었으며 수거된 선식 40건에서는 ochratoxin A가 검출한계이하 수준이었다. 이는 일부 외국의 규격치인 $5-50{\mu}g/kg$와 비교해 볼 때 낮은 수준이었다.
Ochratoxin A와 aflatoxin은 곰팡이 독소 생산 균주가 자연 발효되는 식품에 오염되거나 발표식품의 종균을 분별없이 선택했을 때 검출 될 수 있다. 본 연구에서는 다양한 배양 환경이 ochratoxin A와 aflatoxin의 생산에 주는 영향에 대해 연구하였다. Aspergillus usamii KFRI 999와 A. awamori KFRI 983의 배양 온도, 배양 배지, 배양 시간을 달리하여 ochratoxin A생산 정도를 분석하였다. 또한 초기 pH, 온도, 배양 시간, 배양 배지를 다르게 하였을 때 A. flavus KACC 41403와 A. oryzae KACC 46471가 생산하는 aflatoxin의 양을 평가하였다. Ochratoxin A와 aflatoxin의 양은 HPLC로 분석하였다. 연구 결과, 곰팡이 독소는 배양 온도에 큰 영향을 받는 것으로 나타났다. A. oryzae KACC 46471는 aflatoxin을 생산하지 않았다. 곰팡이 독소를 생산하는 균주는 모두 $30^{\circ}C$에서 가장 높은 독소 생산량을 보였다. A. awamori KFRI 983은 PDA 배지에서 가장 적은 ochratoxin A 생산량을 보였다. 본 연구 결과는 다양한 식품의 ochratoxin A와 aflatoxin 저감화에 유용하게 활용 될 수 있다.
To evaluate the influence of ochratoxin A on the pharmarcokinetics of gentamicin, gentamicin concentrations in the serum, renal cortex and medulla together with parameters of the renal function and histological changes were compared between ochratoxin A-treated rats (0.1 mg of ochratoxin A/kg of body weight, ip, daily for 14 days) and normal rats. Gentamicin was given with a single intramuscular injection (10mg/kg of body weight). Ochratoxin A resulted in an increase of the half-life, the area under the concentration-time curve, the apparent volume of distribution and a decrease of the total body clearance of gentamicin, and accumulated significantly (p<0.01) more gentamicin in the kidneys.
The aim of this study was to screen the contamination by ochratoxin A of mycotoxins in various medicinal herbs. We conducted a survey of ochratoxin A in medicinal herb on the retail market in Incheon in 2016. 116 medicinal herb samples were evaluated for the ochratoxin A contamination. They were analyzed for ochratoxin A using immunoaffinity column and high-performance liquid chromatography(HPLC)-fluorescence detection and the positive samples were confirmed using HPLC-tandem mass spectrometry. Ochratoxin A was detected in 4 medicinal herb samples; the concentrations of ochratoxin A were containing between 20.11 and $372.90{\mu}g/kg$. This study shows that in general, this kind of commodity may be contaminated by mycotoxins. Also this contamination is not limited to only aflatoxin of mycotoxins.
To isolate the ochratoxin A producing strains from agricultural products and soil in Youngnam districts, rice (37), unhulled rice (10), barley (20), unhulled barley (3), corn (21), soil (26), meju (25), malt (8), soybean (26) and peanut (15) were collected from homes and markets of Youngnam districts through September 1992 to November 1992. 187 strains of Aspergillus spp. and Penicillium spp. were isolated from 191 samples. As a result of screening by TLC, 36 strains expressed fluorescent spot and a same Rf value of standard ochratoxin A, and 9 strains of them were identified as ochratoxin A producing strains by HPLC.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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