• 핵의학기술
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• 제23권2호
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• pp.25-28
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• 2019

GFR 검사는 신장의 기능을 평가하는 지표이다. 정확한 진단을 위해서 GFR 값은 상당히 중요하다. 체내검사와 체외검사 GFR 값을 비교하였고, 모든 GFR 값 기준은 체외검사로 하였다. 성인 환자 30명을 대상으로 하였다. 정상적인 위치에 신장이 있는 환자 27명과 특이한 위치에 신장이 있는 환자 3명(1. 선천적 신장 기형 환자, 2. 신장 이식 환자, 3. 마제형 신장 환자)을 대상으로 하였다. 검사 장비로는 GE Healthcare Infinia Hawkeye SPECT를 사용하였다. 체내검사 방법은 검사 30분전 물 $500m{\ell}$를 드시게 하였고, 환자 table과 detector 1, 2의 거리를 32 cm으로 하였고, $^{99m}Tc-DTPA$ 555 MBq으로 전체 주사기 계수(full syringe counts)를 측정한 후 신장 동적검사를 하였다(flow-1분, clearance-20분). 그리고 빈 주사기 계수(empty syringe counts)를 측정하였고, 3가지 방법(1. tonnensen 2. taylor 3. manual)으로 신장의 깊이를 측정하여 GFR 값을 구하였다. 모든 GFR 값은 gates method로 구하였다. 체외검사는 채혈을 통해서 GFR 값을 구하였다. 정상적인 위치에 있는 환자들의 경우는 체내검사와 체외검사의 GFR 값은 유의미한 차이가 없었다 (p> 0.05). 하지만 특이한 위치에 신장이 있는 환자의 경우는 수동(manual)방법으로 신장의 깊이를 측정하여 구한 GFR 값이 체외검사 GFR 값과 상당히 비슷하게 나왔고, 편차는 다음과 같다(1.선천적 신장 기형 환자: 6.4%, 2. 신장 이식 환자: 22.0%, 3번째 마제상 신장 환자: 2.0%). 그러므로 정상적인 위치에 신장이 있는 성인 환자들에 대해서는 어떤 방법으로 신장의 깊이를 이용하여 구하여도 체외검사 GFR 값과 유의미한 차이는 없었고, 특이한 위치에 신장이 있는 환자들에 대해서는 수동방법으로 신장의 깊이를 측정하여 GFR 값을 구하는 것이 가장 효과적이라고 사료된다.

• BMB Reports
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• 제30권2호
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• pp.106-112
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• 1997

The effect of cryopreservation on extracellular matrix was studied with the ultimate objective of permiting a prediction of the tendency of aorta conduit tissue to calcify following transplantation. Cryopreserved and fresh porcine aorta conduit tissues were extracted using guanidine-hydrochloride (Gdn-HCl) followed by sequential digestion of the tissues with collagenase, elastase, and papain. Glycosaminoglycans (GAGs) of the proteoglycans (PGs) were isolated and quantitated. Gdn-HCl extracted about 61% and 62% of the total GAG (proteoqlycan) material from cryopreserved and fresh tissues, respectively. Collagenasesolubilized proteoglycans from Gdn-HCl extracted tissue represented 20% and 13%, respectively, of the total GAGs present in cryopreserved and fresh tissues. Subsequent elastase hydrolysis of collagenase-digested tissue released about 11% of total GAGs from cryopreserved tissue and 16% from fresh tissue. The remaining 8%, from cryopreserved tissue, and 9%, from fresh tissue, of the total GAGs were obtained after using a papain hydrolysis. There was essentially no difference between fresh and cryopreserved tissues in the relative distribution of proteoglycans in the extracts and digestions except in the initial digestion step where more proteoglycans were obtained from collagenase solubilization of cryopreserved tissue than fresh tissue (p<0.05). The histologic status of the fresh and cryopreserved porcine aortic conduit did not differ markedly. The normal tissue architecture was not affected markedly by the cryopreservation procedure as neither alteration of elastic structure, fibrous proteins nor alteration of nuclear distribution or smooth muscle cell morphology was detected. Quantitative tissue mineral studies revealed that the mean calcium content of the cryopreserved aorta conduit tissue $(165{\pm}3\;{\mu}g/g\;wet\;tissue)$ was higher than that of the fresh tissue $(105{\pm}4\;{\mu}g/g\;wet\;tissue)$ $(p<0.05)$. The mean phosphorus content was $703{\pm}35\;{\mu}g$ wet tissue from cryopreserved tissue and $720{\pm}26\;{\mu}g$ wet tissue from fresh tissue. The study indicates that there is no significant alteration in the distribution of PGs in properly cryopreserved tissue, but the total calcium level appears to be increased in tissue cryopreserved by the cryopreservation process used in this study.

• 한국동물번식학회:학술대회논문집
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• 한국동물번식학회 2001년도 발생공학 국제심포지움 및 학술대회 발표자료집
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• pp.62-62
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• 2001

Development of effective activation protocols is of great importance for improving the success of cloning and subsequent transgenic. Three methods for oocyte activation, including 5μM ionomycin (5 min) alone, ionomycin＋1.9 mM 6-dimetylaminopurine (DMAP, 3 hrs) and ionomycin＋10㎍/㎖ cycloheximide(CHX, 3 hrs) were compared for their effects of pronuclei(PN) formation, development, developmental velocity and ploidy of parthenotes to IVF control in bovine. In group of ionomycin＋DMAP, the oocytes having more 3 PN were significantly(P〈0.05) higher than in groups of ionomycin alone and of ionomycin＋CHX (45.5% vs. 0 and 0%, respectively). Activation with the ionomycin alone, ionomycin＋DMAP and ionomycin＋CHX resulted in cleavage rates of 30, 85.5 and 57.9%, respectively. The blastocysts rate of parthenotes activated by ionomycin＋DMAP treatment was significantly higher (12.3%, P〈0.05) than those of other treated groups. Chromosome analysis shows that ionomycin＋DMAP treatment greatly increases the incidence of chromosomal abnormality of the parthenotes. When compared the developmental velocity at 24 hrs after insemination and activation, 27% eggs in IVF control and 55% in DMAP treatment out of total cleaved eggs developed to 2-cell stage, respectively. Developmental velocity of parthenotes activated by ionomycin ＋DMAP treatment was significantly (P〈0.05) faster than others. From the results, we may conclude that DMAP treatment to the oocytes accelerates developmental velocity resulting in both the higher incidence of chromosome abnormality and of PN formation suggesting that CHX combined with ionomycin is suitable DMAP for the purpose of successful nuclear transplantation.

• Reproductive and Developmental Biology
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• 제28권1호
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• pp.71-76
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• 2004

Gene delivery is one of the keen interests in animal industry as well as research on gene functions. Some of the in vivo gene delivery techniques have been successively used in various tissues for the gene therapy and transgenesis. Despite intensive efforts, it still remains to overcome problems of limited local and regional administration and low transgene expression. To improve the efficiency of gene delivery, a new procedure was tested. We injected exogenous DNA containing LacZ into the female or male gonads and then pulsed electric field. Electroporated gonads showed positive X-gal staining in many seminiferous tubules of the porcine fetal gonads. Exogenously introduced LacZ genes were also expressed in female porcine gonad. In addition, we demonstrated efficient gene delivery in gonad of adult mouse. Furthermore, we succeed to generate genetically modified germline cells showing GFP and positive X-gal signals. The results suggest that the newly developed gene delivery is an effective way of in vivo transfection in mammals. The developed gene delivery procedure should be useful in producing transgenic animals when combined with primary cell culture and nuclear transplantation.

• 대한핵의학회지
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• 제29권1호
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• pp.79-83
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• 1995

정상기능 이식신장 50예와 비정상기능 이식신장 7예의 $^{99m}Tc-MAG_3$를 이용한 신장스캔에서 EI를 구하여 이식신장의 배설기능을 정량적으로 측정하였다. 이식신장의 $^{99m}Tc-MAG_3$ 신장기능곡선에서 정상기능 이식신장의 평균 EI는 $2.21{\pm}0.51$이었으며, 95% 신뢰구간은 2.01-2.87이었다. 비정상기능 이식신장에서는 평균 EI가 $0.74{\pm}0.18$로 1이하의 수치를 보여, 이식신장의 간질에 임파구의 침윤이나 세뇨관의 괴사등에 의해 관류와 배설기능의 장애를 초래하여 신실질과 수집관내에 방사능 동위원소의 저류가 나타났음을 뜻한다. 그리고 EI, $T_{max}$, $T_{1/2}$, BUN, 혈청 Creatinine의 정상기능 이식신장군과 비정상기능 이식신장군의 비교에서 통계학적으로 유의한 차이가 있었다(p<0.0001). 그러므로 이식 후 EI의 측정으로 이식신장의 기능상태를 알 수 있고 거부반응 및 신세뇨관 괴사 등의 합병증을 조기에 찾아내는 지표로 사용할 수 있을 것으로 사료된다.

• 대한핵의학회지
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• 제36권4호
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• pp.271-276
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• 2002

목적: 저자들은 이식 신장의 깊이를 이식 환자에서 초음파로 실측한 후 오차를 최소화하고 신뢰할 수 있는 신장 깊이의 대표값을 정하여 이식 신의 사구체 여과율을 보다 정확하게 측정하고자 하였다. 대상 및 방법: 신장 이식술 직후 초음파검사와 신 신티그라피를 모두 시행 받은 이식 신 수여자 54명(남자 26명, 여자 28명)을 대상으로 하였다. 초음파 검사에서 측정한 신장 깊이를 이용하여 이식 신장 깊이의 전체 평균 값, 남 여 평균 값, 남 여 중앙값을 구하였고 이들을 이용해 Gates 법으로 산출한 각각의 사구체 여과율을 초음파로 구한 신장 깊이로 산출한 사구체 여과율 (이하 실측 사구체 여과율)과 비교하여 그 상관도를 구하였다. 또한 환자들의 크레아티닌 수치, 신장, 체중, 연령, 성별, 체표면적등에 따라 분류된 환자군 간에 실측 사구체 여과율과 남녀 중앙값을 이용한 사구체 여과율에 유의한 차이가 있는지를 t 검정과 ANOVA로 검정하였다. 결과: 이식 신장 깊이는 $3.20{\sim}5.96cm$까지 분포하며 남자에서 신장 깊이의 평균값과 표준 편차는 $4.09{\pm}0.65cm$이었고 여자에서는 $4.24{\pm}0.78cm$이었다. 남자 신장 깊이 중앙값은 4.36 cm이었고 여자에서는 4.14 cm였다. 신장 깊이의 남 여 평균값 보다 중앙값을 통해 구한 사구체 여과율이 실측 사구체 여과율에 더 잘 일치하였다. 중앙값을 이용한 사구체 여과율과 실측 사구체 여과율의 차이간은 환자들의 크레아티닌 수치, 연령, 성별, 신장, 체중, 체표면적등에 따라 분류된 환자군 간에 통계적 유의한 차이가 없었다. 결론: 이식 신의 사구체 여과율을 Gate법으로 측정할 때 이식 신장 깊이의 대표값으로 중앙값을 적용하면 간편하게 신뢰할 만한 결과를 얻을 수 있다.

• 대한핵의학회지
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• 제33권6호
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• pp.519-526
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• 1999

목적: 이식 신장에서 시행한 Tc-99m MAG SPECT 스캔의 유용성을 평가하고자 하였다. 대상 및 방법: 신장 이식환자 30명, 120 스캔을 연구대상으로 하였다(남:여=15:15, 평균연령 35.0세). 수술 후 3일, 7 일, 14일 및 28일에 $555{\sim}740$ MBq의 Tc-99m MAG3를 순간 주사하여 평면스캔을 시행하고, 배뇨한 후 즉시 SPECT 스캔을 실시하였다(평균 SPECT 스캔 시작 시간: 평면스캔 후 7.8분). 결과: SPECT 스캔은 전체 환자 30명 가운데 26명(86.7%)에서, 전체 120 스캔 가운데 84 스캔(70%) 에서 판독 가능한 영상화질을 보여, 비교적 일관성 있게 판독 가능한 영상화질을 제공할 수 있음을 알았다. 30명 가운데 16명(53.3%)의 이식신장은 SPECT 및 평면스캔에서 정상 소견을 보였고, 나머지 14명(46.7%)은 SPECT 스캔에서 국소방사능 감소 혹은 증가의 이상소견을 보였는데, 이 가운데 평면스캔에서도 이상소견을 보인 환자는 5명(35.7%) 뿐이었고, 모두 국소방사능 감소 소견이었다. 따라서, SPECT 스캔이평면스캔에 비해 훨씬 더 많은 추가적인 국소 이상을 검출할 수 있다는 사실을 알 수 있었다. SPECT 스캔에서 국소방사능 감소 소견을 보인 환자는 8명이었으며, 정상 신기능을 보인 환자가 3명, 급성 세뇨관 괴사 3명, 그리고 급성 거부반응이 있었던 환자가 2명이었다. 국소방사능 감소는 국소적 관류이상에 의한 것으로 추정되었으나, 정상적인 불균일 방사능 분포의 가능성을 배제하지는 못하였다. 공여신장에 동맥변이가 있었던 환자는 30명 가운데 10명이었고, 이 가운데 4명이 국소방사능 감소 소견을 보였다. 연속적으로 시행한 SPECT 스캔은 방사능 감소의 정확한 원인을 확진하는 추가검사의 시행여부를 결정하는데 도움이 될 수 있을 것으로 생각되었다. 급성 세뇨관괴사나 급성 거부반응이 있었던 환자는 30명 가운데 10명이었으며, 이 가운데 국소방사능 감소 소견을 보인 환자는 5명으로 정상 신기능을 보인 환자에 비해 높은 빈도를 보였으나, 방사능 분포의 이상과 임상경과 간의 관계는 분명하지 않았다. 국소방사능 증가 소견이 있었던 환자는 6명이었으며, 국소방사능 증가는 국소적 배설기능 장애에 의한 것으로 추정되었으나, 정맥혈 정체와 같은 다른 원인도 생각해 볼 수 있으므로, 정확한 원인을 알기 위해서는 추가적인 연구가 필요할 것으로 생각된다. 결론: Tc-99m MAG3 SPECT스캔은 용이하게 시행할 수 있으며, 평면영상보다 많은 경우에 추가적인 국소 이상을 검출할 수 있다. 앞으로 이러한 이상소견의 임상적 의의에 대한 연구가 더 필요하겠다.

• 한국가축번식학회지
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• 제22권4호
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• pp.425-435
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• 1998

본 연구는 핵이식 효율을 증진시키기 위하여 소의 핵이식에 있어서 MII 의 탈핵난자의 활성화 방법과 공핵란으로써 개별배양과 그룹배양된 수정란을 사용하여 할구분리시 발견할수 있는 할구의 크기별로 대ㆍ소로 구분하여 핵이식에 미치는 영향을 비교하여 다음과 같은 결론을 얻었다. 1. 핵이식에 있어 MII의 탈핵난자에 5$\mu$M ionomycin 에서 5분 처리후 2.0 mM DMAP 을 4시간동안 처리구, 탈핵 후 체외성축으로부터 39~43시간에 2.0 mM DMAP 올 4시간동안 처리구와 탈핵후 체외성숙으로부터 39~42시간에 실온에 3시간 두어 활성을 유도한 처리구에서 융합율은 각각 68, 74.7와 72.8%를 보여 유의적인 차이를 나타내지 않았으며, 배반포기배로의 발달율에 있어서도 10.0, 14.3와 9.0%로써 처리구간의 유의적인 차이는 보이지 않았다. 하지만 핵이식 후 7일째 배반포기 배로 발달한 수정란의 할구수에서는 각 처리구 별로 79.2개, 73.4개 그리고 53.2개로 체외성숙으로부터 39~42시간에 실용에 3시간 두어 활성화를 유도한 처리구가 다른 처리구에 비하여 유의적으로 낮게 나타났다 (P＜0.05). 2. 수정후 90시간 개별 배양 또는 그룹배양된 수정란의 평균할구수는 11.1 개로 같게 나타났으며 할구분리시 할구의 크기는 평균 46.8, 46.6$\mu\textrm{m}$로 나타났으며, 두 그룹 모두 46$\mu\textrm{m}$를 기준으로 large 와 small 로 나누었을 때 개별배양에서는 할구의 크기가 42.0, 50.9$\mu\textrm{m}$로 측정되었으며, 그룹배양에서는 41.6, 50.6$\mu\textrm{m}$로 측정되었다. 수정후 114시간 개별 및 그룹배양된 수정란의 평균할구수는 16.8개와 17.6개로 나타났으며, 할구분리시 할구의 크기는 평균 39.3, 38.7$\mu\textrm{m}$로 나타났다. 두 그룹 모두 38$\mu\textrm{m}$ 를 기준으로 Large 와 small로 나누었을 때 개별배양에서는 할구의 크기가 42.5, 35.2$\mu\textrm{m}$로 측정되었으며, 그룹배양에서는 42.1, 34.8$\mu\textrm{m}$ 로 측정되었다. 3. 핵이식 수정란의 세포융합율에 있어서 수정 후 90시간 개별배양된 수정란의 small 과 large 의 할구를 공핵체로 사용한 처리구에서 69.2 와 72.3%, 그룹배양된 수정란의 small 과 large의 할구를 공핵체로 사용한 처리구에서는 71.6와 76.3%의 융합율을 보여 유의적으로 차이를 나타내지 않았으며, 핵이식 수정란의 배반포기배로의 발달율에 있어서도 각 각 11.1, 10.2, 12.2 그리고 13.0%의 발달율을 보여 유의적인 차이를 보이지 않았다. 4. 수정 후 114 시간 개별배양된 수정란으로부터 분리된 small과 large의 할구를 공핵체로 사용한 처리구에서 핵이식 수정란의 세포융합율에 있어서 각각 71.0, 71.4, 69.9 및 77.1% 의 융합율올 보여 유의적인 차이를 나타내지 않았으며, 핵이식 수정란의 배반포기배로의 발달율에 있어서도 각각 11.4%, 8.0%, 17.2% 그리고 12.9% 의 발달율을 보여 유의적인 차이를 보이지 않았다. 이상의 결과로 보아 핵이식 수정란을 효율적으로 생산하기 위하여 수핵난자의 세포질에 ionomycin 과 DMAP 의 혼합처리로 탈핵난자의 활성화를 유도하는 것이 효율을 증진시킬 수 있었다고 본다. 또한 공핵수정란을 수정 후 90시간과 114시간 개별 배양하여 할구를 공핵체로 핵이식에 이용하였을 때도 그룹배양에 비하여 효율이 떨어지지 않음을 알 수 있었으며, 수정란의 할구 크기의 차이가 핵이식 수정란의 생산효율에 영향을 미치지 않음을 알 수 있었다.

• 한국수정란이식학회지
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• 제9권2호
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• pp.145-152
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• 1994

The suitable electric stimulation is essential for activation and fusion of oocytes before or after nuclear transplantation The present study was undertaken to determine the optirnal condition for the parthenogenetic activation of in vitro rnatured(IVM) bovine oocytes by electric stimulation. Different direct current(DC) electric voltage of 1.0, 1.5 and 2.0 kV/cm and pulse duration of 30, 60 and 120 $\mu$sec were applied to the JVM nocytes in 0.3 M mannitol solution containing each 100 $\mu$M CaCl$_2$ and MgCl$_2$. IVM occytes at 24, 28 and 32 hours Post-maturation(hpm) were also electrically stimulated at 1.5 kV /cm, for 60 $\mu$ sec. The stimulated nocytes were then co-cultured in TCM-199 solution containing 10% fetal calf serum with bovine oviductal epithelial cells for 7~9 days in a 5% $CO_2$ incubator at 39$^{\circ}C$ ~ Their activation and in vitro development to morula and blastocyst were assessed under an inverted microscope. The higher activation rates 62.8 and 63.4% and in vitro de- velopment rates to morula and blastocyst 5.1 and 10.9% were shown in the oocytes stimulated at the voltage of 1.0 and 1.5 kV/cm than 2.0 kV/cm, respectively. No signifi- cantly(P<0.05) different activation rate was shown in JVM oocytes stimulated for 30, 60 and 120 $\mu$sec, but developmental rates to morula and blastocyst was significantly(P<0.05) higher in the oocytes stimulated for 30 $\mu$sec(6~3%) and 60 $\mu$sec(10~0%) than 120 $\mu$sec(0~ 0%). The aged oocytes at 28 and 30 hpm showed significantly(P<0.05) higher activation rates(72~7 and 79.7%) than the oocytes at 24 hpm(50~9%)~ Also, their developmental rates to morula and blastocyst were significantly(P<0.05) higher in the nocytes at 28(14.3%) and 32 hpm(15.9%) than 24 hpm(3.6%). From these results, it can be suggested that the optimal electric stimulation for IVM bovine occytes is a DC voltage between 1.0 and 1.5 kV/cm, pulse duration of 30 or 60 $\mu$sec, and the optimal age of IVM oocytes for electric activation is at 32 hpm.

• 한국가축번식학회지
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• 제20권3호
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• pp.239-250
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• 1996

The objective of the present experiments were to determine whether micromanipulative and electro-stimulation conditions for blastomere survival overlapped those for oocyte activation in porcine. Eggs selected for in vitro development potential of blastomeres isolated from 4-cell embryos and oocyte activation by electrostimulation were equilibrated for 5~10 min, in 0.3M sucrose solution containing 7.5$\mu\textrm{g}$/ml cytochalasin B, and then electrostimulated for 30$\mu$sec using one pulse of 100, 120, 150 or 180 volts DC with electrodes 0.2mm apart. Single blastomeres were inserted into empty zona pellucida prior to electrostimulaticn. Then they were cultured in 20${mu}ell$ drops of fresh BECM to observe their developmental ability in vitro in a humidified incubat or at 38.5$^{\circ}C$. The results obtained from these experiments are as follows : 1. When one pulse of 100, 120, 150 or 180 volts DC for 30$\mu$sec were applied to porcine oocytes having the slit formed on zona pellucida for activation, activation rates were 65.1, 66.7, 70.7 and 91.7%, respectively. Higher activation rate was observed in 180V. 2. Infact oocytes incubated for 30 min, in 0.3M sucrose solution after electrostimulation were significantally different from control group with increasing of voltages(p<0.05). When voltages used for electrostimulation were increased, activation rates of oocytes were improved in all treatment groups. 3. When zona punctured-oocytes were only electrostimulated, or incubated in 0.3M sucrose solution for 30 min. after electrostimulation at 180 volt DC, activation rates were 90.5 and 95.5%, respectively. And activation rates of zona punctured-oocytes were significantly different from the groups for which zona pellucida was not punctured(P<0.05). 4. When single blastomeres form 4-cell transferred into empty zona pellucida were incubated for 0, 15 and 30 min. in 0.3M sucrose solution after electrostimulation using one pulse of 180 volt DC for 30 $\mu$sec, developmental rates of electrostimulated-single blastomeres to blastocyst were 72.5, 59.0 and 51.2%, respectively, and the ratio of control group developed to blastocyst were 80.0%. 5. The average cell number in electrostimulated-blastomeres developed to blastocyst were 7.9~10.8, and reduced than the cell number in diploid control ; Also cell number decreased with increasing of voltages. The results of these experiments indicate that the optimal condition for achieving in vitro developmental ability of single 4-cell blastomeres and oocyte activatin is 1 pulse, duration 30 $\mu$sec. in 180 volt, and incubation of blastomeres and oocytes in 0.3M sucrose solution after electrostimulation was not significantally different from another treatment groups. The results also show that this condition is suitable for nuclear transplantation using porcine eggs.