생물검정결과의 분석에 있어서 약량일반응곡선과 반치사농도의 추정법으로 Probit 변환법이 널리 사용되어왔으나 산출과정이 복잡하고 변환식의 계산이 매우 어려운 관계로 계산이 쉽고 간편한 Logit 법을 사용하여 잠체의 핵다각체 바이러스의 흰불나방에 대한 병원성 조사결과를 분석하여 Probit 법에 의 한 분석결과와 비교하였다. 위의 두가지 추정방법에 의한 사충율과 반치사약량의 계산결과 계산법간에 차이를 인정할 수 없었으므로 계산이 간편한 Logit 법이 금후의 생물검정결과의 해석에 도움이 될 것으로 생각된다.
Japanese encephalitis virus (JEV) envelope (E) protein holds great promise for use in the development of a recombinant vaccine. Purified recombinant E (rE) protein may be useful for numerous clinical applications; however, there are limitations in using the Escherichia coli expression system for producing high-quality rE protein. Therefore, in this study, the yeast expression system was used to generate the rE protein. For protein production using the yeast system, the full-length JEV E gene was cloned into Pichia pastoris. SDS-PAGE and immunoblotting analysis demonstrated that the rE protein had a molecular mass of 58 kDa and was glycosylated. The predicted size of the mature unmodified E protein is 53 kDa, suggesting that post-translational modifications resulted in the higher molecular mass. The rE protein was purified to greater than 95% purity using combined ammonium sulfate precipitation and a SP-Sepharose Fast Flow column. This purified rE protein was evaluated for immunogenicity and protective efficacy in mice. The survival rates of mice immunized with the rE protein were significantly increased over that of Hyphantria cunea nuclear polyhedrosis virus E protein (HcE). Our results indicate that the rE protein expressed in the P. pastoris expression system holds great promise for use in the development of a subunit vaccine against JEV.
세계적(世界的)으로 양잠지역(養蠶地域)에서 큰 피해를 주는 핵다각체병(核多角體病)은 양잠현장(養蠶現場)에서 잠실(蠶室) 잠구류(蠶具類)의 철저한 포르말린 소독에도 불구하고 예방효과가 의문시(疑問視)되는 경우가 발생하며, 이는 병원체의 존부(存否) 만으로 본 질병(疾病)의 만연(蔓延)이 설명될 수 없기 때문이라는 사실을 실험병리학적(實驗病理學的)으로 입증(立證)하였다. 핵다각체병(核多角體病)의 발생(發生)을 조장(助長)하는 불량(不良) 환경요인(環境要因)을 파악하기 위하여 1979년부터 1993년 까지 15년간 한국 일본 필리핀 등지에서 57건의 사육사례를 조사하였다. 환경상태(環境狀態)와 발병사례(發病事例)의 연관성을 분석하므로써 발병생리(發病生理)와 관련된 환경요인(環境要因)을 해명한 결과, 고름병 발생빈도(發生頻度)는 상엽육과 인공사료육 간에 비슷한 경향을 나타내었고, 잠실 잠구류의 소독(消毒)방법에서는 포르말린 소독(消毒) 여부(與否)에 따른 차이가 인정되지 않았다. 교잡종(交雜種)은 원종(原種)보다 핵다각체병(核多角體病) 발생율이 다소 높은 수준이었으며, 특히 애누에때 부터 장기간 통기불량(通氣不良)인 사육환경에서는 발병률(發病率)이 현저하게 높았다. 또한, 1993년부터 1997년 까지 5년간의 실증시험(實證試驗)에서는 잠실(蠶室) 및 잠구류(蠶具類)의 청소와 사육실의 강제순환식(强制循環式) 환기(換氣)로 사육환경을 개선하므로써 인체(人體)에 유해(有害)한 농약을 사용하지 않고도 누에 핵다각체병(核多角體病) 발생을 효율적으로 제어할 수 있음을 입증(立證)하였다.
새우의 갑각에 흰점을 유발하는 특징을 가진 WSBV는 Baculovirus의 일종으로 여러 종류의 새우에 높은 치사율을 보이는 병원체로서 새우양식에 막대한 피해를 주고 있다. 본 연구에서는 국내에서 양식중인 대하에 질병을 유발한 WSBV의 특성을 알아내고자 치사한 새우로부터 바이러스의 게놈을 클로닝하여 재조합클론(E3)을 분자생물학적으로 분석하였다. E3의 염기서열을 분석한 결과, 이 클론은 AcNPV를 포함한 지금까지 알려진 어떠한 바이러스와도 뚜렷한 상동성(60%)을 보이지 않아 WSBV가 기존의 바이러스와 구분되는 새로운 바이러스임을 알 수 있다. E3의 염기서열에 기초하여 한쌍의 PCR 프라이머를 작성하였다. 병든 새우로부터 분리한 DNA를 30회 증폭한 결과, 예상크기의 산물을 얻을 수 있어 이 방법은 바이러스의 감염여부를 알아낼 수 있는 진단법으로도 활용가능하다.
The usefulness of host range expanded recombinant viruses for economical viral insecticide and expression vector system has been studied. Host range expanded recombinant viruses, RecS-B6 and RecB-8, constructed by cotransfection of Bombyx mori nuclear polyhedrosis virus (BmNPV) and Autographa californica NPV (AcNPV), and a host range expanded AcNPV recombinant, Ac-BH, constructed by substitution of the 0.6Kb fragment of the BmNPV helicase gene were compared. The restriction enzyme digestion patterns showed that RecS-B6 and RecB-8 had expanded host ranges by genomic recombination and were more similar to genome of AcNPV than that of BmNPV. SDS-PAGE and PCR analysis showed that the polyhedrin gene of RecS-B6 and RecB-8 was derived from BmNPV genomic DNA. The morphology of polyhedra of recombinant viruses showed a slight difference between the two host cells, Sf and BmN cells, indicating that the morphology of polyhedra was influenced by host cells. The bioassay data for insect larvae showed that Ac-BH, compared to wild type viruses, had superior pathogenicity against Bombyx mori larvae but inferior pathogenicity against Spodoptera exigua larvae. Although the pathogenicity was lower than that of wild type viruses in both larvae, RecS-B6 showed the pathogenicity in both larvae. These results suggested that Ac-BH was a less useful economical insecticide than random genomic recombinant virus RecS-B6.
To use recombinant viruses with wider host range as viral insecticides, we investigated the characteristics and pathogenicity of host range expanded recombinant viruses in insect cells. We compared host range expanded recombinant viruses, RecS-B6 and RecB-8, constructed by cotransfection of Autographa californica nuclear polyhedrosis virus (AcNPV) and Bombyx mori NPV (BmNPV), to host range expanded AcNPV, Ac-BH, by substitution of the 0.6 Kb fragment of the BmNPV helicase gene. Restriction endonuclease profiles of RecS-B6 and RecB-8 DNAs were different from those of parent viruses. Nucleotide sequence analysis of the 0.6 Kb region in the putative helicase gene of RecS-B6 and RecB-8 showed that their structures were identical to the counterpart region of BmNPV. Comparison of viral replication of these recombinant viruses in Sf-21 and BmN-4 cells showed that Ac-BH, compared to wild type viruses, replicated well in BmN-4 cells but poorly in Sf-21 cells. In contrast, RecS-B6 and RecB-8 replicated relatively well in both cells compared to parent viruses. These results may imply that random genomic recombinant viruses, RecS-B6 and RecB-8, possess better potential as viral pesticides than helicase-mediated recombinant virus, Ac-BH.
1. 본 조사는 현재 우리나라에 보존되어 있는 계통을 전부 수집하여 Virus병에 대한 저항성을 계통별로 조사함으로써 잠견생산에 막대한 피해를 주는 Virus병에 대하여 저항성이 강한 계통을 선발하는 동시에 선발된 결과는 앞으로 저항성품종 육성제료로 삼고저 하였다. 2. 가잠의 핵형다각체 Virus병에 대하여 저항성이 강한 계통은 N$_4$, N$_{6}$, N$_{46}$, $C_{85}$, E$_{111}$로써 log ED$_{50}$ 값이 0.799~1.611 범위내에 있으며 강한 계통으로서는 N$_{10}$, $C_{62}$, N$_{70}$, N$_{79}$, $C_{106}$이고 log ED$_{50}$의 값은 5.159~7.258 범위내에 있다(표 4참조) 그러고 일본계통이 가장 강하여 log ED$_{50}$이 3.770이 3.770이고 중국계통의 log ED$_{50}$은 3.564로서 다음이고 가주계통의 log ED$_{50}$이 3.381로서 가장 강한 계통으로 나타났다. 감염율의 회귀방정식의 방향계수는 0.1~0.6범위로서 우리나라 보존계통의 저항성의 균일성이 비교적 작을 경향을 다타냈다. ra계통별 저항성의 유전현상에 대한 해명과 품질육성을 위한 구체적인 응용방법에 관한 구명은 차후의 숙제로 남게 되었다. 3. 잠체의 수분 및 회분과 Virus병에 대한 저항성과는 상관관계가 없었고(표 8참조) 다만 감잠비율(보통 사육법에 의하여 조사된 것)과는 고도의 상관관계가 있다. 즉 4면 기잠에서는 수분 및 회분과는 관계가 없었고 3면 기잠에서는 수분은 +0.326 회분은 +0.326으로서 고도의 유의성을 나타냈고 1면과 2면의 회분에서는 각각 +0.520과 +386으로서 고도의 유의성을 나타냈으나 수분에서는 유의성이 없었다(표7 참조). 4. 교배조간에 있어서는 기호 205가 모든 형질에 있어서 가장 우수하였다. 특히 204는 강건성이 매우 좋았으나 견질에 있어서 대조구보다 약간 떨어진다. 기호 212는 견질을 약간 떨어지고 감잠비율은 보통이나 수견량이 공시품종중 가장 많았다(표 11). 5. 종합적으로 기술하면 Virus에 대한 저항성이 강한 상기 몇 계통은 강건성 품종?성을 위한 기초자료가 될것이며 계속 여러 계통외 특성을 조사하여 특성 보존을 위한 품종보존의 완벽을 기하여야겠다.다.
이산화염소는 높은 항생효과로 살균제로 사용되고 있고, 저곡해충을 대상으로 살충 효과도 보이고 있다. 본 연구는 이 이산화염소의 유용 효과를 넓히기 위해 이 물질이 항암 및 항바이러스 활성을 나타낼 수 있는 지를 검증하였다. 인체에 나타나는 5종의 암 세포주에 대해서 이산화염소의 세포독성을 분석하였다. 유방암 2종 세포주(MCF-7, MDA-MB-231)와 대장암 3종 세포주(LoVo, HCT-116, SW-480) 모두에 대해서 이산화염소는 높은 세포 독성을 나타냈다. 이러한 세포독성은 이산화염소의 활성산소 유발 효과에 기인된다. 이산화염소가 처리된 암세포주는 모두 세포내 높은 활성산소를 형성하였다. 이는 대조구로서 일반 곤충 세포주와 비교하여 훨씬 높은 활성산소를 지녔다. 반면에 항산화제인 비타민 E를 처리하면 이러한 세포독성이 크게 줄어 암 세포에 대해 높은 세포독성은 활성산소에 의해 기인되었다는 것을 입증하였다. 또한 이산화염소는 서로 다른 바이러스에 대해서 항바이러스 활성을 나타냈다. 곤충병원성 바이러스이고 이중 가닥의 DNA 게놈을 지닌 벡큘로바이러스의 일종인 Autographa californica nuclear polyhedrosis virus (AcNPV)는 이산화염소 노출에 따라 활성을 잃어 핵다각체 형성 능력이 크게 둔화되었다. AcNPV에 대한 이산화염소의 항바이러스 효과는 반응 시간에 비례하여 증가했다. 식물병원성 바이러스이고 단일가닥의 RNA 게놈을 지닌 담배모자이크바이러스는 이산화염소 노출에 따라 바이러스 함량이 줄었고, 담배에 대한 병원력도 낮아졌다. 따라서 본 연구는 이산화염소가 항암 및 항바이러스 활성을 지니며, 이는 이 물질에 의한 높은 활성산소 유발에 기인된 것으로 판명되었다.
International Journal of Industrial Entomology and Biomaterials
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제7권1호
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pp.1-4
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2003
Sericulture is a traditional agro-industry, which involves mulberry cultivation and silkworm rearing, has made great contributes to the human civilization. With the development of national economy and modem technology, mulberry and silkworm are being used to develop products with functionality besides the traditional cocoon production in China. In this paper, we brief the current developing situation of sericultural byproducts with functionality in the following aspects. (1) Functional products from silkworm larvae: silkworm powder, white muscardine silkworm, isolation and purification of anti-bacterial proteins from the larvae and production of medically valuable substances by Bombyx mori nuclear polyhedrosis virus (BmNPV) vector. (2) Utilization of silkworm feces: for pillow and for isolation of chlorophyll etc. (3) Production of valuable Chinese traditional medicine like Cordyceps sinensis with pupae, functional utilization of pupa protein and chitin. (4) Silk as additives to cosmetics, silk food and medical materials. (5) Functional utilization of mulberry: cultivation of edible fungus on mulberry shoots as medium, mulberry fruit drinks, mulberry tea, etc. The prospect of sericultural byproduct industry in China is also discussed.
파밤나방의 기주로 채소 13종, 전작물 12종, 화훼 6종, 기타 11종 등 총 42종이 확인되었고 그중 25종이 새로운 기주로 조사되었다. 파밤나방에 의한 파의 지역별 피해주율은 완도 85%, 진도 86%, 해남 78%였고 서산 1.9%, 아산 1.5%, 청양 1.4%였다. 전남지역에서 파를 제외한 기타 작물에서 파밤나방에 의한 피해주율은 감자 95%, 옥수수 94%, 양배추 82%, 녹두 83%, 콩 56%, 배추 43%, 고구마 43%였다. 충남지역에서 파밤나방의 천적으로 녹강균과 핵다각체바이러스가 동정되었고 기생율은 9.2~3.7%였다. 전남 광주의 들깨 포장에서의 녹강균에 의한 기생율은 7월 5일 13.4%, 8월 7일 28.9%, 9월 10일 18.5%였다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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