Recently gene delivery has been designed newly using bioactive biomaterial and applied in the various field by many researchers. In this study, we proposed a new gene delivery system which has the capability of targeting effect in the specific tissue and remarkably enhanced transfection efficiency. We investigated $^1H-NMR$ spectroscopy, particle size analyzer and gel retardation to confirm the correct preparation of gene delivery. Also, we identified the hemo-compatibility of gene delivery by hemolysis assay, non-cytotoxicity by MTT test and transfection efficiency. The uptake mechanism of the gene carrier was confirmed using inhibitor agent such as sodium azide, indomethacin, quercetin, colchicine, and chloropromazine. As a results, it was identified that gene carrier prepared by in this study entered in the cell by the microtubule-dependent, energy-dependent and clathrin-mediated endocytosis pathway.
Peptide bond hydrolysis는 세포 내외의 생화학반응에 있어서 핵심이다. 하지만 amide Hydrolysis Mechanism은 아직 명확하게 규명되지 않았다. pH가 중성인 물에서의 비 촉매 가수분해가 발생하는 몇몇 실험적 증거가 있지만, 해당 반응 매커니즘은 4 가지(non-assisted concerted, non-assisted step-wise, assisted concerted, assisted step-wise)로 여전히 논란이 있다. 이번 연구에서는, Formamide의 가능한 Hydrolysis Mechanism을 자세히 연구해보고자 한다. 먼저, Ab-initio 계산을 통해 4가지 반응 메커니즘의 다시 한번 확인하고, quantum chemical calculations과 quantum mechanical molecular dynamic이 결합된 (QMMD) simulation을 통하여 water solvent에서의 반응 메커니즘의 에너지관계를 규명하였다. 결론적으로 아직 계산이 끝나지 않은 supported concerted mechanism을 제외한 모든 계산에서 non-supported, supported 두 system 모두에서 step-wise가 일어나기 쉬웠고, non-supported 보다 supported mechanism이 선호됨을 보였다. Intermediate인 amino-gem-diol의 수용액 상에서 안정화 또한 나타났다. 이는 Ab-initio 계산만 통해서는 정확하게 산출할 수 없는 엔트로피의 영향을 잘 보여준다.
Park, Hye-Ji;Kim, Su-Jin;Kim, Tae-Myung;Hong, Jin-Tae;Ha, Seang-Jong;Song, Jong-Yeol;Kim, Kee-Hyun
대한약학회:학술대회논문집
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대한약학회 2003년도 Proceedings of the Convention of the Pharmaceutical Society of Korea Vol.1
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pp.151.2-152
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2003
Bee venom (BV) has been utilized to relieve pain and to treat inflammatory diseases such as rheumatoid arthritis (RA). BV contains a variety of different peptides including melittin, apamin, adolapin and mast cell degranulating (MCD) peptide. In addition, it also contains enzyme (i.e. phospholipase A2), biologically active amines and non-peptide components. (omitted)
To increase the folding efficiency of proinsulin, we have designed a series of mini-proinsulins having the central C-peptide region replaced with sequences forming reverse turns. These proteins were produced as fusion proteins in E. coli in the form of inclusion bodies. After isolation process of the sulfonated mini-proinsulins, the subsequent refolding experiments indicate that the mini-proinsulins, with non-native penta-peptide sequences inserted between two of the enzyme processing sites, show substantially increased folding yields compared with the proinsulin. The correct disulfide connections were verified by fingerprint analysis using Glu-C endoproteinase. These novel mini-proinsulins could be used for the study of folding mechanism of proinsulin.
L. helveticus YM-1과 Str. lactis ML$_3$를 환원탈지유 배지에 혼합배양시켜 단백질 가수분해 활성과 산발효 촉진물질을 검토하였다. 두 균을 8시간 동안 배양한 결과 단백질 가수분해 활성은 현저한 차이를 나타냈으며, 배양액중의 우유 단백질 가순분해물을 측정하여 tyrosine 양으로 환산했을 때 L.helveticus YM-1은 105$\mu\textrm{g}$/$m{\ell}$, Str. lactis ML$_3$는 30$\mu\textrm{g}$/$m{\ell}$였다. 탈지유에 Str. lactis ML$_3$의 배양여액을 첨가하여 L. helveticus YM-1을 배양했었을 때 L. helveticus YM-1의 산 발효를 거의 촉진시키지 못하였으며, 반대로 L. helveticus YM-1의 배양여액을 첨가하여 Str. laclis ML$_3$을 배양했었을 때는 Str. lactis ML$_3$의 산발효를 크게 촉진시켰다. Str. lactis ML$_3$의 산발효 촉진물로는 L. helveticus YM-1이 우유 단백질을 가수분해하여 생산한 분자량 4300 정도의 peptide이며, 이 peptide를 산으로 가수분해한 결과 lysine, arginine, glutamic acid가 주로 많이 존재하였다. 또한 유리 아미노산으로 탈지유에 첨가하여 Str. lactis ML$_3$를 배양했을 때 여러 아미노산 중에서 histidine, glutamic acid, phenylalanine이 산생성을 가장 촉진하였고 isoleucine은 오히려 저해하였다.
Park, Jimin;Lee, Jung-Ho;Park, Yong-Sun;Jin, Kyoungsuk;Nam, Ki Tae
한국진공학회:학술대회논문집
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한국진공학회 2013년도 제45회 하계 정기학술대회 초록집
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pp.91-91
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2013
Imagine a world where we could biomanufacture hybrid nanomaterials having atomic-scale resolution over functionality and architecture. Toward this vision, a fundamental challenge in materials science is how to design and synthesize protein-like material that can be fully self-assembled and exhibit information-specific process. In an ongoing effort to extend the fundamental understanding of protein structure to non-natural systems, we have designed a class of short peptides to fold like proteins and assemble into defined nanostructures. In this talk, I will talk about new strategies to drive the self-assembled structures designing sequence of peptide. I will also discuss about the specific interaction between proteins and inorganics that can be used for the development of new hybrid solar energy devices. Splitting water into hydrogen and oxygen is one of the promising pathways for solar to energy convertsion and storage system. The oxygen evolution reaction (OER) has been regarded as a major bottleneck in the overall water splitting process due to the slow transfer rate of four electrons and the high activation energy barrier for O-O bond formation. In nature, there is a water oxidation complex (WOC) in photosystem II (PSII) comprised of the earthabundant elements Mn and Ca. The WOC in photosystem II, in the form of a cubical CaMn4O5 cluster, efficiently catalyzes water oxidation under neutral conditions with extremely low overpotential (~160 mV) and a high TOF number. The cluster is stabilized by a surrounding redox-active peptide ligand, and undergo successive changes in oxidation state by PCET (proton-coupled electron transfer) reaction with the peptide ligand. It is fundamental challenge to achieve a level of structural complexity and functionality that rivals that seen in the cubane Mn4CaO5 cluster and surrounding peptide in nature. In this presentation, I will present a new strategy to mimic the natural photosystem. The approach is based on the atomically defined assembly based on the short redox-active peptide sequences. Additionally, I will show a newly identified manganese based compound that is very close to manganese clusters in photosystem II.
1989년 11월부터 1990년 1월 사이에 전남 가막만에서 채취한 양식 굴 및 이를 원료로 제조된 훈제 기름담금 통조림, 보일드 통조림에서 강한 쓴맛이 나타나 품질상 문제가 발생하였는바, 본 연구에서는 이러한 쓴맛의 원인 물질을 규명하고저 시도하였다. 이들 시료의 아세톤 추출액을 액-액 분배, 알루미나, 규산 및 ODS 등의 각종 칼럼을 이용하여 정제한 결과, 5개의 쓴맛성분을 분리하였으며, 이들은 질량분석(FAB-MS)으로 부터 분자량이 각각, OY-22 : 837, OY-23 : 851, OY-24 : 821, OY-25, OY-26 : 835 이었으며, proton NMR spectrum 및 각종 기기분석 결과, 6-7개의 아미노산으로 이루어진 환상 peptide로 추정되었다. 또한, 아미노산 분석으로부터 OY-24에서는 Val, Leu 이, OY-25에서는 Leu, Ile이, OY-26에서는 Leu, Leu이 각각 확인되었으며, 나머지는 이상 아미노산으로 생각되었다. 이들 성분들은 마우스에 대하여 급성독성은 없었으며 $(100{\mu}g/20g\;mice,\;I.p.)$, Asp. niger E. coli, Bac. subtilis 에 대하여는 항균성도 없었다$(10{\mu}g/disk).$ 현재, 각종 생리활성 및 정확한 구조를 검토 중에 있다.
CK2 is a serine threonine kinase that participates in a variety of cellular processes with more than 300 defined substrates. This critical enzyme is known to be upregulated in cancers, but the role of this upregulation in carcinogenesis is not yet fully understood but c-myc, one of the defined CK2 substrates, is a well-known proto-oncogene that is normally essential in developmental process but is also involved in tumor development. We evaluated the optimal enzyme and substrate concentrations for CK2 activity in both neoplastic and non-neoplastic human lung tissues using the c-$myc^{424-434}$ peptide (EQKLISEEDL) as a substrate. The activities measured for the neoplastic tissue were 600-750 U/mg protein while those for the control tissue was in the range of 650-800 U/mg. $K_m$ value for c-myc peptide was determined as $0.33{\mu}M$ in non-neoplastic tissue and $0.18{\mu}M$ in neoplastic tissue. In this study, we did not observe an increased activity in the neoplastic tissue when compared with the non-neoplastic lung tissue, but we recorded two times higher affinity for c-$myc^{424-434}$ in cancer tissue. Considering the metabolic position of c-$myc^{424-434}$, our results suggest that phosphorylation by CK2 may be important in dimerization and thus it might affect the regulation of c-myc in cancer tissues.
Total carbohydrates, amino acids and peptide-like substances in two kinds of Korean lager beers have been analyzed by the calorimetric method of Dreywood's anthrone reagent and Fowden's ninhydrin reagent. The samples were fractionated with column of ion-exchange resin. The experimental results are as follows; 1. Amounts of non-hydrolyzed carbohydrates in the part of column processed is 1. 82% and 1. 96 % (the value was measured by Bertrand's method). But the amounts of those measured by Dreywood's anthrone method are 5.57% and 4.25%, this values are much more than those of Bertrand's method. 2. It can be estimated the amounts of gum and dextrin are 3.75% and 3.30% in both two beers, by comparison of samples with the above mentioned two method. 3. The amounts of carbohydrates by anthrone reagent in acid-hydrolyzed beers are much increased than those of non-hydrolyzed, so it is suggested the presence of polymer carbohydrates which couldn't be detected by Bertrand's method. 4. Total amounts of amino acids are 0.015% and 0.025% (as glycine) in non-hydrolyzed beers measured by ninhydrine color reaction method, on the other hand the amount of amino acids in acid hydrolyzed beers are 0.06% and 0.056%, this is much more than those of nonhydrolysis. The different amounts means that of peptide-like substances. 5. It is necessary to determine the constituent of amino acid for the better taste of beer, and also it is desirable to check the role of carbohydrates in the course of fermentation, mashing and on lager beer for effective utilization of carbohydrate materials to eliminate the losses.
In order to figure out the relationships between structural features and biological activity of the host-specific HC-toxin in maize, structurally related cyclic tetrapeptides, chlamydocin and CYL-2 were isolated, and their biological activities in maize were examined. Biological activities of preparations were determined by root growth inhibition and electrolyte leakage bioassays. Chlamydocin and CYL-2 showed toxicities to maize. However, the toxicities of these compounds were non-specific. Thus, the precise peptide ring structure of HC-toxin apparently does not play an important role in toxicity, while resistance of maize to HC-toxin is based on a precise ring conformation.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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