벼 약배양에 있어서 기본배지 및 배지내 첨가물질이 callus유기와 식물체분화에 미치는 영향을 구명하기 위하여 시험한 결과는 다음과 같다. 1. callus 유기 및 식물체분화는 N$_{6}$기본배지에서 가장 높았으며 Indica형 품종보다는 Japonica형 품종에서 그 효율이 더욱 높게 나타났다. 2. 약치상후 callus유기는 기본배지의 종류에 관계없이 20~40일 사이에 90% 이상이 유기되었다. 3. 식물체분화는 callus유기배지의 영향을 크게 받으며 Miller 배지에서 유기된 callus의 식물체분화는 N$_{6}$나 MS배지에 비하여 저조하였다. 4. N$_{6}$배지내에 포함된 질소원중 (NH$_4$)$_2$SO$_4$의 함량을 31.5mM로 조절하였을 때 callus 및 식물체분화율이 향상되었다. 5. 생장조정제 첨가에 있어 2,4-D단독 처리보다는 NAA 2mg/$\ell$에 Kinetin 1mg/$\ell$를 혼용 처리하였을 때 callus유기 뿐 아니라 식물체분화율도 향상되었다. 6. Indica형 품종의 callus유기에 대한 DL-Ala-nine 첨가효과는 약을 저온처리하였을 때 높게 나타났다.
수도 약배양의 효율을 높이기 위하여 callus 유기와 녹색체 출현율에 영향하는 화분의 발육단계, 화분의 저온처리와 기관 및 배지의 영향에 대한 일련의 실험을 수행하였으며 이에서 얻어진 결과를 요약하면 다음과 같다. 1. 단핵기의 화분에서 callus 유기율이 높았으며 이때는 대체로 엽신간장이 5~8cm에 해당되나 품종에 따라 차이가 있다. 2. 이삭을 상, 중, 하로 나누어 조사한 결과 엽이간장이 5~8cm의 것은 상부와 중간부분에 단핵기에 해당되는 것으로 나타났고 9~10cm 정도의 것은 중부와 하부 부분이 단핵기에 해당하는 것으로 나타났다. 3. 일반적으로 저온처리는 8$^{\circ}C$에서 12$^{\circ}C$가 callus 유기에 알맞는 것으로 나타났다. 그러나 온도에 대한 반응은 품종에 따라 차이가 있어 4$^{\circ}C$에서 callus 유기가 잘된 것도 있었다. 4. 저온 처리기간은 일반적으로 8~12일 정도에서 callus 유기가 잘 되었으나 품종간 차이가 있다. 5. 본 실험에서는 N6D 배지보다 N6 배지에서 callus 유기율이 높았다. 6. 대체로 녹색체 출현율은 4$^{\circ}C$와 8$^{\circ}C$로 처리한 것이 12$^{\circ}C$ 처리보다 높았다. 그러나 품종간 차이가 있었다. 7. 녹색체 출현에 좋은 결과를 주었던 온도 처리기간은 대체로 8~12일로 나타났다. 8. 본 실험에서 녹색체 출현율은 N6 배지보다 개량 MS 배지에서 2배 정도 높았다.
수도 품종 팔굉, 수원8002 Usen을 공시하여 2,4-D와 NAA의 각 5농도에서 Callus 형성량을 조사한 결과 1. 품종간 Callus 형성은 2,4-D와 NAA에서 다같이 팔굉이 가장 높고 다음은 수원8002였으며 Usen은 극히 낮았다. 2. 2,4-D의 농도별 Callus 형성은 팔굉과 수원8002는 $10^{-4}M$에서 Usen은 $5{\times}10^{-5}M$에서 가장 높았고 그보다 높은 농도에서는 Callus가 형성되지 않았다. 3. NAA 배지의 적량 농도는 $2{\times}10^{-4}M$이었다. 그러나 높은 농도에서는 Callus가 형성되지 않았고 저농도에서도 형성율이 낮았다. 4. Callus의 색은 대체로 황백색이나 Usen은 2,4-D 처리에서 암황색이었다.
The activities of auxins and cytokinins have been examined in the growth of callus tissue derived from Phaseolus vulgaris L. cv. Damyang. The synthetic auxin, picloram was the most effective in promoting callus growth and the range of effective concentrations (0.1$\mu{M}$ to 32$\mu{M}$) was broad. 2, 4-D also enhanced callus growth at the optimal concentration of 3.2$\mu{M}$. NAA promoted callus growth at relatively higher concentrations than other auxins tested. IAA was less effective in supporting callus growth. Cytokinin bearing saturated side chain ($N^6$-isopentyladenine) was approximately 30 times more active than the corresponding unsaturated compound, $N^6$-($\D^2$-isopentenyl) adenine. The abilities of cytokinin-autonomous growth were also examined. Callus tissues previously grown on concentrations lower and/or higher than optimal concentrations of cytokinins were better habituated in the subsequent passage. It was suggested that the development of cytokinin autonomy may be related to dosage-concentrations of cytokinin in the previous passage.
동진벼의 현미에서 캘러스를 유도하여 증식할 경우 Ge첨가가 캘러스 내의 Ge함량에 미치는 영향을 검토한 결과는 다음과 같다. 배지별 Ge농도에 따른 캘러스 증식율과 캘러스내 Ge 및 무기원소의 함량은 N$_{6}$배지보다는 MS배지에서 캘러스증식이 좋았으며, 캘러스 내 K함량을 제외하고는 Ge 및 기타 무기원소의 함량이 대체로 높았다. N$_{6}$배지와 MS배지 내 Ge농도가 높을수록 캘러스 증식율은 감소되나 캘러스 내 Ge함량은 증가되었고 Ca, Mg, K의 함량은 감소되며 Fe, Mn, Zn, Cu의 함량 등은 Ge농도 100~200 mg/$\ell$까지는 증가되나 그 이상 농도에서는 감소되는 경향이었다. Ge의 종류 및 농도에 따른 캘러스 내 Ge함량은 처리 한 Ge농도가 높을수록 증가되었는데, Ge 시용량이 100 mg/$\ell$ 이하에서는 무기ee(GeOf) 처리가 유기Ge(Ge-132) 처리보다 캘러스 내 Ge함 량이 높았으나, 그 이상의 농도에서는 유기 Ge처리가 무기Ge처리보다 캘러스 내 Ge함량이 높았고 캘러스 활력도 좋았다. 배지의 pH가 낮을수록 캘러스의 활력은 떨어지나 캘러스 내 Ge함량은 높았으며, citric acid 와 myo-inositol의 0.1~l.0 mM을 배지에 처리한 경우 무시용보다 캘러스 생육이나 캘러스 내Ge 및 기타 무기원소의 함량이 증가되었는데, citric acid보다는 myo-inositol의 시용에서 더 증가되었다.
The development of a protocol for high efficiency of embryogenic callus separation, maintenance and plant regeneration from the seeds of zoysiagrass cv. Zenith was studied. Embryogenic callus ratio is absolutely determined by genotype, but by adding high concentration of copper into medium, changing light condition and maintaining callus on initial induction medium for 8∼10 weeks, embryogenic callus can be easily distinguished and its growth can be promoted. There were significant differences among selected callus lines (each from one seed) according to their growth rates and regeneration percentages. Callus pre-treatment with activated charcoal inhibited callus growth, increased the level of precocious germination during culture and promoted shoot cluster formation after transfer to regeneration medium. For long-term callus maintenance, N6AA medium was better than MS medium, because the former inhibited non-embryogenic callus formation and kept vigor of embryogenic callus. The best callus lines Z-(5) has been successfully used for transformation and somaclonal variation selection in our laboratory.
5품종의 오차드그래스 종자로부터 직접 캘러스를 유도하고, 형성된 캘러스로부터 식물체를 재분화하는 조건을 확립하였다. 공시품종증 합성 19호가 캘러스 유도 및 재분화에서 가장 우수한 것으로 판명되었으며, SH, MS, N6 배지주에서 캘러스 유도시에는 MS 배지가, 재분화시에는 N6 배지가 유리한 것으로 나타났다. 각 단계별 배지중 호르몬 첨가는 캘러스 유도 및 증식시에 dicamba $3\;mg/\;{\ell}$, 뿌리와 잎의 유도시에 NAA $1\;mg/\;{\ell}$와 kinetin $5\;mg/\;{\ell}$, 재분화 완성기에 무첨가한 조건이 가장 효율이 좋았으며, 캘러스로부터 완전한 식물체로 재분화되는데 필요한 시간은 약 50~80일이었다.
Mature embryos of five oat genotypes were cultured to develop an efficient method of callus induction and plant regeneration. Murashige and Skoog(MS) and N6 media supplemented with 2,4-dichlorophenoxyacetic acid (2,4-D) and kinetin were used for callus induction. Percentage of callus induction showed significant among the combinations of plant growth regulators. Callus induction showed high efficiency in medium containing 3 mg/$\ell$ of 2,4-D. The high frequency of callus induction was obtained in Gwiri37. For plant regeneration, calli induced from mature embryos were transferred onto MS and N6 media supplemented with combinations of 6-benzyladenine (BA) and naphthaleneacetic acid (NAA) for 5 weeks. Percentage of plant regeneration showed high in MS medium containing 0.2 mg/$\ell$ of NAA and 1 mg/$\ell$ of BA. The callus initiation medium affected the subsequent plant regeneration. Treatment with 3 mg/$\ell$ of 2,4-D, and 3 mg/$\ell$ of 2,4-D and 3 mg/$\ell$ of kinetin in callus induction media showed high frequency for plant regeneration. Plant regeneration frequency among the genotypes showed significant. Especially, Gwiri37 showed high regeneration frequency. Regenerated shoots were treated with 200, 350 and 500 mg/$\ell$ of indole-3-butyric acid (IBA) transferred onto half-strength MS medium without plant growth regulators. Treatment of shoots with IBA induced root formation rapidly.
A breeding program in progress at Suweon Livestock Experiment Station, RDA, involves the hybridization of italian ryegrass (Lm) and several leading forage grasses in an effort to combine the nutritive, productivity and palatability qualities of Lm with the adaptive and cold resistance qual; .les of several leading grasses. In order to study the fate of the hybridization between remotely related species, immatured hybrid embryos were cultured on media. The emasculated plants of Lm were Sikem and Tetrone. Reweille, 2n=14, of perennial ryegrass (Lp.), Forager, 2n=42, of tall fescue(Fa), First, 2n=14,of meadow fescue(Fp), Potomac, 2n=28, of orchardgrass(Dg), and Richmond, 2n=42, of timothy(Ph.p) were used as pollinators. Embryos were isolated on 4, 8, 12, 16, and 20 days after pollination and cultured them on modified Murashige and Skoog media. Calluses and plantlets have been obtained after 8 days old embryos crossing between $Lm{\times}Fa$, after 12 days embryos crossing between $Lm{\times}Lp$, Dg, and Ph.p, and after 16 days embryos crossing between $Lm{\times}Fp$. Both callus and shoot formation occurred on 6 % or less of the plated embryos of $Lm{\times}Fp$, Dg, and Ph.p. Embryoderived callus forming shoots have been obtained from 4 days old embryo crossing between $Lm{\times}Dg$ which has not successfully been done anywhere as far as we know. It means that hybrid plants of species without crossability can be obtained through the use of immatured embryo culture. Some of plated embryos developed directly shoots from embryos and the others shoot-forming callus. Cross between related species showed a high frequency of directly shoot formation from plated embryos and cross between remotely related species a high frequency of callus formation.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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