서양종 꿀벌의 일벌의 독을 채취하여 정제한 정제봉독에 대한 세균에서의 돌연변이 유발성 검색을 위하여 S. typhimurium의 히스티딘 요구성 균주 TA100, TA1535, TA98, 그리고 TA1537의 균주와 대장균 E. coli의 트립토판 요구성 균주인 WP2 uvrA를 이용해 복귀돌연변이시험을 실시하였다. 정제봉독은 부형제로 사용한 멸균생리식염수에 용해되었으며 모든 농도군의 조제물에서 침전은 관찰되지 않았으며, 정제봉독 조제물을 top agar와 혼합할 때 모든 농도군에서 혼탁이나 침전이 관찰되지 않았다. 대사활성계 적용 TA100, TA1535, TA98 균주에 대해 0, 1.5, 5, 15, 50, 150 및 500 µg/plate의 범위를 설정하고 미 적용시엔 0, 0.15, 0.5, 1.5, 5, 15 및 $500{\mu}g/plate$의 범위로 설정하였다. TA1537과 WP2 uvrA균주에 대한 농도 범위은 대사활성계 적용시엔 0, 5, 15, 50, 150, 500 및 1,500를 미 적용시엔 0, 1.5, 5, 15, 50, 150 및 500 µg/plate 범위로 설정하여 시험을 수행하였다. 그 결과 모든 시험균주에서 대사활성계 적용 여부에 상관없이 정제봉독 처리군의 평균 집락 수는 증가를 나타내지 않았으며, 양성판정 기준을 만족시키지 못하였다. 따라서, 정제봉독은 본 시험조건 하에 사용한 시험 균주에 복귀돌연변이를 유발하지 않는 것으로 사료되었다.
간장에서 분리한 갈색물질과 숯이 간장 및 그의 model system에서 aflatoxin $B_1(AFB_1)$의 파괴에 미치는 영향을 검토하였다. 간장 갈색물질(0.05%)과 $AFB_1$을 pH7의 완충용액에서 2일 동안 $30^{\circ}C$에서 반응시킨 결과 60% 이상의 $AFB_1$ 이 파괴되었으며 이 반응물질을 salmonella typhimurium TA98과 TA100으로 mutagenicity test를 했을 때 돌연변이성 역시 각각 50%, 70%로 감소되었다.(p<0.05). 숯이 $AFB_1$ 파괴에 미치는 영향을 검토하기 위해 재래간장과 증류수 그리고 20% NaCl용액에 각각 숯을 첨가하고 $30^{\circ}C$에서 5일 동안 $AFB_1$ 의 파괴 효과를 보았는데 재래간장에서는 $AFB_1$은 안정하였으나 20% NaCl 용액과 증류수에서는 2일 후 80% 이상의 $AFB_1$ (여액)의 파괴가 일어났다. 비교실험으로, 숯 대신에 활성탄 처리를 한 경우에는 모든 시료에서 100%의 $AFB_1$이 파괴 또는 제거되었다.
The study was carried out to screen mutagenicity of smoking materials for the determination of optimum smoking temperature for meat products. Wood materials employed for smoking were oak and apple trees. Temperatures of the generator for manufacturing of smoke flavoring were set to 250$^{\circ}C$, 400$^{\circ}C$ and 500$^{\circ}C$, respectively. Mutagenic activities of smoke flavoring were assayed according to Ames test using Salmonella typhimurium TA98 and TA 100. In oak wood smoke flavoring, Salmonella typhimurium TA98 without S-9 mix showed strong mutagenic activities at the concentration of 6$\mu\textrm{g}$/plate(250$^{\circ}C$), 4$\mu\textrm{g}$/plate(400$^{circ}C$) and 6$\mu\textrm{g}$/plate(500$^{\circ}C$). Salmonella typhimurium TA100 with S-9 mix showed strong mutagenic activities at the concentration of 10$\mu\textrm{g}$/plate(250$^{\circ}C$), 20$\mu\textrm{g}$/plate(400$^{\circ}C$) and 10$\mu\textrm{g}$/plate(500$^{\circ}C$). Salmonella typhimurium TA98 with S-9 mix showed strong mutagenic activities at the concentration of 30$\mu\textrm{g}$/plate(250$^{\circ}C$), 40$\mu\textrm{g}$/plate(400$^{\circ}C$) and 20$\mu\textrm{g}$/plate(500$^{\circ}C$). Salmonella typhimurium TA100 with S-9 mix showed strong mutagenic activities at the concentration of 30$\mu\textrm{g}$/plate(250$^{\circ}C$), 50$\mu\textrm{g}$/plate(400$^{\circ}C$) and 20$\mu\textrm{g}$/plate(500$^{\circ}C$). Salmonella typhimurium TA100 without S-9 mix showed strong mutagenic activities at the concentration of 10$\mu\textrm{g}$/plate(250$^{\circ}C$), 20$\mu\textrm{g}$/plate(400$^{\circ}C$) and 20$\mu\textrm{g}$/plate(500$^{\circ}C$). Salmonella typhimurium TA98 with S-9 mix showed strong mutagenic activities at the concentration of 30$\mu\textrm{g}$/plate(250$^{\circ}C$), 40$\mu\textrm{g}$/plate(400$^{\circ}C$) and30$\mu\textrm{g}$/plate(500$^{\circ}C$). Salmonella typhimurium TA100 with S-9 mix showed strong mutagenic activities at the concentrations 30$\mu\textrm{g}$/plate(500$^{\circ}C$). Salmonella typhimurium TA100 with S-9 mix showed strong mutagenic activities at the concentration of 30$\mu\textrm{g}$/plate(250$^{\circ}C$), 20$\mu\textrm{g}$/plate(400$^{\circ}C$) and 30$\mu\textrm{g}$/plate(500$^{\circ}C$). From these results, it could be concluded that optimum smoking temperature for meat products should be set below 400$^{\circ}C$, that the compounds like benzo[a]pyrene etc. contain a variety of mutagenic potentials, which could be generated at the higher smoking temperature.
각 균주에 대하여 씀바귀 분말 시료들이 독성을 나타내지 않는 범위에서 강력한 발암물질로써 직접 변이원으로 사용된 $MNNG(0.4{\mu}g/plate)$의 경우 S. typhymurium TA100 균주에서 시료농도 $100{\mu}g/plate$에서 메탄올 추출물이 84.51%로 가장 높은 억제효과가 나타났으며, $4NQO(0.15{\mu}g/plate)$에 대한 S. typhymurium TA98 균주에서 시료농도 $100{\mu}g/plate$에서는 물 분획물이 86.73%로 가장 높은 억제효과를 나타내었다 또한, TA100균주의 경우에는 부탄올 분획물에서 88.93%로 가장 높은 억제효과를 나타내었다. 간접변이원인 B(a)P를 사용한 실험에서 TA98 균주에서는 메탄올 추출물이 86.98%로 가장 높은 억제효과를 보였으며, TA100 균주에서는 부탄올 분획물이 75.35%로 가장 높은 억제효과를 나타냈다. 암세포주(A549, Hep3B, MCF-7)에 대한 씀바귀 분말의 증식 억제효과를 알아보기 위하여 실험한 결과, 폐암세포주인 A549세포에서는 핵산 분획물$(500{\mu}g/ml)$이 87.91%로 가장 높은 억제효과를 나타내었으며, 간암 세포주인 Hep3B 에서는 핵산 분획물$(375{\mu}g/ml)$이 70.64%로 가장 높은 억제효과를 나타냈다. 유방암 세포주인 MCF-7에서도 핵산 분획물$(375{\mu}g/ml)$이 82.89%로 가장 높은 억제효과를 보였으며, 인간 정상 간세포 293에 대해서는 24% 이하의 생육억제율을 보였다. 이는 암세포주에 대한 높은 억제효과에 비해 정상세포에 대해서는 비교적 낮은 증식 억제효과를 나타냄을 알 수 있었다.
The controversy on genotoxicity of molinate, an herbicide, has been reported in bacterial system, and in vitro and in vivo mammalian systems. To clarify the genotoxicity of molinate, we performed bacterial gene mutation test, in vitro chromosome aberration and mouse lymphoma $tk^{+/-}$ gene assay, and in vivo micronucleus assay using bone marrow cells and peripheral reticulocytes of mice. In bacterial gene mutation assay, no mutagenicity of molinate ($12-185{\mu}g/plate$) was observed in Salmonella typhimurium TA 98, 100, 1535 and 1537 both in the absence and in the presence of S-9 metabolic activation system. The clastogenicity of molinate was observed in the presence ($102.1-408.2\;{\mu}g/mL$) of metabolic activation system in mammalian cell system using Chinese hamster lung fibroblast. However, no clastogenicity was observed in the absence ($13.6-54.3\;{\mu}g/mL$) of metabolic activation system. It is suggested that the genotoxicity of molinate was derived some metabolites by metabolic activation. Molinate was also subjected to mouse lymphoma L5178Y $tk^{+/-}$ cells using microtiter cloning technique. In the absence of S-9 mixture, mutation frequencies (MFs) were revealed $1.4-1.9{\times}10^{-4}$ with no statistical significance. However, MFs in the presence of metabolic activation system revealed $3.2-3.4{\times}10^{-4}$ with statistical significance (p<0.05). In vivo micronucleus (MN) assay using mouse bone marrow cells, molinate revealed genotoxic potential in the dose ranges of 100-398 mg/kg of molinate when administered orally. Molinate also subjected to acridine orange MN assay with mouse peripheral reticulocytes. The frequency of micronucleated reticulocytes (MNRETs) induced 48 hr after i.p. injection at a single dose of 91, 182 and 363 mg/kg of molinate was dose-dependently increased as $10.2{\pm}4.7,\;14.6{\pm}3.9\;and\;28.6{\pm}6.3\;(mean{\pm}SD\;of\;MNRETs/2,000\;reticulocytes)$ with statistical significance (p<0.05), respectively. Consequently, genotoxic potential of molinate was observed in in vitro mammalian mutagenicity systems only in the presence of metabolic activation system and in vivo MN assay using both bone marrow cells and peripheral reticulocytes in the dose ranges used in this experiment. These results suggest that metabolic activation plays a critical role to express the genotoxicity of molinate in in vitro and in vivo mammalian system.
본 시험은 GMP 내 기본적으로 7%로 결합되어 있는 sialic acid의 함유량을 그대로 보유하도록 제조한 유청단백가수분말(시험물질명: 7%-GNANA)을 기능성 식품 원료 개발함에 최종 연구목표를 두었다. 시험물질은 GMP(7% sialic acid 함유)를 원료로 하고, 여기에 식품첨가물로 허용된 효소인 Alcalase를 사용하여 지표성분인 sialic acid를 100% 효율로 분리시킨 후, 동결 건조한 7%-GNANA(7% sialic acid와 GMP 단백질로 구성, 제품명: HELICOBACTROL-7)을 (주)한일바이오메드사(한국)에서 공여 받아 GLP 가이드라인에 따라 미생물복귀돌연변이시험을 실시하였다. 미생물에 대한 돌연변이 유발성 유무를 검색하기 위해 히스티딘 요구성 균주인 Sal. typhimurium TA98, TA100, TA1535 및 TA1537과 트립토판 요구성 균주인 E. coli WP2uvrA를 이용하였다. 미생물복귀돌연변이시험은 시험물질을 5단계의 농도군(0, 61.7, 185, 556, 1,670, $5,000{\mu}g/plate$)으로 하여 평가하였다. 본 시험을 통한 평가결과, 대사활성계 존재 유무와 관계없이 모든 균주에서 시험물질의 각 농도에 의한 복귀돌연변이 유발원 양성기준인 콜로니 생성수치가 재현성 있는 증가를 나타내지 않았으며, 용량의존성도 확인되지 않았다. 결론적으로, 시험물질인 7% G-NANA의 식품첨가물로서 등록을 위하여 수행한 미생물돌연변이시험에서 안전성이 확인되었다.
This study was performed to determine the effects of antimutagenicity of Porturaca oleracea L. in Korea. In Ames test, the ethanol extract of Poturaca oleracea L. inhibited mutagenic activity of N-methyl-N'-nitro-N-nitrosoguanidine(MNNG), , 4-nitroquinoline-1-oxide(4NQO), benzo($\alpha$)pyrene (B($\alpha$)P) and 3-amino-1,4-dimethyl-5H-pyrido-(4,3-b)indole (Trp-P-1) in Salmonella typhimurium TA98 and TA100. But hot-water extract Poturaca oleracea L. only Inhibited mutagenic activity of MNNG in Salmonella typhimurium TA100, On 4NQO, the ethanol extract 100-1,600$\mu\textrm{g}$/plate of Porturaca oleracea L. showed a slight inhibitory effect of 13-48%, 4-47% in TA98 and TA100, respectively, but on MNNG, it showed higher inhibitory effect of 6-86% in TA100, And the treatment of 1,600$\mu\textrm{g}$/plate of ethanol extract of Porturacea L. had strong antimutagenicity with 74-87% inhibition against TA98 and TA100 induced by B(a)P and with 85-93% inhibition against TA98 and TA100 induced by Trp-P-1. The ethanol extract was fractionated with ether. chloroform, ethylacetate, butanol and water. Among them, most of the fraction except water fraction showed strong antimutagenicity effects against mutation induced by 4-NQO, MNNG, B(a)P and Trp-P-1. Chloroform fraction had strong antimutagenicity with 91% inhibition against TA100 induced by MNNG, diethyl etherfraction had strong antimutagenicity with 92%, 98% inhibition against TA98 and TA100 induced by 4NQO, Chloroform fraction had strong antimutagenicity with 97% inhibition against TA100 induced by B (a)P and diethyl etherfraction had strong antimutagenicity with 98% inhibition against both strain Induced by Trp-P-1, respectively.
This study aimed to evaluate the genotoxicity of GST (Gamisasangja-tang). For examining genotoxicity, we carried out bacterial reverse mutation assay, chromosome aberration assay, micronucleus induction test according to OECD guidelines. Bacterial reverse mutation assay: In GST treating group, regardless of existence S9 mix, revertant colonies counts appeared to be less than twice of negative control group and dose dependent increase. In positive control group, revertant colonies counts were shown to be more than twice of negative control croup. Chromosome aberration assay: All cell line showed repetition rate of abnormal chromosome aberration less than 5%, regardless of treating time, existence of S9 mix, and no significant change ($p{\succeq}0.05$) compared with negative control group. Micronucleus induction test: Micronucleated polychromatic erythrocytes (MNPCE) repetition rate of Polychromatic erythrocytes (PCE) showed no significant changes compared with negative control group ($p{\succeq}0.05$). PCE portion of total erythrocytes also showed no significant changes ($p{\succeq}0.05$). Our results showed that GST didn't induce any genotoxicity.
과메기의 위생화를 위한 방사선 조사기술의 이용 가능성을 검토할 목적으로 방사선 조사를 실시한 후 독성학적 안전성 실험인 in vitro Ames test SOS chromotest 및 CHL 세포를 이용한 염색체 이상시험과 ICR 수컷 마우스를 이용한 in vivo 소핵세포실험을 실시하였다. 감마선 조사 및 비조사된 과메기의 Salmonella typhimurium(TA98, TA100, TA1535, TA1537)과 Escherichia coli WP2 uvrA 균주에 대한 복귀변이 집락수 시험, SOS chromotest(Escherichia coli PQ37) 시험 및 CHL 세포를 이용한 염색체 이상시험을 수행한 결과 물추출물과 용매추출물 및 대사활성계 도입 혹은 부재시 모두, 모든 시험균주에서 시험적용 농도인 10,000 $\mu\textrm{g}$/plate까지의 농도에서 감마선 조사된 시료는 비조사된 시료와 같이 음성을 나타내었다. 또, 감마선 조사 및 비조사된 과메기의 in vivo 소핵세포실험에서도 소핵이 발견되지 않았다. 따라서, 10 kGy까지 고선량 감마선 조사된 과메기는 위 수행된 in vitro 및 in vivo 유전독성시험을 실시한 결과 음성을 나타낸 것으로 보아 유전독성학적으로 돌연변이원성이 없음을 확인할 수 있었다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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