철피석곡은 중국에서 전통의약식물로 잘 알려진 난과 식물 중 하나이다. 본 연구에서는 생물반응장치를 이용하여 조직 배양된 철피석곡에 대하여 화장품 성분으로써 응용 가치를 평가하였다. 이미 몇몇 보고된 논문에서 철피석곡은 항암, 상처 치유 그리고 면역기능증진 등의 약리학적 활성에 대한 연구가 진행되었다. 본 연구에서는 생물반응장치를 이용하여 조직 배양된 철피석곡의 원괴체상구체 및 다신초에 대하여 화장품 성분으로서 효능, 효과를 자연에서 자란 철피석곡과 비교 평가하였다. 항산화 활성 비교 실험 결과 철피석곡의 원괴체상구체는 조직배양된 다신초 및 철피석곡 지하부 및 지상부보다 항산화 효과가 우수하였다. 조직배양된 원괴체상구체의 총 페놀 및 총 플라보노이드 성분 또한 다른 다신초나 자연에서 자란 철피석곡 추출물보다 함유량이 높음을 알 수 있었다. 다른 한편으로는 피부 미백과 관련한 효과를 비교 조사한 결과, 조직 배양된 다신초가 자연에서 자란 철피석곡 지상부, 지하부 및 조직 배양된 원괴체상구체보다 타이로 시네이즈 활성 억제 및 멜라닌 생성 억제 효과가 우수하였다. 이러한 결과들은 피부개선을 위한 화장품 성분으로서 조직배양체의 부분별 응용 가능성을 제공할 수 있을 것으로 사료된다.
These studies were conducted to investigate effects of phytohormone and activated carbon on the growth and rooting of teratoma shoots induced from Nicotiana tabacum cv. NC2326 transformed by Aerobacterium tumefaciens C58. GA was effective for shoot elongation and reduction of multiple shoots from teratoma shoot, however, leaves of teratoma shoot cultured on the medium with GA were pointed. ABA was also effective in promoting shoot elongation, but was not for reduction of multiple shoots. Teratoma shoot cultured on the medium with 1 n activated carbon promoted shoot elongation and inhibited the number of shoots differentiated, but was grown as abnormal shoot. Addition of 1% activated carbon and 0.5mg/l BA to culture media was effective for shoot elongation and reduction of multiple shoot and for formation of round leaves as normal leaves. Though these shoots were inoculated on the rooting medium, they could not from roots but formed multiple shoots. Boric acid, myo-inositol and sucrose were also ineffective on the rooting of teratoma shoots.
A method for induction of multiple shoots using cotyledonary nodes and shoot tips of Macrotyloma uniflorum (Lam.) Verdc. was described. The experiment was conducted in which shoot induction was noticed on Murashige and Skoog (MS) medium supplemented with different concentrations and combinations of four cytokinins (KIN, 2iP, Ads, BAP). These multiple shoots were later developed into normal shoots. The highest rate of shoot proliferation came from MS medium added with BAP 1.5 mg/L. The multiple shoot buds were subcultured into MS medium with BAP (0.5-1.5 mg/L) along with Ads (1.0 mg/L) and GA$_3$ (0.5 mg/L), which gave rise to the highest frequency of shoot proliferation and elongation. The shoots were rooted on MS medium supplemented with 1.75 mg/L IBA.
Zingiber officinale buds from the rhizomes were used to produce in vitro shoots. These explants produced the largest number of multiple shoots, 9.8 shoots per explant, when were cultured on MS (Murashige and Skoog 1962) medium supplemented with 2.0 mg/L benzyladenine (BA) and 2.0 mg/L indole butyric acid (IBA). This medium was also found to be suitable for in vitro propagation of other Zingiberaceae species: Alpinia conchigera, Alpinia galanga, Curcuma domestica, C. zedoaria and Kaempferia galanga. Both C. domestica and C. zedoaria produced more multiple shoots when were cultured in the liquid proliferation medium, MS medium containing 2.0 mg/L BA and 2.0 mg/L IBA. To maintain the in vitro plantlets of Zingiberaceae species, they were required to subculture every four weeks. After executing proper acclimatization protocol, in vitro plantlets of Alpinia galanga, A. conchigera, Curcuma domestica, C. zedoaria, Kaempferia galanga and Zingiber officinale could be successfully planted in the field with high percentage of survival.
Five different poplar hybrids were tested for rescuing embryo to elongate in vitro plantiets after hybridization. Ovaries and ovules were cultured on Woody Plant Medium (WPM) supplemented with cytokinins, 6-benzylamine (BA) and zeatin. Multiple shoots were initiated from half section of capsule with immature embryos after 21 days from pollination and tiny shoots were formed after the expansion of cotyledons in ovule cultures. Germinating response was better in intraspecific hybrids $(6.53\pm1.66)$ than interspecific crosses $(0.93\pm0.54)$ from half section of capsules on WPM medium. In general, zeatin was better than BA in inducing multiple shoots from isolated ovules. The highest average number $(19.40\pm4.53)$ of shoots was produced from immature ovules of 21 days post-pollination of WPM medium supplemented with 5.0 mg/L zeatin. The highest percentage of germination was 93% from the half section of in vitro ovary cultures. Soil acclimation was successfully conducted in cell tray containing artificially mixed soil with 96% survival rate.
제주 자생 왕벚나무 동아에서 분화된 줄기를 이용하여 대량증식 하고자 기내배양조건을 구명하였다. 다섯 종류의 배지에서 모두 양호한 생장을 하여 차이가 나타나지 않았으나 sucrose가 첨가되지 않은 배지에서는 생장이 매우 저조하였다. BAP와 $GA_3$를 여러 농도로 처리한 결과 BAP 처리구에서 평균 3.5~9.5개의 줄기가 유도되었다. 그러나 BAP의 농도가 높아질수록 줄기의 길이생장은 저조하였다. $GA_3$ 단독 처리구에서는 줄기가 발생하지 않았으나 BAP와 혼용처리 하였을 때 BAP 단독 처리구보다 더 많은 줄기가 발생하였으며, 길이 생장도 양호하였다. 그 중 BAP $0.5mg/{\ell}$와 $GA_3$$4.0mg/{\ell}$ 조합에서 가장 많은 줄기가 발생하였다. 배양기간이 경과할수록 줄기형성은 많아졌으나 12주간 배양된 줄기는 정단부가 고사하였다. 배양 8주째 양호한 줄기를 다량으로 얻을 수 있었다.
새우난초의 액아로부터 다신초 형성을 통한 기내 대량 생산 체계를 확립하기 위하여 본 실험을 실시하였다. 액아로부터 신초 형성율은 1/2MS배지에 NAA $0.5mg{\cdot}L^{-1}$과 TDZ $2.0mg{\cdot}L^{-1}$를 첨가한 배지에 배양하여 4주간 암배양후 16시간 일장으로 배양하였을때 가장 높았다. 액아배양을 통해 얻어진 신초로부터 다신초 (multiple shoots) 증식에는 1/2MS 배지에 TDZ $4.0mg{\cdot}L^{-1}$와 IBA $2.0mg{\cdot}L^{-1}$를 첨가한 배지에서 신초형성수가 12.8개로 가장 양호하였다. 한편, 다신초 증식과정에서 비정상적인 신초가 형성되었으며 이들 비정상신초로부터 정상적인 신초로 회복은 생장조절제가 첨가되지 않은 1/2MS 배지에서 기장 효과적이었다. 다신초의 생장과 발근은 1/2MS 배지에 NAA $0.1mg{\cdot}L^{-1}$를 첨가한 배지에서 신초의 생장과 발근 모두 양호하였다. 발근된 새우난초 유묘는 NAA $10mg{\cdot}L^{-1}$용액에 30분간 침지 처리 후 TKS상토에 이식하였을 때 100% 순화하였으며 순화 후 전반적인 생육도 기장 양호하였다.
An efficient micropropagation protocol based on multiple shoot induction and callus regeneration has been standardized in Sarcostemma brevistigma, a rare medicinal plant. The nodal cuttings were cultured on MS medium supplemented with BA ($0.5-8{\mu}M$) or Kn ($0.5-8{\mu}M$) alone or in combination with NAA ($0.5-1.5{\mu}M$). Maximum multiple shoot induction was observed on MS medium supplemented with $4{\mu}M$ BA. On this medium, 100% cultures responded with an average number of 11.3 shoots per explant. However, the average shoot length was limited to only 0.9 cm on this medium. The addition of $1{\mu}M$ NAA along with $4{\mu}M$ BA gave rise to an average number of 10.9 shoots with an average shoot length of 1.8 cm. Luxuriantly growing callus was obtained on MS medium supplemented with BA ($5{\mu}M$) and 2,4-D ($2{\mu}M$). The callus was subcultured on MS medium supplemented with BA ($2-15{\mu}M$) or Kn ($2-15{\mu}M$) alone or in combination with NAA ($0.5-2{\mu}M$) for shoot organogenesis. Optimum callus regeneration was obtained on MS medium supplemented with $10{\mu}M$ BA and $1{\mu}M$ NAA. On this medium, 100% cultures responded with an average number of 13.4 shoots per culture. The shoots obtained via multiple shoot induction and organogenesis were rooted on half-strength MS medium supplemented with NAA ($1-7{\mu}M$) or IBA ($1-7{\mu}M$). IBA was better than NAA in terms of both the percentage of cultures that responded and the average number of roots per explant. The rooted shoots were successfully transplanted to soil with 86% success. This standardized protocol will help to conserve this rare medicinal plant.
잡종 사기나무의 기내 대량증식을 목적으로 줄기절간 유래의 기내 및 기외시료를 이용하여 다경줄기 유도에 관여하는 식물생장 조절물질의 효과에 대하여 조사하였다. 기외시료의 측아를 제거한 다음 20에서 30$\mu$M 의 zeatin이 함유된 WPM 배지에 6주간 배양하였을때 각각 11개와 13개의 다경줄기가 유도되었다. 그러나 기외시료의 측아가 붙어있는 상태에서 기내배양하여 2주후에 측아를 제거하고 동일 배지에 배양하였을 경우에는 BA가 1.0에서 2.0 $\mu$M 함유된 배지에서도 13개와 15개의 다경줄기를 유도할 수 있었으며, 특히 이때 생산된 줄기의 상태는 아주 건전한 것으로 나타났다. 기내줄기를 사용하였을때는 20 $\mu$M의 zeatin을 처리하였을때 가장 많은 줄기를 생산할 수 있었으며, 생산된 조직배양묘는 일정기간 순화를 시킨 후 온실이나 포지에 식재가 가능하였다.
The effect of sodium sulphate on shoot induction and multiple shoot formation from nodal explants of Vitex negundo L. was tested on Murashige and Skoog's (MS) medium fortified with different auxins, cytokinins and sucrose. Highest percentage $(97.78\%)$ of explants for shoot induction and multiple shoot (20.68/explant) production were observed in the combination treatment of $N^6-Benzyl$ adenine (BA) $(17.80\;{\mu}M/L)$, ${\alpha}-Naphthalene$ acetic acid (NAA) $(2.15\;{\mu}M/L)$ and $5\%$ sucrose supplemented with 100 mg/L sodium sulphate. In vitro raised shoots were rooted on the half-strength MS medium fortified with different concentrations of NAA, Indole-3-acetic acid (IAA), and Indole-3-butyric acid (IBA) alone and in combinations. Among the treatments, $4.90\;{\mu}M/L$ of IBA was found most effective $(95.56\%)$ in inducing roots. The rooted plantlets were shifted to glasshouse for acclimatization and later transferred to the field with cent percent survival. Furthermore, in vitro flowering was observed in the shoots cultured on MS medium supplemented with BA $(8.90\;{mu}M/L)$ and NAA $(1.61\;{\mu}M/L)$.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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