Effects of swainsonine (SW: 8${\alpha}$, ${\beta}$-indolizidine-1alpha, 2${\alpha}$, 8${\beta}$-triol from Locoweed) on the cellular and nonspecific immune responses of lipopolysaccharide (LPS) wer e studied in ICR mice. Mice were divided into 4 groups (10mice/group), and LPS was given to each mouse 1 hr after i.p. injection with 3.7mg/kg of SW by i.p. injection twice a week for 14 days at a dose of 2mg/kg. Immune responses of the delayed-type hypersensitivity response (DTH) to sheep red blood cells (s-RBC), phagocytic activity and natural killer (NK) cell activity were evaluated. LPS treatment didn`t affect NK cell activity, phagocytic activity, DTH to s-RBC compared with those in controls, and phagocytic activity of sareoma 180 tumor bearing mice. However, circulating leukocytes were significantly decreased. Combinaton of LPS and SW increased circulating leukocytes significantly compared vath that in LPS alone, and DTH to s-RBC, NK cell activity and phagocytic activities of normal and sarcoma tumor bearing mice were not affected. These findings indicate that SW didn`t affected the cellular immune responses suppressed by LPS but significantly increased circulating leukocytes.
재래식 버섯균사체메주로부터 제조된 재래식 버섯균사체 된장의 항종양성, 항산화성 및 항돌연변이성을 연구하였다. 항종양성 (S-180 세포로 유발한 mouse ascites cancer) 에서는 느타리, 영지, 상황, 신령 버섯균사체 된장이 각각 33, 30, 26, 25% 억제하여 재래식 된장(11%)에 비해 매우 우수한 항종양성을 나타내었다. 버섯균사체 된장은 S. typhimurium TA98에 대한 IQ와 AFB$_1$에 의한 돌연변이성을 각각 39.7~46.1%, 38.0~39.7% 억제하여 대조된장(32.0, 33.2%)에 비해 항돌연변이성이 우수하였다. S. fyphimurium TA 100에 대해서는 IQ와 AFB$_1$의 돌연변이성을 각각 31.9~35.6%, 24.9~30.4% 억제하여 대조된장(27.5, 22.5%)에 비해 항돌연변이성이 좋았다. 항산화성 역시 버섯균사체된장이 대조된장에 비해 효과가 우수하였다 관련 물질로서 $\beta$-D-g1ucan 함량은 버섯균사체된장의 경우 재래식 된장에 비하여 3~8배, 총 Phenol성 화합물과 isoflavone 함량은 느타리버섯균사체된장과 신령버섯균사체가 가장 높았다.
Even though appropriate immune response is necessary for the survival of the individual, excessive or insufficient immune Response might cause autoimmune or allergic disease. So the immune response must be controlled to the degree that is beneficial for the well being of the individual. This study was undertaken to know the effects of Gunleetang Gagambang on the immune system of the mouse. Gunleetang Gagambang has been used for cure of tumor as a traditional medicine without any experimental evidence to support the rational basis for its clinical use. This study was carried out to evaluate the possible therapeutic or antitumoral effects of Gunleetang Gagambang extract against tumor, and to carry out some mechanisms responsible for its effect. Some kinds of tumor were induced by the typical application of 3-methylcholanthrene(MCA) or by the implantation(s.c) of malignant tumor cells such as leukemia cells(3LL cells) or sarcoma cells(S180 cells). Treatment of the Gunleetang Gagambang on water-extract(dailly 1mg/mouse, i. p.) was continued for 7 days prior to tumor induction and after that the treatment was lasted for 20 days. Against squamous cell carcinoma induced by MCA, Gunleetang Gagambang decreased not only the frequency of tumor production but also the number and the weight of tumors per tumor bearing mice(TBM). Gunleetang Gagambang on also significantly suppressed the development of 3LL cell and S180 cell-implanted tumors in occurrence-frequency and their size. and some developed tumors were regressed by the continuous treatment of Gunleetang Gagambang extract into TBM. In vitro, treatment of Gunleetang Gagambang extract had no effect on the growth of some kinds of cell line such as FsaII, A431 strain but significantly inhibited the proliferation of 3LL, S180 cells and augmented the DNA synthesis of mitogen-activated lymphocytes. Gunleetang Gagambang also stimulated the migrative ability of leukocyte, the MIF and IL-2 production of T lymphocytes, but not IL 6 production of B cells. Gunleetang Gagambang administration to mice enhanced NK cells activities. These results demonstrated that Gunleetang Gagambang extract exhibited a significant prophylactic benefits against tumors and its antitumor activity was manifested depending on the type of tumor cells. And these results also suggested that effect of Gunleetang Gagambang might be chiefly due to nonspecitie enhancement of NK cell activities and cell-mediated immune responses.
본 연구는 인공재배 상황버섯 자실체 추출물인 금사목질진흙버섯 자실체 추출물의 mouse sarcoma cells인 S-180 세포에 대한 정맥 투여 시 항암 효과와 급성독성 및 4주 아 급성 독성에 대한 보고이다. 금사목질진흙버섯 자실체 추출물의 항암효과는 250 mg/kg에서 대조군 대비 42.7%의 크기로 가장 높은 효과를 나타내었으며, 농도 의존적인 경향을 나타내었다. 급성 독성에서는 $LD_{50}$치가 632.84 mg/kg (♂)과 814.48 mg/kg (♀)로 나타났으며, 이자와 장기의 무게비가 증가하는 현상이 나타나, 영향이 있는 것으로 추측되었다. 4주 아 급성 독성 시험에서 $LD_{50}$치는 355.41 mg/kg (♂)과 383.53 mg/kg (♀)로 나타났으며, 특히 250 mg/kg 투여군에서는 간의 무게 비가 2배 정도 증가하는 현상과 황색 반점이 나타났다. 특히 125 mg/kg 이상 투여군에서는 점프 능력과 민첩성 등의 운동 능력이 현저히 증가되는 현상이 관찰되었으며, 이에 대한 정확한 메카니즘은 확인할 수 없었다. 이상의 결과를 바탕으로 금사목질진흙버섯 자실체 추출물에 대한 표준물질 정제 과정을 통한 작용기전과 운동능력 향상에 대한 실험 등이 추가된다면 유효 농도에서 독성이 낮으면서도 암을 제어할 수 있는 새로운 천연물 신약의 후보 물질로 이용될 가능성이 있는 것으로 판단된다.
저령 버섯으로부터 추출된 다당체는 78.2%의 당류, 16.8%의 단백질 및 4%의 회분으로 구성되었다. 저령다당체는 20-160 mg/kg/day로 ,3주간 투여 시 ICR mouse에서 유발된 sarcoma-180에 대하여 항종양효능을 나타내었다. 또한 저령다당체를 50-400$\mu\textrm{g}$/mL의 농도로 투여시 백혈암세포인 L-1210와 K-562세포에서 대조군에 비하여 52.6%, 55.0%로 각각 성장하였다. 그러나 이들 세포에서 세포사멸의 생화학적인 증거가 되는 DNA 분절현상은 나타나지 아니하였다. 2.5-10.0%의 농도의 저령다당체는 Salmonella typhimurium TA 100과 TA 98에서 2-nitrofluorene과 sodium azide에 의해 유발된 돌연변이를56%까지 억제하였다 이 결과로 저령다당체는 항종양효능, 암세포성장 억제효능 및 항돌연변이 효능을 갖는 것으로 사료되며, 이 항종양 및 암세포 성장억제효능은 세포사멸(apoptosis)에 기인하지 않는 것으로 사료된다.
Bujeonghangamtang(扶正抗癌湯) has been used for cure of tumor as a traditional medicine without any experimental evidence to support the rational basis for its clinical use. This study was carried out to evaluate the possible therapeutic or antitumoral effects of Bujeonghangamtang extract against tumor, and to carry out some mechanisms responsible for its effect. Some kinds of tumor were induced by the typical application of 3-methylcholanthrene. (MCA) or by the implantation(s.c) of malignant tumor cells such as leukemia cells(3LL cells) or sarcoma cells(Sl80 cells). Treatment of the Bujeonghangamtang water-extract (dailly 1mg/mouse, i. p.) was continued for 7 days prior to tumor induction and after that the treatment was lasted for 20 days. Against squamous cell carcinoma induced by MCA, Bujeonghangamtang decreased not only the frequency of tumor production but also the number and the weight of tumors per tumor bearing mice (TBM). Bujeonghangamtang also significantly suppressed the development of 3LL cell and S180 cell-implanted tumors in occurrence-frequency and their size, and some developed tumors were regressed by the continuous treatment of Bujeonghangamtang extract into TBM. In vitro, treatment of Bujeonghangamtang extract had no effect on the growth of some kinds of cell line such as FsaII, A431 strain but significantly inhibited the proliferation of 3LL, S180 cells and augmented the DNA synthesis of mitogen-activated lymphocytes. Bujeonghangamtang also stimulated the migrative ability of leukocyte, the MIF and IL-2 production of T lymphocytes, but not IL 6 production of B cells. Bujeonghangamtang-administration to mice enhanced NK cells activities. These results demonstrated that Bujeonghangamtang extract exhibited a significant prophylactic benefits against tumors and its antitumor activity was manifested depending on the type of tumor cells. And these results also suggested that effect of Bujeonghangamtang might be chiefly due to nonspecific enhancement of NK cell activities and cell-mediated immune responses.
Tish study was carried out to evaluate the possible therapeutic or antitumoral effects of Takrisodokyeum extract against tumor, and immunomodulatory effect. Some kinds of tumor were induced by the typical application of 3-methylcholanthrene (MCA) or by the implantation(s.c) of malignant tumor cells such as leukemia cells(3LL cells) or sarcoma cells(S-I80 and Fas II cells). Treatment of the Takrisodokyeum water-extract(daily 1mg mouse, i.p.) was continued for 7 days prior to tumor induction and after that the treatment was lasted for 15 days. Against squamous cell carcinoma induced by MCA, Takrisodokyeum decreased not only the frequency of tumor production but also the number and the weight of tumors per tumor bearing mice (TBM). Takrisodokyeum also significantly suppressed the development of 3LLcell and S-180 cell by frequency and their size, and some developed tumors were regressed by the continuous treatment of Takrisodokyeum extract into TBM. However, when tumor was induced by FsaII cell-implantation, the growth of implanted cells in mice was delayed by the water extract of Takrisodokyeum until day 7 and then rapid growth ensued. In vitro, treatment of Takrisodokyeum extract had no effect on the growth of some kind of cell lines such as FsaII, A-131 strain but significantly inhibited the proliferation of 3LL, S-180 cells. Takrisodokyeum also stimulated the migrative ability of leucocyte, the MIF and IL 2-production of T lymphocytes, but not IL 6 production of B cells. Takrisodokyeum enhanced Arthus reaction and DTH to sheep erythrocytes, and NK cells activities. These results demonstrated that Takrisodokyeum extract different results according to the type of tumor cells. And these results also suggested that antitumor effect of Takrisodokyeum might be chiefly due to nonspecific enhancement of NK cell activities and cell-mediated immune responses.
큰느타리 버섯으로부터 추출한 조다당체의 항산화 및 항암효과를 조사하였다. 항산화효과에 대한 실험에서 10, 100, 1,000 $\mu$g/mL 농도로 다당체의 처리시 linoleic acid에 대하여는 1,000 $\mu$g/mL 농도에서 만 과산화물의 생성을 억제하였으나, 흰쥐의 microsome에 대하여는 각 농도에서 대조구에 비하여 5.3%, 9.4%및 33%의 억제율을 나타내었다. 큰느타리 버섯 다당체를 A549, MCF-7 및 AGS 암세포주에 같은 농도로 72시간 처리시 1,000 $\mu$g/mL농도에서 대조구에 비하여 42.3, 33.4 및 26.7%의 증식억제 효과를 보였다. Sarcoma-180으로 복수암을 유발한 ICR mouse에 큰느타리 버섯 다당체를 100 mg/kg/day 및 300 mg/kg/day의 농도로 7일간 처리하고 30일이 경과한 후 관찰한 결과 대조구에 비하여 각 농도에서 70% 및 90%의 수명 연장 효과를 나타내었으며, 체중의 증가율도 대조구에 비하여 현저히 억제되었다.
된장을 극성이 다른 유기용매로 분획하여 Ames test를 이용한 항돌연변이성 효과를 알아보고자 하였고 Yac-1과 sarcoma-180암세포들의 증식에 대한 된장 분획물의 효과를 측정함과 동시에 면역과정의 생물학적 작용과 대사적 변화를 유도하는 interleukin-2 (IL-2)의 생성에 대한 효과도 검토하였다. AFB$_1$에 대한 돌연변이 억제효과는 된장의 메탄을 추출물을 2.5 mg/plate 농도로 첨가했을 때 84%의 돌연변이 저해효과를 나타내었고 같은 첨가농도에서 메탄을 분획물들중 디클로로메탄 분획물과 에틸아세테이트 분획물은 각각 96%, 97%로 상당한 항돌연변이 효과를 나타내었다. 직접돌연변이원인 MNNG의 경우, AFBI에 비해 돌연변이 저해효과가 다소 떨어지지만 그 중에서도 에틸아세테이트 분획물이 75%로 가장 높은 항돌연변이 효과를 나타내었다. Sarcoma 180 cell 암세포 증식 억제효과 실험에서 디클로로메탄 분획물(첨가농도 15.6 ${\mu}$g/ml)은 60%의 저해효과를 나타내면서 농도 의존적으로 그 저해효과가 컸으며 250 ${\mu}$g/ml 농도에서는 80%의 저해효과를 관찰 할 수가 있었다. 에틸아세테이트분회물의 경우 디글로로메탄 분회물에 비해 다소 낮은 저해효과를 나타내었지만 250 ${\mu}$g/ml 농도에서 약 60%의 세포독성 효과를 나타내었다. 디클로로메탄 분획물과 에틸아세테이트 분획물에 의한 면역 활성 증진 효과를 검토한 결과, 디글로로메탄 분획물은 첨가농도 1 ${\mu}$g/ml에서 94%로 Yac-1표적세포를 사멸시켰으며 에틸아세테이트 분획물도 동일 농도에서 96%의 억제효과를 나타내었다. CTLL세포를 이용하여 이들 분획물들에 의한 interleuk된장을 극성이 다른 유기용매로 분획하여 Ames test를 이용한 항돌연변이성 효과를 알아보고자 하였고 Yac-1과 sarcoma-180암세포들의 증식에 대한 된장 분획물의 효과를 측정함과 동시에 면역과정의 생물학적 작용과 대사적 변화를 유도하는 interleukin-2 (IL-2)의 생성에 대한 효과도 검토하였다. AFB$_1$에 대한 돌연변이 억제효과는 된장의 메탄을 추출물을 2.5 mg/plate 농도로 첨가했을 때 84%의 돌연변이 저해효과를 나타내었고 같은 첨가농도에서 메탄을 분획물들중 디클로로메탄 분획물과 에틸아세테이트 분획물은 각각 96%, 97%로 상당한 항돌연변이 효과를 나타내었다. 직접돌연변이원인 MNNG의 경우, AFBI에 비해 돌연변이 저해효과가 다소 떨어지지만 그 중에서도 에틸아세테이트 분획물이 75%로 가장 높은 항돌연변이 효과를 나타내었다. Sarcoma 180 cell 암세포 증식 억제효과 실험에서 디클로로메탄 분획물(첨가농도 15.6 ${\mu}$g/ml)은 60%의 저해효과를 나타내면서 농도 의존적으로 그 저해효과가 컸으며 250 ${\mu}$g/ml 농도에서는 80%의 저해효과를 관찰 할 수가 있었다. 에틸아세테이트분회물의 경우 디글로로메탄 분회물에 비해 다소 낮은 저해효과를 나타내었지만 250 ${\mu}$g/ml 농도에서 약 60%의 세포독성 효과를 나타내었다. 디클로로메탄 분획물과 에틸아세테이트 분획물에 의한 면역 활성 증진 효과를 검토한 결과, 디글로로메탄 분획물은 첨가농도 1 ${\mu}$g/ml에서 94%로 Yac-1표적세포를 사멸시켰으며 에틸아세테이트 분획물도 동일 농도에서 96%의 억제효과를 나타내었다. CTLL세포를 이용하여 이들 분획물들에 의한 interleukin-2 (IL-2)의 활성 증진 효과를 살펴보았을 때 대조군의 OD가 0.16인데 비해 디클로로메탄 분획물과 에틸아세테이트 분획물은 첨가농도 1 ${\mu}$g/ml에서 각각 0.30과 0.24를 나타내어 면역 활성 증진효과를 나타내었다. 따라서 된장에 의한 암세포 증식 억제효과는 IL-2같은 cytokine생성 증진에 따른 면역 담당 세포 활성화 작용과 관련을 가질 가능성이 있을 것으로 사료된다.in-2 (IL-2)의 활성 증진 효과를 살펴보았을 때 대조군의 OD가 0.16인데 비해 디클로로메탄 분획물과 에틸아세테이트 분획물은 첨가농도 1 ${\mu}$g/ml에서 각각 0.30과 0.24를 나타내어 면역 활성 증진효과를 나타내었다. 따라서 된장에 의한 암세포 증식 억제효과는 IL-2같은 cytokine생성 증진에 따른 면역 담당 세포 활성화 작용과 관련을 가질 가능성이 있을 것으로 사료된다.
나물이나 전분원료로 사용되어 온 얼레지(Erythronium japonicum)의 항암작용을 검색하였다. 얼레지 추출물을 Sarcoma 180으로 복수암을 유발시킨 ICR 마우스에 대하여 경구투여 한 결과 143.7%에 이르는 생명연장효과를 얻었으며, 백혈병계 암세포인 L1210 세포에 대해서는 최고 98.6%의 세포수 감소효과를 얻었다. 아울러 얼레지 추출물의 독성유무를 검색하고자 normal lymphocyte를 분리하여 이 정상세포에 얼레지 추출물을 첨가했을 때 세포수 감소는 거의 일어나지 않았으며, 고농도의 3일간의 긴 배양기간에 의해서도 L1210 세포의 경우 83.2%에 비해 5.8% 정도로 매우 적었다. 이와 같은 결과로부터 얼레지 추출물은 무독성 또는 저독성 항암제로서의 개발 가치가 있을 것으로 사료되었다. 한편 얼레지 추출물의 암세포에 대한 작용 기작으로 일환으로 활성산소인 ${O_2}^-$의 생성량을 측정한 결과 control 값의 최대 약 3.6배까지 크게 증가하였으며, 동시에 ${O_2}^-$ 전환효소인 SOD와 SOD의 종산물인 $H_2O_2$, 분해효소인 GPx도 각각 5배와 3배까지 크게 증가하였다. 따라서 얼레지 추출물은 암세포에서 ${O_2}^-$를 비롯한 활성산소를 유발시키고 이 증가된 활성산소가 암세포의 apoptosis를 야기하는 것으로 간주되었다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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