Kim, Hyejin;Lee, Miae;Lee, Sunhee;Park, Byoungwoo;Koh, Wansoo;Lee, Dong Jun;Lim, Dae-Sik;Lee, Soojin
Molecules and Cells
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제27권6호
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pp.697-701
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2009
We previously identified cancer-upregulated gene 2 (CUG2) as a commonly up-regulated gene in various human cancer tissues, especially in ovary, liver, and lung (Lee et al., 2007a). CUG2 was determined to be a nuclear protein that exhibited high proto-oncogenic activities when overexpressed in NIH3T3 mouse fibroblast cells. To identify other cellular functions of CUG2, we performed yeast two-hybrid screening and identified CENP-T, a component of CENP-A nucleosome complex in the centromere, as an interacting partner of CUG2. Moreover, CENP-A, the principle centromeric determinant, was also found in complex with CENP-T/CUG2. Immunofluorescent staining revealed the co-localization of CUG2 with human centromeric markers. Inhibition of CUG2 expression drastically affected cell viability by inducing aberrant cell division. We propose that CUG2 is a new component of the human centromeric complex that is required for proper chromosome segregation during mitosis.
This study was undertaken to investigate the morphological changes between normal and atretic follicle after gamma irradiation and treatment of follicle stimulating hormone (FSH). The ovaries of each group of treated immature mice were prepared the paraffin sections after 0, 6, 12, and 24 hours (hrs) of those treatment. Hematoxylin-eosin (HE) stain, reticulin stain, and terminal deoxynucleotidyl transferase (TdT)-mediated dUTP nick end labeling (TUNEL) immunohistochemical stain were performed on the each paraffin sections. As the results of HE staining, the condensed nuclei of oocytes were observed in the atretic primordial follicles, on the other hand the condensations of granulosa cell nuclei were prominent in the atretic primary, preantral, and antral follicles. Only the granulosa cells of atretic follicle were stained specifically with TUNEL staining but not stained in the theca cells, which suggested granulosa cells degenerated through apoptosis. In the reticulin staining, the basement membranes of atretic follicle which was stained weakly showed irregular structure and detachment from the follicles. The ratio of normal to atretic follicle in control and FSH treated group was about 33% but this ratio increased rapidly over 90% in the 6, 12, and 24 hrs group after the irradiation. It could be suggested that the gamma irradiation is the useful tool far the induction of follicle atresia and immunohistochemical staining methods are essential in the study of follicle atresia.
We performed this study to determine the late biological effect of gamma radiation and effect of Bu-Zhong-Yi-Qi-Tang (BZYQT), a prescription of traditional Oriental medicine, on radiation-induced late biological effect (survival, hematological change, carcinogenesis) of mice irradiated with 3 Gy of gamma-radiation. There were little difference in body weights between normal and irradiated mice. Survival rate were decreased in irradiated mice and the survival rate and mean survival time of the groups treated with BZYQT were far better than the irradiation control group. A significant elevation of total leukocyte or lymphocyte counts was seen at week 4 and 12 of the group treated with BZYQT. Stimulated recovery by the extract from BZYQT was also observed in thrombocyte. Main gross findings of irradiated mice were appeared as enlargement of spleen, thymus and liver, tumorous nodules of lung and cyst or mass of ovary. Microscopically, there were various findings including hematopoietic and lymphoid tumor, lung cancer, ovarian cancer and cancer of other lesions. BZYQT reduced the incidence of tumor development. Further studies are needed to characterize better the protective nature of ingredients and active compounds.
국매리복의 독성을 조사하기 위하여 1992년과 1993년 봄과 가을에 인천과 안산에서 31개체를 구입하여 조직별 독성을 조사하였다. 조직의 최고 독성으로 보아 생식선(수컷, 4,920MU/g; 암컷, 2,500MU/g) 간장(1,680MU/g)과 근육(1,600MU/g)은 맹독이었으며, 내장(950 MU/g)과 껍질(550MU/g)은 강독이었다. 이들의 평균 독성은 모두 강독으로 나타났다. 한편 간장, 내장의 독성은 가을철보다 봄철에 더욱 강하여서 계절 차이를 확인할 수 있었다. 이러한 결과는 국매리복이 맹독성의 복어임을 입증하는 것이므로, 따라서 이들의 섭식으로 인한 중독 예방을 위한 조치가 필요하겠다.
황복의 독성을 조사하기 위하여 1992년과 1993년에 임진강으로 산란하러 소상한 46 개체를 채집하여 조직별로 나누어 독성을 살펴보았다. 조직중에서는 난소와 간장은 맹독이었으며, 정소, 내장, 담낭과 비장은 강독이었고, 근육과 껍질은 약독이었으나 혈액은 무독이었다. 본 결과는 Tani (1945)의 보고와 정소, 근육, 껍질의 독성에서 차이를 보였으며, 특히 이제까지 무독 또는 약독으로 여겨 식용으로 하여 왔던 근육과 정소의 독성이 본 연구에서는 약독 또는 강독으로 독성을 보이고 있어, 중독 예방을 위해서는 주의할 필요가 있다.
본 연구는 6 MV LINAC에서 발생한 X-선을 생쥐 생체에 조사한 후, 방사선 조사선량에 따른 난소조직의 미세구조적 변화를 고배율의 전자현미경을 이용하여 관찰하였다. 방사선 조사에 따른 난소조직의 미세구조 변화를 관찰하기 위하여 고배율의 전자현미경으로 관찰한 결과, 방사선량의 증가에 따라 성장난포의 과립층세포에서 핵과 세포질의 미세구조 변형이 급격히 증가하였으며, 난포동에서는 세포사의 부산물인 세포 잔류체들과 백혈구 및 대식세포 등이 관찰되었다. 과립층세포의 미세구조적 변형은 주로 핵의 응축에 의한 전자밀도의 증가와 핵의 분절화, 그리고 세포질의 위축 등, 전형적인 세포예정사의 특성을 나타내고 있었다. 세포의 괴사도 일부 확인되었으나 그다지 현저하지 않았으며, apoptotic body와 함께 대식세포가 산재되어 있었다.
Kim, Ju-Hwan;Kim, Hwan-Tae;Park, Kee-Sang;Song, Hai-Bum;Chun, Sang-Sik
한국동물번식학회:학술대회논문집
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한국동물번식학회 2001년도 춘계학술발표대회
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pp.8-8
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2001
Mouse follicles require the addition of gonadotropins (Gns) to complete maturation and ovulation of oocyte and antrum formation of follicles in vitro. However, we tried examination of in vitro growth of mouse pre-antral follicles in medium without Gns and physiological factors. And also, pre-antral follicles were isolated from ovaries by mechanical method. Our present studies were conducted to evaluate on the growth of follicles and intra-follicular oocytes and antrum formation in vitro of mouse pre-antral follicles in two different media. Pre-antral follicles (91-120${\mu}{\textrm}{m}$) were isolated mechanically by fine 30G needles not using enzymes from ovary of 3-6 weeks old female ICR mice. Isolated pre-antral follicles were cultured in 20 ${mu}ell$ droplets of TCM (n=17; follicles: 107.8 $\pm$ 1.58 ${\mu}{\textrm}{m}$; oocytes: 59.9$\pm$1.2 ${\mu}{\textrm}{m}$) or MEM (n=12; follicles: 109.3$\pm$2.53 ${\mu}{\textrm}{m}$; oocytes: 55.4 $\pm$1.6${\mu}{\textrm}{m}$) under mineral oil on the 60mm culture dish. All experimental media was supplemented with 10% FBS but without Gns and/or physiological factors. Pre-antral follicles were individually cultured in drops for 8 days. Antrum formation and growth of pre-antral follicles and intra-follicular oocytes were evaluated using a precalibrated ocular micrometer at $\times$200 magnifications during in vitro culture. Results between different groups were analyzed using combination of Student's t-test and Chi-square, and considered statistically significant when P<0.05. Antrum formation of pre-antral follicles had started in two culture media on day-2. On day-8, antrum formation had occurred in 58.3%(7/12) of pre-antral follicles cultured in MEM, but only in 23.5% (4/17) of those cultured in TCM (P=0.0364). Growth of pre-antral follicles and intra-follicular oocytes were observed on day-4 and -8. On day-4, follicular diameters was similar (P=0.1338) in TCM (119.4$\pm$2.58 ${\mu}{\textrm}{m}$) and MEM (125.4$\pm$4.52 ${\mu}{\textrm}{m}$). However, on day-8, diameters of pre-antral follicles cultured in MEM (168.9$\pm$17.29 ${\mu}{\textrm}{m}$) was significantly (P=0.0248) bigger than that in TCM (126.7$\pm$4.28 ${\mu}{\textrm}{m}$). On day-4 and -8, diameters of intra-follicular oocytes were similar TCM (67.1$\pm$1.3 and 72.4$\pm$0.9${\mu}{\textrm}{m}$) and MEM (65.2$\pm$1.7 and 73.3$\pm$1.5 ${\mu}{\textrm}{m}$), respectively. We can conform that medium not supplemented with Gns and/or physiological factors can be used for in vitro antrum formation and growth of mouse pre-antral follicles and intra-follicular oocytes. In conclusion, MEM supplemented with FBS can be used for growth in vitro of mouse pre-antral follicles isolated mechanically.
포유류의 난소에서 과립막 세포)는 난포내 난자를 둘러싸고 난자 뿐만 아니라 난포의 발달에 필요한 상태를 만드는데 중요한 역할을 한다, 그리고 협막세포 등의 성장과 분화를 조절하는 매우 복잡한 과정이다. 본 연구의 목적은 성장이 정지되어 있는 원시난포에서 성장이 개시되는 1차난포, 2차난포로 전환하는 동안에 관여하여 발현하는 유전자를 조사하는 것이다. 본 연구에서는 5일자, 12일자 난소로부터 총 리보핵산을 추출하여 동량의 RNA로부터 cDNA를 합성하여 ACP-PCR을 수행하였다. 서로 다르게 발현하는 유전자들 (DEGs)을 클로닝과 BLAST를 통한 염기서열 분석하였다. Anxa11과 Plekha5는 5일자 난소에서 높게 나타났으며 특히 난자핵과 세포질에서 높게 발현하였다. 이에 반해 과립막 세포에서는 난포발달단계에 따라 증가하는 양상을 보였다. 본 연구에서 성공적으로 5일, 12일 난소에서 서로 다르게 발현하는 발현유전자 목록을 일부 찾아 확인하였다. 이들은 막융합을 통해 난소의 난포발달과정에서 시간적-공간적인 조절 기전에 의해 이루어 질 것으로 보인다. 이 유전자 발현 정보는 원시난포의 개시와 성장을 위한 전환에 관여하는 기전을 이해하는 기초정보와 난소기능부전의 기전을 규명하는데 정보를 제공할 것으로 기대된다.
본 연구는 6 MeV LINAC에서 발생한 X-선을 생쥐 생체에 조사한 후, 방사선 조사선량에 따른 난소 조직의 미세구조적 변화를 광학 및 전자현미경으로 관찰하였다. X-선을 200 cGy의 선량을 조사한 후 적출한 난소조직에서 성장난포의 과립층세포는 핵이 응축되어 나타났고, 난자를 둘러싸고 있는 투명층은 정상 대조군에서보다 경계가 불규칙하게 관찰되었다. 400 cGy로 조사된 난소조직에서 과립층세포는 대부분 응축된 핵을 가지고 있었으며, 피폭된 과립층세포의 사멸에 의한 세포질의 단백질 변성이 확인되었다. 600 cGy의 선량을 조사한 난소의 조직표본에서 성장난포는 위축되어 있었으며, 난포동에는 백혈구가 침윤되어 있었고, 난포액은 정상난포와 달리 불균질한 물질로 채워져 있었다. 투과전자현미경으로 관찰한 결과, 200 cGy의 방사선을 조사한 성장난포에서 과립층세포는 정상난포와는 달리 불규칙한 모양을 하고 있었다. 과립세포 사이의 난포동에는 많은 세포성분의 부스러기가 산재하여 있었으며, 이들 주변에 호중구와 대식세포가 관찰되어, 이 시기에 이미 방사선 피폭에 의한 세포사의 기작이 진행되고 있음이 확인되었다. X-선을 600 cGy로 조사한 난소조직의 과립층세포는 세포의 형태나 핵의 변형이 현저하여, 일부 세포는 핵의 분절화가 진행되는 등, apoptosis의 전형적인 특징이 관찰되었다. 특히 성장난포의 난포동에서는 염증반응에 관여하는 호중구가 잘 관찰되었으며, 주변에 산재된 세포 파쇄물 및 apoptotic body와 함께 대식세포의 출현도 확인되었다.
Growth/differentiation factor-9 (GDF-9)은 transforming growth factor $\beta$ (TGF-$\beta$) superfamily의 member로서 난소의 난자에서만 특이적으로 발현되며 정상적인 난포발달에 있어 필수적인 성숙인자로 최근에 알려졌다. 본 연구는 RT-PCR을 통해 생쥐의 원시난포에서의 GDF-9 mRNA의 발현 여부와 함께 난포의 발달단계에 따른 상대적인 발현량을 분석하고자 실시하였다. 본 실험에는 ICR 생쥐를 사용하여 질전 (vaginal plug)이 확인된 날을 1일로 하여 임신 19일의 태아와 태어난 날을 1일로 하여 생후 1일, 10일, 21일, 28일된 생쥐 난소를 실험에 사용하였다. 각 발달단계의 난소조직으로부터 total RNA를 추출하여 GDF-9 유전자 발현 여부를 확인하였으며 이들을 $\beta$-actin에 대해 상대적인 정량분석을 하였다. GDF-9 유전자 발현은 아직은 성장을 시작하지 않은 임신 19일의 태아의 난소, 대부분이 원시난포로 이루어진 태어난 날의 생쥐 난소에서도 확인되었으며, 성장이 왕성하게 진행되고 있는 난포 즉, antrum 형성 이전의 growing follicles이 주를 이루는 생후 10일째의 난소에서 가장 높은 GDF-9 유전자 발현이 관찰되었다. 나머지 단계의 난소에서는 거의 비슷한 정도로 발현함을 관찰할 수 있었다. 본 연구의 결과는 생쥐의 원시난포에도 GDF-9 transcript가 존재한다는 것을 확실하게 증명하였으며, GDF-9이 생쥐의 초기 난포발달에 중요한 역할을 할 것이라는 가능성을 시사한다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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