방선균 Streptomyces mobaraensis IFO13819 유래 transglutaminase(mTGase)는 칼슘 비의존성으로 식품산업에서 유용하게 이용되고 있는 효소이다. mTGase는 406개의 아미노산으로 구성되어 있는데 leader와 pro 부위는 75개, 구조 부위는 331개의 아미노산으로 구성되어있다. mTGase의 pro와 구조 유전지를 pYAEG-TER 벡터에 클로닝하고 Saccharomyces cerevisiae 2805에 형질전환하였다. 형질전환체에서 mTGase의 발현을 Northern hybridization을 통해 확인하였으며, 최대 26 mU/ml의 mTGase의 활성을 측정할 수 있었다.
수입산 밀가루(ASW+AH)와 쌀가루(오대)를 첨가한 혼합된에 transglutaminase를 첨가하여 반죽 물성 및 가공적 싶을 조사한 결과는 다음과 같다. Mixograph의 결과에서, 수입산 밀가루(ASW+AH)에 transglutaminase를 첨가한 mixograph 특성은 transglutaminase를 첨가할수록 각각 stability가 증가하다가 5,000 ppm 이상에서 감소하는 것으로 나타났다. 수입산 밀가루에 쌀가루(오대)를 첨가할수록 mixograph 패턴은 매우 불규칙하고 불안정한 패턴을 보여주고 있으며, stability, midline peak time, midline peak height, width at peak등의 파라메터 측정치와 특정한 관련성을 보이지 않았다. 그러나 수입산 밀가루(ASW+AH)와 쌀가루(오대)의 혼합분에 transglutaminase를 첨가함에 따라 이러한 불규칙성이 감소하였다. Farinograph의 결과에서, 수입산 밀가루(ASW+AH)에 첨가한 쌀가루(오대) 함량이 증가할수록 stability와 valormeter value는 급격히 감소하고 weakness는 크게 증가하여 매우 약하고 안정성이 낮은 반죽을 형성하였다. 그러나 transglutaminase를 첨가함에 따라 수입산 밀가루(ASW+AH)에 쌀가루(오대)를 첨가한 복합분의 stability와 valormeter value는 증가하였고, weakness는 감소하였다. 수분 흡수량은 대조군인 수입산 밀가루(ASW+AH)의 반죽에 비하여 쌀가루(오대) 혼합비율이 커질수록 증가하였으며, transglutaminase를 첨가함에 따라 수분 흡수량이 감소하는 경향을 가졌다. Peak time은 수입산 밀가루(ASW+AH)와 쌀가루(오대)를 첨가할수록 짧은 경 향을 나타내었으며, 두 반죽 모두 ttansglutaminase 를 첨가할수록 길어지는 경향을 나타내었다 조리면의 기계적 조직감을 Texture profile analysis(TPA)로 측정한 결과, 쌀가루(오대)를 첨가하여 제조한 혼합분(10, 30, $50\%$)에 transglutaminase(3000, 1000, 7000 ppm)를 첨가함에 따라 검성, 씹힘성, 견고성 등 TPA 파라메터 값이 증가하였고, 10,000 ppm 첨가시에는 비슷한 수치를 나타내거나 감소하였다. 관능평가 결과에서는 쌀가루를 $30\%$ 첨가한 혼합분으로 제조한 조리면의 조직감(씹힘성, 견고성)은 수입산 밀가루에 비해서 낮게 평가되었으나, transglutaminase를 7,000 ppm 첨가한 쌀 혼합분 조리면의 씹힘성이 향상되었다.
본 연구는 transglutaminase 생산능이 우수한 토양유래방선균 strain YK-2를 TGase 최적생산배지에서 $28^{\circ}C$, 5일간 배양하여 얻은 배양여액으로 본 효소의 정제 및 정제된 효소의 효소화학적 특성에 관하여 검토한 것이다. 본 효소의 정제는 50% methanol precipitation, DEAE-Sephadex column chromatography의 정제 절차를 거쳐 56.5%의 수율로 정제되었고, 정제된 효소의 순도는 12.5% SDS-PAGE에서 단일 밴드를 나타내어, 서브유닛트의 분자량이 약 45,000 dalton으로 추정되는 호모형 효소인 것을 알 수 있었다. 정제된 TGase의 생화학적 제 특성을 검토한 결과, 등전점은 pH $6.0{\sim}7.0$ 부근에 있는 것으로 나타났으며, 본 효소의 기질인 CBZ-L-Gln-Gly 농도에 대한 Km치는 18.5 mM으로 추산되었다. 또한 금속이온 및 저해제의 영향으로는 $Hg^{++}$에 의해서 본 효소의 활성이 강하게 저해되었으나, DTT 및 mercaptoethanol에 의해 각각 293% 및 219% 활성이 증가하였다.
본 연구는 TGase 첨가에 따른 근원섬유 단백질과 비육류 단백질인 적소두단백질 또는 대두단백질간의 상호작용을 비교 평가하기 위해 수행되었다. 실험 1에서는 비육류 단백질 함량에 따른 물성 변화를 평가하였으며 실험 2에서는 TGase 반응시간에 따른 최적 조건을 평가하였다. 가열수율은 비육류 단백질을 첨가한 처리구에서 유의적으로 증가하였으며 특히 적소두단백질 1%을 첨가하였을 때 가장 높은 가열수율을 나타내었다(p<0.05). 반면에 겔 강도 및 점성도는 근원섬유 단백질 단독 처리구와 비육류 단백질을 첨가한 처리구와 비교하였을 때 유의적으로 차이가 나타나지 않았다(p>0.05). 또한 전기영동 결과는 가열 전 TGase 첨가 후 4시간 반응시켰을 때는 모든 처리구에서 변화를 보이지 않았지만(실험1), TGase 첨가 후 10시간 반응시킨 모든 처리구에서는 biopolymer 밴드가 나타났다(실험2). 또한 TGase 반응시간에 따른 겔 강도는 10시간째에 유의적으로 증가하였다(p<0.05). 하지만 10시간의 반응시간은 배양시간이 너무 길어 산업적으로 이용하기 부적합 하기 때문에 TGase함량을 0.5%로 증가시켜 효소와 단백질간의 최적 반응시간을 평가하고 비육류 단백질과의 상호작용을 통한 물성을 증진시키는 연구가 앞으로 필요할 것으로 사료된다.
Soybean proteins appear to harbor a great deal of potential as functional ingredients due to the fact that they are composed of highly bioavailable peptides and amino acids. To develop drink- or gel-type foods formulated with soybean protein, the physicochemical properties of intact and chemically modified soy glycinin were assessed. Maleylation to soy glycinin altered the surface charges of glycinin via the modification of lysine residues, and subsequently generated the dissociation of glycinin subunits owing to the increase in charge repulsion. This modification thus improved the solubility of glycinin, particularly under acidic pH conditions. It is worthy of note that maleylation increased the susceptibility of the basic subunits of mTGase and the formation of a substantial quantity of molecules at a low protein solution concentration. The results of dynamic rheological studies indicated that the 5% intact glycinin progressively formed the gel with mTGase treatment in a concentration-dependent manner, but maleylated-glycinin did not.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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