These studies were carried out to detect the presence of infected virus- like particles and also were observed the ultrastructures of Aspergillus ochraseus isolated from kokja and Korean ginseng. The results of ultrastructures of Aspergillus ochraseus are summarized as follows: 1. In fungal cells, nuclei were enclosed by a irregular double membrane and nucleoli in the nucleus. 2. In cytoplasm, mitochondria, rough endoplasmic reticulum with ribosomes and glycogen were scattering distributed and many lomasomes also observed. 3. The osmiophilic bodies of fungal cells existed in the vesicles. 4. The cell walls were composed of a low electron dense materials. 5, Conidia cell walls were extremely thick and possessed the high electron density of outer coat. The virus-like particles were observed in the hyphae of Penicillium chrysogenum Q-176. These virus-like particles measured $350{\AA}$ in diameter. But strains of Aspergillus ochraseus, showing some vesicle particles were also observed about $800{\AA}$ in diameter in the central region of young fungal hyphae. Based on the results of these experiments, it can not be determined virus particles or not. The further studies to determination of virus particles will be proceeded by the chemical, physical and biological assay methods.
Selective quenching of 1, 6-diphenyl-1, 3, 5-hexatriene (DPH) by trinitrophenyl groups was utilized to examine the transbilayer fluidity asymmetry of model membranes of phospholipids (SPMVPL) extracted from synaptosomal plasma membrane vesicles (SPMV). The polarization (P), anisotropy (r), limiting anisotropy $(r_\infty$), and order parameter (S) of DPH in the inner monolayer were 0.019, 0.014, 0.018, and 0.047, respectively, greater than calculated for the outer monolayer of SPMVPL. Selective quenching of DPH by trinitrophenyl groups was also utilized to examine the effects of n-alkanols on the individual monolayer structure of SPMVPL. n-Alkanols fluidized the hydrocarbon region of bulk SPMVPL and the potencies of n-alkanols up to 1-nonanon increased with carbon chain length. It appears that the potencies in bilayer fluidization increase by 1 order of magnitude as the carbon chain length increases by two carbon atoms. The cut-off phenomenon was reached at 1-decanol, where further increase in hydrocarbon length resulted in a decrease in pharmacological activity. The n-alkanols had greater fluidizing effects on the outer monolayer as compared to the inner monolayer of SPMVPL, even though these selective effects tended to become weaker as the carbon chain length increased. Thus, it has been proven that n-alkanols exhibit selective rather than nonselective fludizing effects within transbilayer domains of SPMVPL.
A wide variety of drugs and endogenous bioactive amines are organic cations (OCs). Approximately 40% of all conventional drugs on the market are OCs. Thus, the transport of xenobiotics or endogenous OCs in the body has been a subject of considerable interest, since the discovery and cloning of a family of OC transporters, referred to as organic cation transporter (OCTs), and a new subfamily of OCTs, OCTNs, leading to the functional characterization of these transporters in various systems including oocytes and some cell lines. Organic cation transporters are critical in drug absorption, targeting, and disposition of a drug. In this review, the recent advances in the characterization of organic cation transporters and their distribution in the small intestine are discussed. The results of the in vitro transport studies of various OCs in the small intestine using techniques such as isolated brush-border membrane vesicles, Ussing chamber systems and Caco-2 cells are discussed, and in vivo knock-out animal studies are summarized. Such information is essential for predicting pharmacokinetics and pharmacodynamics and in the design and development of new cationic drugs. An understanding of the mechanisms that control the intestinal transport of OCs will clearly aid achieving desirable clinical outcomes.
Chung, In-Kyo;Kim, Inn-Se;Choi, Chang-Hwa;Cho, Goon-Jae;Kim, Jin-Bom;Son, Woo-Sung;Jang, Hye-Ock;Yun, Il
The Korean Journal of Physiology and Pharmacology
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제4권3호
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pp.243-251
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2000
In order to provide a basis for studying the molecular mechanism of pharmacological action of local anesthetics and to develop a fluorescence spectroscopic method which can detect the microviscosity of native and model membranes using intramolecular excimerization of 1,3-di(l-pyrenyl)propane (Py-3-Py), we examined the effect of lidocaine HCl on the microviscosity of model membranes of phosphatidylcholine fraction extracted from synaptosomal plasma membrane vesicles (SPMVPC). The excimer to monomer fluorescence intensity ratio (I'/I) of Py-3-Py in liquid paraffin was a simple linear function of $T/{\eta}.$ Based on this calibration curve, the microviscosity values of the direct probe environment in SPMVPC model membranes ranged from $234.97{\pm}48.85$ cP at $4^{\circ}C$ to %19.21{\pm}1.11$ cP at $45^{\circ}C.$ At $37^{\circ}C,$ a value of $27.25{\pm}0.44$ cP was obtained. The lidocaine HCl decreased the microviscosity of SPMVPC model membranes in a concentration-dependent manner, with a significant decrease in microviscosity value by injecting the local anesthetic even at the concentration of 0.5 mM. These results indicate that the direct environment of Py-3-Py in the SPMVPC model membranes is significantly fluidized by the lidocaine HCl. Also, the present study explicitly shows that an interaction between local anesthetics and membrane lipids is of importance in the molecular mechanism of pharmacological action of lidocaine HCl.
Degranulation of the rat peritoneal mast cell induced by intraperitoneal injection of horseradish peroxidase(HRP) was studied using light and electron microscopes. 1. Rat peritoneal mast cells in the Tyrode's buffered salt solution injected control group did not show any particular morphological changes following the specified time course. 2. Under the light microscope, the majority of mast cells observed 10 minutes after HRP injection were nearly the same as those of the control group. However, after 30 minutes, granule densities or staining properties of certain cells began to decrease and these appearances increased gradually until 12 hours after injection, at which time small groups of granules being stained pale-red or pink with toluidine blue were easily identified in the cytoplasm of many cells, and numerous extruded granuleg were scattered around these cells. 3. In the mast cells representing the early stage of degranulation induced by HRP, the electron densities of certain granules decreased as the size enlarged, and perigranular cavities were formed by perigranular membrane expansion. As a result, a thin cytoplasmic septum was formed between the expanded perigranular membrane and the cytoplasmic membrane in the cell periphery, and fusion of the adjacent perigranular membranes was observed in the inner side of the cell. 4. In some mast cells, one or two changes in the peripheral cytoplasmic septum could be seen. One was a focal rupture of the peripheral septum and the other was the formation of a saccule containing one or more vesicles. This saccule was thought to be used for granule-extrusion site and/or material absorptive apparatus judging from the morphological characteristics. 5. As the degranulation proceeded, the granule was extruded from the cell after partial rupture of the peripheral cytoplasmic septum. This phenomenon proceeded to-ward the inner side of the cell through the fused perigranular cavities, and consequently several distinct cavities containing a few unextruded membrane-free granules were formed throughout the cytoplasm after 12 hours. As a rule, the granule-extrusion sites were relatively fewer while the cytoplasmic cavities resulting from degranulation were more numerously observed. Thus, it was thought that the granule-extrusion sites tended to be restricted in the HRP-induced degranulation.
경골어류, 시클리드과(Cichlidae)에 속하는 크리벤시스(Pelvicachromis pulcher)의 난자형성과정을 광학현미경으로 관찰한 결과는 다음과 같다. 크리벤시스의 난소는 한 쌍으로 부레와 창자사이에 위치하고 있었으며 황색을 띠었다. 난소의 형태는 장타원형(장축 20 mm, 단축 5 mm)이었다. 초기난원세포는 진한 파란색으로 염색되었으며 발달함에 따라서 난원세포의 세포질은 hematoxylin으로 초기의 난원세포에 비하여 파란색으로 낮게 염색되었으며 핵 안에 여러 개의 인들이 초기시기의 난원세포와 같이 핵막 안쪽에만 배열하는 특징을 보였다 발달함에 따라서 제1난모세포(primary oocyte)는 커졌으며 초기 난원세포에 비하여 색상은 좀 흐려져 보라색에 가깝게 관찰되었고 난막은 관찰되지 않았다. 난황포(yolk vesicle)들은 핵 주변부에는 관찰되지 않았고 세포질의 가장자리에만 국한적으로 형성되기 시작하였다. 제1난모세포가 발달함에 따라서 난황포는 바깥 가장자리에서 안쪽으로 증식되어 핵 쪽으로 이동되었으며 제2난모세포는 세포질이 전체적으로 호산성이었으며 난황포가 세포질 전체에 분포하였다. 일부 난황포는 작은 난황괴를 형성하기 시작하였으나 핵 주변부에서는 난황괴 형성은 많이 이루어지지 않았다. 성숙한 난자는 난자의 크기가 상당히 커졌으며 난황포는 더욱 발달하여 난황괴(yolk mass)를 이루고 있었고 성숙난의 난황괴를 확대한 결과 난황괴속에 염색밀도가 낮은 다각형 또는 타원형의 결정구조물들이 채워져 있었다. 이상과 같이 크리벤시스의 난자형성과정은 난세포의 크기증가, 난황낭의 축적, 세포질 내 염기성 물질이 산성으로 전환 및 난막의 발달로 요약될 수 있으며 일반적인 다른 과의 담수경골어류와 큰 차이는 없는 것으로 확인되었다. 그러나 난황포의 배열방식과 난황괴의 형태는 다른 종과 구별되는 종특이성이다.
사람의 적혈구막으로부터 Band 3를 분리정제하고 이를 liposome 내로 도입시켜 그 결과를 관찰하였다. 적혈구를 약알칼리 저장액으로 용혈시켜 막을 분리한 후, 저이온강도 용액으로 처리하여 Band 4를 추출하였다. Triton X-100 추출액에 p-chloromercuribenzoate를 가하고 sucrose density gradient ultracentrifugation후 fractionation하여 Band 3를 정제하였다. phosphatidyl L-serine과 cholesterol을 1 : 1 molar ratio로 섞고 진공회전 증발기를 사용하여 chloroform을 제거한 후 Triton X-100을 제거한 Band 3용액을 가하고 sonication함으로 liposome(reverse-phase evaporation vesicle)을 만들면서 Band 3를 도입 시켰다 Band 3의 분리정제 및 liposome에 도입되었음은 sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel 전기영 동 후 coomassie brilliant blue 염색으로 확인할 수 있었다.
본 연구는 간이 수경재배법을 이용하여 보리의 알루미늄 스트레스 내성과 민감성 품종을 간편하고 빠르게 screen하는 방법을 소개하고, 선별된 품종간의 뿌리의 생장, 뿌리 조직의 염색, 알루미늄 함량, 원형질막의 $H^+$-ATPase의 발현 변화를 조사하여 분석하였다. l. 보리 65가지 품종을 간이 수경재배법을 이용하여 $20{\mu}M$ 알루미늄을 24시간 처리 후 뿌리생장의 차이로 내성 세 품종(자예2, 자예6, 모치무기)과 민감성 세 품종(흰쌀, 올쌀, 품2)을 선별하였다. 2. 알루미늄에 내성 품종은 알루미늄 처리 농도(0, 5, 10, $20{\mu}M$)에 따라 뿌리 생장 감소폭이 적었으나, 민감성 세 품종은 상대적으로 낮은 $5{\mu}M$ 농도에서부터 80%의 생장이 억제되었다. 3. 내성인 자예2와 민감성인 품2의 알루미늄 처리 후, 농도별(0, 5, 10, $20{\mu}M$), 시간별(3, 6, 12, 24시간)로 0.2% hematoxylin으로 염색 시 주로 apex에 3시간 이후부터 염색되었으며, 민감성 품2가 내성인 자예2에 비해 농도와 시간에 따라 그 피해 정도가 매우 심각하였다. 4. $20{\mu}M$로 24 시간 처리된 뿌리 apex(10 mm)의 알루미늄 함량을 측정한 결과, 내성인 자예2는 주당 47.1 nmol의 함량을 보여 주었으나, 민감성인 품2는 주당 64.9 nmol의 높은 함량을 보여 주었다. 5. 24시간 동안 $20{\mu}M$ 알루미늄을 처리한 뿌리 원형질막 $H^+$-ATPase 발현을 western blotting을 통해 분석한 결과, 내성인 자예2는 차이가 없었으나, 민감성 품2는 현저히 억제되었다. 이로 보아 원형질막 $H^+$-ATPase가 알루미늄의 내성 기작에 관여하는 것으로 보인다. 6. 본 연구를 통해 간이 수경재배와 hematoxylin을 이용한 염색으로 간단하고 빠르게 보리의 알루미늄 내성과 민감성 품종의 screening을 할 수 있었고, 보리뿐 아니라 쌀, 밀 등의 다른 종자에도 적용할 수 있을 것이다.
본 연구에서는 유자의 미성숙 배로부터 캘러스 유도와 재분화 및 발생단게별 미세구조적 특성에 관하여 연구하였다. 유자에서는 배양 5-6주 경에 담황색의 캘러스가 유도되었으며, 배양 6주경의 캘러스 세포에서는 인접하고 있는 작은 액포들이 융합하여 큰 액포를 형성하는 융합현상을 관찰하였다. 배양 12주 경에는 배발생 캘러스의 미분화 세포에서 특이하게 구형의 핵인을 가지고 있는 큰핵과 녹말로 가득차 있는 녹말체를 다수 관찰하였다. 배양 14-16주 경의 배발생 캘러스 세포에서는 활발하게 exocytosis가 일어나므로서 다수의 분배체들이 세포벽쪽에서 관찰되었으며 세포질로부터 작은 입자들이 세포 간극으로 빠져나가는 것을 볼수 있었다. 또한 배양 24주경의 배발생 캘러스에서는 발달된 커다란 구형의 엽록체들이 이중막으로 세포질과 경계되어 있었으며 기질중에 일정하게 전형적인 그라나가 분포되어 있었다. 배양 26주경의 어린 정상 식물체의 미성숙잎에서는 다수의 도관과 반세포들이 관찰되었다. 배양 30주경의 정상식물체의 미성숙잎에는 다수의 작은 반세포들과 사관 그리고 중심액포들이 나타났으며 또한 작은 제2차 액포들이 커다란 중심 액포 속으로 끼어들어가는 현상을 볼 수 있었으며 원형질막 근처에는 신장된 엽록체들이 분포되어 있었다.
잉어과(Pisces, Cyprinidae)에 속하는 멸종위기 어류인 돌상어 Gobiobotia brevibarba의 난막미세구조 및 난자형성과정을 광학현미경과 주사전자현미경을 이용하여 관찰하였다. 2014년 5월의 돌상어 난소 내에는 다양한 발생단계의 생식세포들이 관찰되었다. 난모세포들의 상대면적은 성숙란(74.5%), 난황물질이 형성되는 난황구기(16.6%), 난황포기(6.6%), 그리고 미숙한 발달단계인 주변인기(2.3%) 순으로 구성되어 있었다. 주변인기 단계의 세포질은 hematoxylin에 강하게 염색되며, 핵막의 안쪽에는 다수의 인들이 존재하였다. 난황형성물질인 난황포기와 초기 난황구기 단계에서는 여포층과 방사대가 뚜렷하게 형성되기 시작되었으며, 방사대 위에는 미세융모의 난막구조가 더욱 뚜렷해졌다. 난황구기 및 성숙란의 단계에서는 난황구 일부가 융합되면서 강한 호산성을 보였다. 또한 성숙란의 표면에는 깔때기 모양의 난문이 관찰되었으며, $2{\sim}3{\mu}m$ 길이의 미세융모가 일정하게 분포하였다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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