Objective: To verify the effect of two forms (growth factor and growthfactor-reduced) of solubilized Matrigel on the development in mouse preimplantation embryos. Methods: Late 2-cell stage eggs were cultured through the blastocyst stage in the presence of GF- or GFR-Matrigel (0.5%, v/v). Morphological development, cell number and % apoptotic nuclei of blastocyst were measured by Roecst staining and TUNEL of nuclei. Results: Morphological development, number of cells per embryo was significantly increased in the presence of GF- or GFR-Matrigel. Culture of the embryos in the GF-Matrigel gave the best result. Conclusion: Low concentration of solubilized Matrigel improved development of mouse embryos regardless of growth factor content of the Matrigel. Growth factors and extracellular matrix protein included in the Matrigel synergistically potentiated the development of mouse embryos.
세포외기질(exrtracellular matrix, ECM)에 의한 생쥐 초기 배아의 발생 조절 현상의 기작 규명을 위한 연구의 일환으로 Engelbreth-Holm-Swarm(EHS) mouse sarcoma의 세포외기질로부터 추출한 ECM 복합체인 Matrigel의 성장인자 제거형(GFR-Matrigel)을 생쥐 포배에 처리한 후 mitogen activated protein kinase (MAPK, ERK1/2) 활성 의 변화를 조사하였다. Matrigel 처리 후 10분 이내에 배아의 MAPK 활성이 유의하게 증가하였고, 60분 후에도 유의하게 높은 활성을 유지하였다. 한편 MAPK cascade의 저해제인 PD098059를 전처리한 경우 Matrigel에 의한 MAPK 활성의 증가가 관찰되지 않았다. Matrigel 배양액 내에서 12시간 동안 배양한 포배의 MAPK 활성은 대조군과는 현격한 차이를 보였다. 이러한 결과로부터 ECM에 의한 생쥐초기 배아의 발생 촉진효과 발현기작에는 하위 신호전달 과정의 MAPK 활성화 과정이 관여하는 것으로 사료된다.
본 연구의 목적은 소 체외수정란의 체외발달에 있어서 Matrigel의 첨가효과를 조사하는 것이었다. 소 체외수정란은 Ⅰ) SOF+0.8% BSA (SOF-B), Ⅱ) 0.8% Matrigel이 첨가된 SOF+0.8% BSA (SOF-M), 그리고 Ⅲ) SOF+0.8% BSA 배양 후, SOF+10% FBS(SOF-BF)에서 배양을 실시하였다. 배양액 내 Matrigel의 첨가는 배반포 발달율을 증가시키지 않는 것으로 나타났다(SOF-B, 26.6%; SOF-M, 28.2%; SOF-BF, 26.2%). 그러나, 부화 배반포의 비율은 Matrigel 첨가에 의하여 유의하게 증가하는 것으로 나타났다(SOF-B, 23.7%; SOF-M, 48.7%; SOF-BF, 18.5%) (P<0.05). 배반포의 세포수를 조사한 결과는 각 처리군 간에 차이가 없는 것으로 나타났으며(SOF-B, 172.7±35.5; SOF-M, 175.1±37.4; SOF-BF, 172.8±38.1), 또한 세포자연사가 유발된 세포수의 비율도 각 처리군 간에 차이가 없는 것으로 조사되었다(SOF-B, 3.6±3.2%; SOF-M, 4.3±2.6%; SOF-BF, 4.9±4.3%). 본 실험결과는 Matrigel이 소 체외수정란의 부화과정을 촉진시키는 것으로 나타났다. 이상의 결과들을 종합해 볼 때, 세포외 기질 복합체인 Matrigel의 첨가는 무혈청 수정란 배양체계에서 보다 생리적인 환경을 조성할 수 있는 방법이 될 수 있을 것으로 사료된다.
Objective: To verify the effect of Matrigel, a ECM complex from Engelbreth-Holm-Swarm (EHS) mouse sarcoma on the preimplantation development and apoptosis of mouse fertilized eggs. Method: Late pronucleus stage eggs were cultured through the blastocyst stage in the presence of Matrigel (0.5%, v/v). Characteristics of apoptosis and cell number assesed by Hoecst staining and TUNEL labeling at the blastocyst stage, respectively. Results: Morphological development, number of cells per embryo was significantly increased but rate and number of TUNEL positive nuclei of the embryo were decreased in the presence of Matrigel. Conclusion: This result suggested that at low concentration of Matrigel improves both viability and morphological development in the preimplantation mouse embryos.
Kim, Nam-Deuk;Hur, Young-Mi;Rhee, Sook-Hee;Park, Kun-Young
Preventive Nutrition and Food Science
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제1권2호
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pp.168-173
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1996
The effect of methanol soluble fraction(MSF) of kimchi on the proliferating and differentiating activity of normal rat mammary epithelial cells or organoids in culture were studied. Reconstituted basement membrane, Matrigel, supported the growth and development several different multicellular structures from mammary organoids. The five type colonies of multicellular structures, stellate, ductal, webbed, squamous, and lobulo-ductal colonies, were observed in Matrigel culture. In methanol extract groups, webbed colonies were more and squamous colonies were less than control group. and the lobulo-ductal colonies which is known that it formed in well differentiated mammary epoithelial cells were developed more in MSF treated group than control group. These results showed that methanol extract of kimchi affected on the proliferation and differentiation of normal rat mammary epithelial cells cultured in serum free medium condition.
본 연구에서는 hydroxyapatite/poly $\varepsilon$-caprolactone composite (HA/PCL) 지지체와 matrigel을 랫드의 두개골 결손부 모델에 함께 이식 시의 골형성 정도를 평가하였다. 두개골결손부는 Sprague Dawley rat (n = 18)에서 수술적으로 형성하였으며 실험군은 Matrigel과 함께 HA/PCL 지지체를 이식한 군(M-HA/PCL group, n = 6)과 HA/PCL 지지체단독이식군(HA/PCL group, n = 6)으로 나누었고 대조군(CD group, n = 6)에는 아무 것도 이식하지 않았다. 수술 4주 후, 골형성은 방사선촬영, micro CT 및 조직검사를 통해 평가되었다. 방사선상에서 CD군의 골형성은 관찰되지 않았으나 HA/PCL과 M-HA/PCL군에서는 관찰되었고 골과 유사한 방사선비투과성이 M-HA/PCL군에서 더 많이 관찰되었다. Micro CT 평가에서 골부피는 HA/PCL군보다 M-HA/PCL군에서 더 높았으나 두 군 사이의 유의적 차이는 관찰할 수 없었다. 그러나 골밀도에서는 HA/PCL군보다 M-HA/PCL군이 더 유의적으로 높음을 확인할 수 있었다(p < 0.05). 조직학적 검사에서는 CD군에서 새로운 골은 원래 존재하던 골로부터만 형성되었으며 두개골결손부 내의 골형성은 보이지 않았다. HA/PCL군에서 새로운 골형성은 원래 존재하던 골로부터만 유래되었으나 M-HA/PCL군은 가장 많은 골형성을 보여주었으며 새로운 골이 원래 존재하던 골과 HA/PCL지지체 주변에서도 관찰되었다. 이러한 결과로 미루어볼 때 HA/PCL 지지체와 matrigel을 함께 사용하는 것이 골의 임계결손부에서 골형성을 증대시키는 효과적인 방법이 될 수 있을 것으로 생각된다.
Background and objectives: Salivary hypofunction is one of the common side effects after radioiodine therapy, and its pathophysiology is salivary ductal stenosis resulting from ductal cell injury. This study aimed to develop the functional culture environment of human parotid gland ductal cells in in vitro three-dimensional perfusion culture system. Materials and Methods: We compared plastic dish culture method and three-dimensional culture system containing Matrigel and nanofiber. Morphogenesis of reconstituted salivary structures was assessed by histomorphometry. Functional characteristics were assessed by immunohistochemistry and reverse transcription polymerase chain reaction (aquaporin 5, CK7, CK18, connexin 43, and p21). In addition, we designed the media perfusion culture system and identified higher rate of cell proliferation and expression of connexin 43 in perfusion system comparing to dish. Results: Human parotid ductal cells were well proliferated with the ductal cell characters under environment with Matrigel. In the presence of Matrigel, aquaporin 5, CK18 and connexin 43 were more expressed than 2D dish and 3D nanofiber setting. In the media perfusion culture system, ductal cells in 3D culture media showed higher cells count and connexin 43 expression compared to 2D dish. Conclusion: This in vitro ductal cell perfusion culture system using Matrigel could be used to study for radioiodine induced sialadenitis model in vivo.
조직특이적 프로모터 및 벡터를 연구하고 검증하기 위해서는 조직 및 종의 특이성을 유지하는 세포 시스템을 개발하는 것이 바람직하다. 이러한 시스템은 형질전환동물 모델에 대한 효과적인 대안이다. 우리는 베타 카제인 (CSN2)의 세포 형태와 mRNA 수준에 기초하여 일차 배양으로부터 돼지 유선 상피 세포 주 (PMECs)를 확립하였다. 선택된 PMECs는 cytokeratin 항체에 의해 염색되었으며, 유선 상피 세포에 존재한다고 생각되어지는 유즙 단백질 유전자 (CSN2, 락토페린 및 유청 단백질)를 발현하는 것으로 나타났다. 또한, 3D 배양에서 PMECs932-7의 acini 구조를 확인하기 위해 살아있는 세포를 핵산에 결합하는 SYTO-13으로 염색하였다. 우리는 마트리겔 (matrigel)에 있는 PMECs의 acini가 말초 세포의 응집에 의해 형성되고 공간의 lumen을 특징으로 한다는 것이 관찰하였다. 우리는 PMECs의 matrigel 사용법과 세포 밀도를 포함한 세포 배양 조건의 영향을 시험함으로서 시스템을 시연했다. 이러한 결과는 PMCEs의 유선 상피 세포는 유전적 또는 구조적 특징을 갖고 있음을 시사하고 있다.
목적 : 황기가 혈관 신생 작용이 있는지에 관하여 관찰한다. 황기는 상처의 치유나 허혈성 질환에 효과를 나타내는 것으로 알려져있다. 이러한 효과가 황기의 혈관 신생작용과의 관련성을 이해하며 향후 임상에 쓰일 수 있는 황기 약침액 개발을 위한 기초 자료를 목표로 한다. 방법 : 황기의 혈관 신생 작용의 관찰을 위하여 human umbilical vein endothelial cells(HUVECs)와 Matrigel angiogenesis model을 이용하여 연구하였다. 결과 : 황기는 용량에 따라서 HUVECs의 증식을 나타내었다. 또한 혈관 내피 세포의 이동과 관형 형성을 보였다. 혈관 신생 물질인 basic fibroblast growth factor(bFGF)가 황기에 의해 증가하였다. Matrigel angiogenesis model에서 황기는 조직학적으로 혈관 형성을 촉진하였으며,헤모글로빈의 증가를 나타내었다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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