제주도 육상 양식장에서 주로 발생하는 어류 질병세균인 Edward tarda, Streptococcus parauberis, Photobacterium phosphoreum에 대한 피해를 줄이고 치료하고자 해양유래 미생물을 이용하고자 한다. 본 연구진은 제주 지역 4개 해역에서 해양유래 미생물을 8종 분리하였다. 분리 된 해양유래 미생물을 이용하여 항생제 디스크에 대한 감수성 확인을 한 결과, Oxytetracycline과 penicillin에서만 약한 내성을 보일 뿐 나머지 항생제 디스크에 대해선 감수성을 보였다. 해양 유래 미생물을 이용하여 어류질병에 대한 항균활성을 확인한 결과 E. tarda에 대해선 MD-02, MD-04, MD-06이 각각 22 mm, 18 mm, 19 mm의 억제환이 나타났다. S. parauberis에 대해선 MD-01, MD-02, MD-04, MD-06이 각각 19 mm, 22 mm, 30 mm, 29 mm의 억제환이 나타났으며, P. Phosphoreum에 대해선 모든 해양 유래 미생물에서 항균활성을 보였다. 이 중 어류질병세균에 대하여 항균활성이 가장 좋으며 항생제에 감수성을 보이는 B. subtilis MD-02를 최종 선정하였다. B. subtilis MD-02의 배지조성은 탄소원에서는 Dextrine, 질소원에서는 Peptone, 무기염에서는 $MgSO_4{\cdot}7H_2O$에서 생육이 가장 활발한 것을 확인하였다. 이에 따라 해양에서 분리된 B. subtilis MD-02는 어류질병균주에 대한 항균활성을 가지는 동시에 향후 치료제로써의 가치가 있다고 사료된다.
Since the existing mass production and consumption systems are no longer sustainable, countries are pushing for policies to make fisheries by-products as resources in an eco-friendly manner, and international standards are also being strengthened to increase the value of by-products. In Korea, economic and environmental perceptions of the by-products are rapidly changing, such as realizing carbon neutrality and enhancing circular resources by Korean Sustainable Development Goals. Raw materials derived from the by-products have been steadily imported from 2018. In particular, the number of imports of fish collagen peptides was only 16 number of times in 2017, but was rapidly increased to 483 number of times in 2020. Simultaneously, the demand for raw materials and nutrients for health functional food derived from fish by-products, which did not exist statistically until 2017, started to arise from 2018, and in 2019, consumption of high-value-added raw materials for fish by-products increased by 45% compared to the previous year. However, limitations are in legal and biotechnical industry aspects while its value as a biomaterial is recognized in the by-products-related industry. In this study, therefore, the status of by-products for upcycling biomaterials was reported and provided a scientific basis for supporting governmental strategies. In order to fulfill with the principles of a sustainable circular economy, the factors on hinder the marine bio-industrialization of the by-products were derived and suggested directions and plans for development into a high-value added the by-products as the marine bio-industry by substituting imported raw materials to support the development.
To culture germline stem cells in vitro, establishment of the cell lines that can be used as the feeder cells is a prerequisite. In this study, we tried to establish gonad-derived cell lines in Siberian sturgeon (Acipenser baerii). Five 1-year-old A. baerii were used as a donor of gonad tissues, and gonad-dissociated cells were cultured in vitro. Subsequently, determination of growth conditions, long-term culture, characterization, and cryopreservation of the cell lines were also conducted. Five gonad-derived cell lines were stably established and cultured continuously over at least the 73th passage and 402 culture days under the media containing 20 % fetal bovine serum at $28^{\circ}C$. All cell lines consisted of two main cell types based on morphology even if the ratio of the two cell types was different depending on cell lines. Despite long-term culture, all cell lines maintained diploid DNA contents and expression of several genes that are known to express in the A. baerii gonad. After freezing and thawing of the cell lines, post-thaw cell viabilities between 57.6 and 92.9 % depending on cell lines were indentified, suggesting that stable cryopreservation is possible. The results and the cell lines established in this study will contribute to the development of an in vitro system for A. baerii germline stem cell culture.
제주 연안에서 분리한 해양유래 미생물 중에서 어류질병 세균에 대한 항균활성이 있는 Bacillus subtilis MD-02를 이용하여 넙치에 적용했을 때 나타나는 비특이적 면역반응과 어류질병세균에 대한 병 저항성을 알아보고자 하였다. B. subtilis MD-02를 $1.2{\times}104CFU/100g$, $1.2{\times}10^6CFU/100g$, $1.2{\times}10^8CFU/100g$의 농도로 사료를 제작하여 넙치에게 급이 한 결과 4주차때 hematocrit이 대조구에 비해 증가하였다. AST와 ALT는 각각 $1.2{\times}10^8CFU/100g$와 $1.2{\times}10^4CFU/100g$에서 대조구에 비해 낮은 값을 보였다. Amylase의 결과 3주차 때부터 $1.2{\times}10^4CFU/100g$에서 유의적으로 증가하였으며, total protein의 경우 3주차 때부터 $1.2{\times}10^4CFU/100g$에서 대조구에 비해 유의적으로 증가하였다. 비특이적 면역반응인 라이소자임 활성과 대식세포 활성 결과 $1.2{\times}10^8CFU/100g$에서 대조구에 비해 높은 활성을 나타냈다. 또한 Streptococcus parauberis를 $1.2{\times}10^6CFU/ml$로 넙치에 접종 한 후 폐사율을 확인한 결과 대조구에선 전량 폐사가 일어난 반면 B. subtilis MD-02를 투여한그룹에서는 40-60%의 폐사율을 보여 어류질병세균에 대한 병 저항성을 가지는 것을 확인하였다. 따라서 제주연안에서 분리한 해양유래 미생물인 Bacillus subtilis MD-02를 넙치에게 급이 할 때 비특이적 면역반응과 어류질병세균에 대한 병 저항성을 가지는 것을 확인하였으며, 향후 사료 첨가제로 개발 시 좋은 효과가 있을 것으로 사료된다.
Spermatogonial stem cells (SSCs) developed into sperms through spermatogenesis have been utilized as a useful tool in the field of regenerative medicine and infertility. However, a small number of highly qualified SSCs are resided in the seminiferous tubule of testis, resulted in developing effective in-vitro culture system of SSCs for solving simultaneously quantitative and qualitative problems. Presently, SSCs can be enriched on testicular stromal cells (TSCs), but there are no systematic researches about TSC culture. Therefore, we tried to optimize culture condition of TSCs derived from mouse with different strains. For these, proliferation and viability were measured and compared by culturing ICR outbred or DBA/2 inbred mouse-derived TSCs at 35 or $37^{\circ}C$. In case of ICR strain, primary TSCs cultured at $37^{\circ}C$ showed significantly higher proliferation and viability than those at $35^{\circ}C$ and significant increase of proliferation and viability in sub-passaged TSCs was detected in the $35^{\circ}C$ culture condition. Moreover, sub-passage of primary TSCs at $35^{\circ}C$ induced no significant effects on proliferation and viability. In contrast, in case of DBA/2 strain, significantly improved proliferation were detected in the primary TSCs cultured at $35^{\circ}C$, which showed no significant difference in the viability, compared to those at $37^{\circ}C$. Furthermore, sub-passaged TSCs cultured at $37^{\circ}C$ showed no significant differences in proliferation and viability, compared to those at $35^{\circ}C$. However, with significant decrease of proliferation induced by sub-passage of primary TSCs at $35^{\circ}C$, no significant effects on proliferation and viability were resulted from sub-passage of primary TSCs at $37^{\circ}C$. From these results, culture temperature of primary TSCs derived from outbred and inbred strain of mouse could be separately optimized in primary culture and subculture.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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