Prolactin plays an important role in mammary gland development, milk section initiation and maintenance of lactation, so the bovine prolactin gene is considered as a potential quantitative trait locus affecting milk performance traits in dairy cattle. In this study, to determine the association between prolactin and milk performance traits, the genetic polymorphisms of a part of the prolactin gene were detected in a population of 649 cows of Chinese Holstein Dairy Cattle. Three SNPs in the promoter and one SNP in the intron1 of prolactin were identified, which was A/C (-767), G/T (-485), C/A (-247), and C/T (427), respectively. Statistical results indicated that one of SNP within promote, CHBP2, was significantly associated with milk yield (p<0.01), fat yield (p<0.05), protein yield (p<0.01), and protein percentage (p<0.05). The cows with genotype BB of CHBP2 had significantly higher milk yield (p<0.01), fat yield (p<0.05), and protein yield (p<0.01) than those of cows with genotype AA, while cows with genotype AA showed the highest protein percentage (p<0.05). In addition, based on the nine major haplotypes constructed from the four SNPs, the association analysis between diplotypes and milk performance trait was carried out. Results showed that the least square mean for fat yield of diplotype H2H8 was significantly higher than those of other eleven diplotypes (p<0.05). Our findings implied that CHBP2 and H2H8 of prolactin would be useful genetic markers in selection program on milk performance traits in Holstein Dairy Cattle.
14년령의 중성화한 암컷 시츄가 식욕부진, 침울, 호흡곤란으로 전북대학교 수의과대학 동물병원에 내원하였다. 2주전 유선종양 제거 수술을 받았으며 내원 당시 신체검사에서 구강 내 심한 치은염, 치태 및 치석을 관찰하였다. 청진상 좌측 심기저부에서 이완기 잡음이 들렸으며 우측 심첨부에서는 수축기성 잡음이 들렸다. 심혈관 초음파 검사 결과 삼첨판과 대동맥 판막의 변성과 함께 혈액의 역류를 관찰 할 수 있었다. 세균성 심내막염을 진단하고 그 원인체를 알기 위해 혈액배양을 실시 하였다. 혈액배양 검사 결과가 나오기 전에 항생제를 포함하여 이뇨제와 베나제프릴을 사용하였으며 환자는 잘 관리 되었다. 혈액배양 검사 결과 staphylococcus pseudintermedius가 배양 되었다. 하지만 1주일 후 환자는 급성으로 발생한 폐수종에 의해 사망하였다.
In a majority of mammals, male infants have heavier body mass and grow faster than female infants. Accordingly, male offspring nursing requires a much greater maternal energy contribution to lactation. It is possible that the maternal-fetal immunoendocrine dialog plays an important role in female preparation for lactation during pregnancy. Immune system genes are an integral part of gene regulatory networks in lactation and tumor necrosis factor alpha ($TNF{\alpha}$) is a proinflammatory cytokine that also plays an important role in normal mammary gland development. The aim of this study was to evaluate the influence of the sex of calf and/or the -824A/G polymorphism in the promoter region of $TNF{\alpha}$ gene on milk performance traits in Black Pied cattle over the course of lactation. We also studied the allele frequency differences of -824A/G variants across several cattle breeds, which were bred in different climatic conditions. The G allele frequency decreased gradually over the course of lactation events in the Black Pied dairy cattle because of a higher culling rate of cows with the G/G genotype (p<0.001). In contrast to the genotypes A/A and A/G, cows with G/G genotype showed significant variability of milk and milk fat yield subject to sex of delivered calf. Milk yield and milk fat yield were significantly higher in the case of birth of a bull calf than with a heifer calf (p<0.03). The G allele frequency varies from 48% to 58% in Grey Ukrainian and Black Pied cattle to 77% in aboriginal Yakut cattle. Our results suggest that the $TNF{\alpha}$-824A/G gene polymorphism may have an influence on the reproductive efforts of cows over the course of lactation events depending on the sex of progeny. Allocation of resources according to sex of the calf allows optimizing the energy cost of lactation. This may be a probable reason for high G allele frequency in Yakut cattle breeding in extreme environmental conditions. Similarly, the dramatic fall in milk production after birth of a heifer calf increases the probability of culling for the cows with the G/G genotype in animal husbandry.
Objective: An experiment was conducted to determine the relationship between the KAP11.1 and the regulation wool fineness. Methods: In previous work, we constructed a skin cDNA library and isolated a full-length cDNA clone termed KAP11.1. On this basis, we conducted a series of bioinformatics analysis. Tissue distribution of KAP11.1 mRNA was performed using semi-quantitative reverse transcription polymerase chain reaction (RT-PCR) analysis. The expression of KAP11.1 mRNA in primary and secondary hair follicles was performed using real-time PCR (real-time polymerase chain reaction) analysis. The expression location of KAP11.1 mRNA in primary and secondary hair follicles was performed using in situ hybridization. Results: Bioinformatics analysis showed that KAP11.1 gene encodes a putative 158 amino acid protein that exhibited a high content of cysteine, serine, threonine, and valine and has a pubertal mammary gland) structural domain. Secondary structure prediction revealed a high proportion of random coils (76.73%). Semi-quantitative RT-PCR showed that KAP11.1 gene was expressed in heart, skin, and liver, but not expressed in spleen, lung and kidney. Real time PCR results showed that the expression of KAP11.1 has a higher expression in catagen than in anagen in the primary hair follicles. However, in the secondary hair follicles, KAP11.1 has a significantly higher expression in anagen than in catagen. Moreover, KAP11.1 gene has a strong expression in inner root sheath, hair matrix, and a lower expression in hair bulb. Conclusion: We conclude that KAP11.1 gene may play an important role in regulating the fiber diameter.
A study was carried out to assess the therapeutic effect of ascorbic acid in mastitis of dairy cows. The herd with a population of 250-275 lactating cows was screened for clinical and subclinical mastitis for a period of 5 months. Based on inclusion and exclusion criteria, eighteen animals each with clinical and subclinical mastitis in one quarter only were selected as study population. Twelve cows (group A) with normal udder and health were also selected as a healthy control. Clinical mastitis cows were grouped as B (n=12) and C (n=6). Cows of group B were treated with ascorbic acid at 25 mg/kg, subcutaneously for 5 consecutive days and intramammary infusion (Ampicillin sodium 75 mg and Cloxacillin sodium 200 mg/infusion) based on antibiotic sensitivity test, till complete recovery. Group C cows received only intramammary infusion till the complete recovery. Eighteen subclinical mastitis cows were divided in group D (n=12) and E (n=6). Cows of group D were treated with ascorbic acid at 25 mg/kg subcutaneously for 5 consecutive days while group E did not receive any treatment. California mastitis test (CMT), somatic cell count (SCC), physical changes of udder and milk were used to diagnose and classify the mastitis. Evaluation of the therapy was based on CMT score and physical changes of udder and milk. Sample size calculation was also performed but was not followed for control groups due to scarcity of cases. Adequate blinding was done when and where required to avoid the biases. Confounding variables like herd, age of the cow, stage of the lactation, season and geographical region were duly considered and adequate blocking was followed. Ascorbic acid was administered in clinical and subclinical cases even after cure considering its immunostimulatory and healing inducing effects. The recovery rate was faster in cases of clinical mastitis treated with ascorbic acid along with an intramammary infusion (group B) than the quarters of group C cows. Quarter wise the average duration/number (3.16${\pm}$0.11 days) of antimicrobial intramammary infusion was significantly (p<0.01) less in group B than that of average duration/number (5.33${\pm}$0.20 days) of group C. Subclinical mastitis cows treated with ascorbic acid showed 83.33% recovery while 16.77% did not respond to treatment till last day of study. Cows of group E (untreated) did not recovered from the mastitis. Subjective parameters viz. swelling, pain reflex of udder and physical changes in milk from quarter of ascorbic acid treated cows (group B) disappeared earlier than that of group C cows. It is concluded from this study that the ascorbic acid might be useful as an adjunct in case of clinical mastitis to get quick recovery with less number of intramammary infusions. High recovery rate in subclinical mastitis quarters of group D cows is appreciable and opens a new avenue to conduct further trials in a larger population in various field conditions. However, the pharmacology of ascorbic acid with particular reference to health of mammary gland needs to be investigated.
The knock-in efficiency in the fibroblast is very important to produce transgenic domestic animal using nuclear transfer. In this research, we constructed three kinds of different knock-in vectors to study the efficiency of knock-in depending on structure of knock-in vector with different size of homologous arm on the ${\beta}-casein$ gene locus in the somatic cells; DT-A_cEndo Knock-in vector, DT-A_tEndo Knock-in vector I, and DT-A_tEndo Knock-in vector II. The knock-in vector consists of 4.8 kb or 1.06 kb of 5' arm region and 1.8 kb or 0.64 kb of 3' arm region, and neomycin resistance gene(neor) as a positive selection marker gene. The cEndo Knock-in vector had 4.8 kb and 1.8 kb homologous arm. The tEndo Knock-in vector I had 1.06 kb and 0.64 kb homologous arm and tEndo Knock-in vector II had 1.06 kb and 1.8 kb homologous arm. To express endostatin gene as transgene, the F2A sequence was fused to the 5' terminal of endostatin gene and inserted into exon 7 of the ${\beta}-casein$ gene. The knock-in vector and TALEN were introduced into the bovine fibroblast by electroporation. The knock-in efficiencies of cEndo, tEndo I, and tEndo II vector were 4.6%, 2.2% and 4.8%, respectively. These results indicated that size of 3' arm in the knock-in vector is important for TALEN-mediated homologous recombination in the fibroblast. In conclusion, our knock-in system may help to create transgenic dairy cattle expressing human endostatin protein via the endogenous expression system of the bovine ${\beta}-casein$ gene in the mammary gland.
Most tumors are believed to overexpress several receptors, and small peptides targeting these receptors were developed for diagnosis and tumor therapy during past decade. Here we report that fibroadenoma can be visualized by bladder cancer specific peptide. A 9-mer bladder cancer specific peptide, which was discovered from the phage display method, was synthesized by peptide synthesizer, and additional tyrosine was conjugated at the N-terminal for radioiodination (Y-BP). Y-BP was radiolabeled with $^{131/124}I$ using Iodogen tube. The rat treated with N-butyl-N-(4-hydroxybutyl)nitrosamine for 8 weeks was allowed to grow until large size tumor was developed under axilla. The tumor model was microPET imaged sequentially using [$^{18}F$]FDG and radioiodinated $^{124}I-Y-BP$. The tumor was excised and examined by immunostaining studies. Radioiodinated $^{124}I-Y-BP$ was purified using fast protein liquid chromatography (FPLC) in > 90% radiochemical purity. The whole tumor was well visualized by [$^{18}F$]FDG with several intense focal uptake within tumor. The tumor was also clearly seen with $^{124}I-Y-BP$ at 4 h post-injection, and to our surprise the tumor uptake of $^{124}I-Y-BP$ lasted up to three days. The tumor was diagnosed histologically as a fibroadenoma derived from mammary gland. In conclusion, the bladder cancer specific peptide showed the good potential as a new radiotracer for the detection of breast fibroadenoma.
유방염은 젖소에 있어서 유량의 감소, 유질 저하로 인한 우유 폐기문제, 젖소의 도태, 치료비 및 노동력의 부담등을 초래하는 가장 경제적 손실이 큰 질환이다. 현재까지 비유기 최종 착유 후에 항생제를 주입하는 건유기 치료법이 유방염 관리에 가장 효과적이며 폭넓게 쓰이고 있는 방법으로 알려져 있다. 하지만, 건유기 치료는 건유기 주입 항생제 제품들이 건유기 초기에만 지속적인 활성을 지니기 때문에 건유기 말기와 분만 전기에 있어서의 신규 감염은 방어할 수 없다. 따라서 본 연구는 건유기 유방염 관리를 위해 PLGA를 이용한 서방형 생분해 cephalexin microsphere를 제조하여 이의 임상적 효능을 평가하고자 하였다. PLGA는 무독성의 조직 반응을 일으키지 않는 특성으로 인해 약물 방출 조절 체계의 일환으로 인정을 받아왔다. 본 연구에서 cephalexin microsphere는 표면에 특징적인 구멍을 가지고 있는 구형 모양으로 확인이 되었으며 약물 방출 시험에서 초기 과다 방출 이후로 21일간 약물의 방출이 점차 감소한 뒤 3주와 4주 사이에 2차 방출을 보이는 맥동성 방출 양상이 관찰되었다. 현장적용 시험에서는 cephalexin microsphere를 주입한 실험군에서 대조군에 비해 분만 후 신규 감염율 및 치료율, 평균 체세포 수의 변화의 측면에서 볼 때 유의성 있는 차이가 있음을 확인하였다. 따라서 생분해 microsphere를 이용한 건유기 치료법은 건유기 동안 신규 감염을 예방하고 기감염을 감소시킴으로써 종전의 건유기 치료를 좀 더 효과적으로 증진시킬 수 있을 것으로 사료된다.
소 유방염은 주로 세균 감염에 의한 유선조직에 염증이 생기는 질병으로 유방염의 치료와 억제를 위해서는 1차적으로 세균을 사멸시키는데 있다. 본 연구에서는 소 유방염의 원인이 되는 다양한 세균들에 대한 은 이온의 항균효과와 적용 농도를 측정하였다. 유방염 원인균에 대한 은 이온의 최소 억제 농도 (minimal inhibitory concentrations, MICs)와 최소 살균 농도 (minimum bactericidal concentrations, MBCs)를 측정하였으며, 주사전자현미경 (scanning electron microscopy, SEM)을 이용하여 은 이온에 의한 세균의 형태 변화를 확인하였다. 다양한 유방염 원인균에 대한은 이온의 최소 억제 농도와 최소 살균 농도는 1.9에서 15.6 ${\mu}g$/ml로 세균에 따라 차이가 보였으며, 은이온 처리 후 주사전자현미경 촬영 결과 Staphylococcus aureus와 Escherichia coli의 세포벽이 함몰되거나 파괴되는 것을 볼 수 있었다. 이러한 결과는 유방염 원인이 되는 다양한 원인균에 대해 은이온의 살균 효과와 그 적용 농도를 보여주는 것으로, 소 유방염의 치료와 방어를 위한 임상적인 적용 가능성을 보여주는 것이다.
Apoptosis, programmed cell death, is posulated to occur in granulosa cells in ovarian follicular atresia. bcl-2 gene serves as protector from apoptosis and, thus, is associated with increased cell survival. TRPM-2 gene expression has been implicated as a trigger of apoptosis in rat prostate, uterus and mammary gland. Our objective was to determine if bcl-2 and TRPM-2 are expressed in luteinized human GC and, therefore, have regulatory functions for apoptosis in GC. Human GC were obtained via oocyte retrival from the infertile patients stimulated with exogeneous gonadotropins while undergoing IVF. GC were isolated from follicular fluid using Percoll gradient centrifugation. The GC were further purified with anti-CD45 magnetic beads to remove contaminating WBC's. RT-PCR were performed to analyze the mRNA expression of bcl-2 and TRPM-2 in the GC. The PCR primers were designed to amplify a 195 bp fragment of bcl-2 and a 174 bp fragment of TRPM-2. The PCR products were electrophoresed on 4% agarose gel. Three separate experiments indicated that both bcl-2 and TRPM-2 are concurrently expressed in human GC. We cultured granulosa cells with FSH (1 ng/ml) for 1 day to investigate the relative changes of TRPM-2 mRNA level with RNAse protection assay. When we cultured GC with serum free medium for 1 day TRPM-2 mRNA level increased with 1.3 fold, however it was decreased 0.64 fold with FSH. Therefore we conclude that bcl-2 and TRPM-2 are concurrently expressed and that the interaction of their products may be involved in GC apoptosis. And TRPM-2 may be regulated with FSH.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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