• 한국생물공학회:학술대회논문집
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• 한국생물공학회 2003년도 생물공학의 동향(XII)
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• pp.289-292
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• 2003

형질전환된 담배세포배양을 이용한 hGM-CSF 생산에 있어 고정화가 미치는 영향을 연구하였다. Alginate bead를 이용한 고정화 세포의 경우 hGM-CSF 생산이 6일째 $3.35\;{\mu}g/L$로써 현탁세포 $6.01\;{\mu}g/L$의 약 50%에 미쳤고 polyurethane foam 내 고정화 한 경우는 세포 생장은 낮았으나 hGM-CSF 생산량은 6일째 $6.67\;{\mu}g/L$로 가장 높았다. 높은 비 생산량을 보이는 polyurethane foam내 고농도로 세포를 포집시킨 후 세포 재사용이 용이한 장점을 이용하여 연속공정에 적용할 경우 더 높은 hGM-CSF의 생산이 기대된다.

• 한국응용약물학회:학술대회논문집
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• 한국응용약물학회 1994년도 춘계학술대회 and 제3회 신약개발 연구발표회
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• pp.330-330
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• 1994

항암화학요법후 가장 심각한 부작용의 하나는 중성구 감소에 의한 감염이다. 본원에서는 rhGM-CSF을 이용한 제 I상 임상연구에서 150-500$\mu$g/M$^2$/day가 biologically active dose임을 보고한 바 있다. 연자들은 연세암센터에 내원하여 진행성 악성종양으로 병리조직학적 진단을 받고 항암화학요법 시행후 골수억제가 예상되는 환자를 대상으로 GM-CSF 용량에 따른 안전성 및 독성을 검토하고 백혈구 감소증 및 감염의 예방, 치료효과를 분석하여 임상사용권장량을 결정하기위한 2상 연구덜 대상환자의 동의를 얻은후 시행하였다. 대상환자는 37명 (여 26, 남 11)이었고, 항암제는 Adriamycin, Cisplatin, VP-l6 이 주로 사용되었다. 최적임상사용권장량을 결정하기 위하여 1500$\mu\textrm{g}$/M$^2$/day을 12명, 250$\mu\textrm{g}$/M$^2$/day을 12명, 350$\mu\textrm{g}$/M$^2$/day을 13명의 환자에게 투여하였다. 첫번째 항암요법에는 rhGM-CSF을 투여하지않고 (비투여기) 두번째 항암요법에서는 항암요법후 익일부터 10일간 연속, 매일 1회 피하주사하여 (투여기), rhGM-CSF 투여기와 비투여기의 백혈구 감소중 정도의 차이를 비교하였다.

• 한국응용약물학회:학술대회논문집
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• 한국응용약물학회 1994년도 춘계학술대회 and 제3회 신약개발 연구발표회
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• pp.306-306
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• 1994

항암화학요법후 가장 심각한 부작용의 하나는 중성구 감소에 의한 감염이다. 본원에서는 rhGM-CSF을 이용한 제 I상 임상연구에서 150-500$\mu$g/M$^2$/day가 biologically active dose임을 보고한 바 있다. 연자들은 연세암센터에 내원하여 진행성 악성종양으로 병리조직학적 진단을 받고 항암화학요법시행후 골수억제가 예상되는 환자를 대상으로 GM-CSF 용량에 따른 안전성 및 독성을 검토하고 백혈구 감소증 및 감염의 예방, 치료효과를 분석하여 임상사용권장량을 결정하기위한 2상 연구를 대상환자의 동의를 얻은후 시행하였다. 대상환자는 37명 (여 26, 남 11)이었고, 항암제는 Adriamycin, Cisplatin, VP-16이 주로 사용되었다. 최적임상사용권장량을 결정하기 위하여 1500$\mu\textrm{g}$/M$^2$/day을 12명, 250$\mu\textrm{g}$/M$^2$/day을 12명, 350$\mu\textrm{g}$/M$^2$/day을 13명의 환자에게 투여하였다. 첫번째 항암 요법에는 rhGM-CSF을 투여하지않고 (비투여기) 두 번째 항암요법에서는 항암요법후 익일부터 10일간 연속, 매일 1회 피하주사하여 (투여기), rhGM-CSF 투여기와 비투여기의 백혈구 감소증 정도의 차이를 비교하였다.

• The Korean Journal of Physiology and Pharmacology
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• 제16권4호
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• pp.243-247
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• 2012

Recent studies suggest that immunization with autologous dendritic cells (DCs) results in protective immunity and rejection of established tumors in various human malignancies. The purpose of this study is to determine whether DCs are generated from peripheral blood mononuclear cells (PBMNs) by using cytokines such as F1t-3 ligand (FL), granulocyte macrophage-colony stimulating factor (GM-CSF), IL-4, and TNF-${\alpha}$, and whether cytotoxic T cells activated against the thyroid cancer tissues by the DCs. Peripheral blood was obtained from 2 patients with thyroid cancer. DCs were established from PBMNs by culturing in the presence of FL, GM-CSF, IL-4, and TNF-${\alpha}$ for 14 days. At day 14, the differentiated DCs was analyzed morphologically. The immunophenotypic features of DCs such as CDla, CD83, and CD86 were analyzed by immunofluorelescence microscopy. At day 18, DCs and T cells were incubated with thyroid cancer tissues or normal thyroid tissues for additional 4 days, respectively. DCs generated from the PBMNs showed the typical morphology of DCs. Activated cytotoxic T lymphocytes (CTLs) were observed also. DCs and the CTLs were attached to the cancer tissues on scanning electron microscope. The DCs activated the CTLs, which able to specifically attack the thyroid cancer. This study provides morphologic evidence that the coculture of T cells/cancer tissues activated the T cells and differentiated CTLs. The CTLs tightly adhered to cancer tissues and lysed cancer tissues vigorously. Therefore DCs could be used as potential vaccines in the immunotherapy.

• 대한수의학회지
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• 제43권4호
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• pp.607-613
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• 2003

Dendritic cells (DCs) play an essential role in a variety of immune reactions involving $CD4^+$ T cells and have been used to enhance tumor-specific immune responses. Immunosuppression in patients with cancer includes the downregulation of function and number of DCs. Although DCs have been studied, the apoptosis of Des induced by anticancer drugs for chemotherapy remains largely uncharacterized. This study demonstrated that GM-CSF protects DCs from 5-fluorouracil (5-FU) or mitomycin C-induced apoptosis. After 6 - 10 days culture, DCs were characterized by specific surface marker, CD11c and MHC class II. MTT assay revealed that GM-CSF significantly enhanced the viability of DCs treated with 5-FU or mitomycin C. The percentage of dead cells of DCs was determined by cell size using FACScan and GM-CSF was clearly effective. However, GM-CSF did not increase the expression of MHC class II on viable DCs gated, suggesting that GM-CSF may differentially regulate critical factors involved in the function of DCs. For the quantitative analysis of apoptosis, annexin V-FITC staining was performed. 5-FU induced the apoptosis of DCs and GM-CSF significantly protects DCs from 5-FU-induced apoptosis. Taken together, the results in this study that GM-CSF has an anti-apoptosis effect on DCs may provide patients with cancer with clinical benefits to overcome the immunosuppression induced by the decrease of number and functional insufficiency of DCs.

• 대한의생명과학회지
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• 제23권3호
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• pp.194-200
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• 2017

Bone-resorbing osteoclasts play a major role in maintaining bone homeostasis with bone-forming osteoblasts. Although it has been reported that A2B adenosine receptor (A2BAR) regulates osteoclast differentiation, its effects on apoptosis or proliferation of osteoclasts have been less-defined. Here, we demonstrate that A2BAR stimulation regulates macrophage-colony stimulating factor (M-CSF)-mediated osteoclast proliferation. Stimulation with a specific agonist of A2BAR, BAY 60-6583, significantly reduced M-CSF-mediated osteoclast proliferation in a time- and dose-dependent manner. In addition, A2BAR stimulation induced both apoptosis of the cells and cell arrest in the G1 phase with a decrease of cell number in the G2/M phase. Stimulation with BAY 60-6583 inhibited the activation of Akt by M-CSF, whereas M-CSF-induced ERK1/2 activation was not affected. These results suggest that the inhibition of M-CSF-mediated Akt activation by A2BAR stimulation increases apoptotic response of osteoclasts and induces cell cycle arrest in the G1 phase, thus contributing to the down-regulation of osteoclast proliferation.

• BMB Reports
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• 제51권5호
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• pp.230-235
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• 2018

Bone resorption by multinucleated osteoclasts is a multistep process involving adhesion to the bone matrix, migration to resorption sites, and formation of sealing zones and ruffled borders. Macrophage colony-stimulating factor (M-CSF) and osteopontin (OPN) have been shown to be involved in the bone resorption process by respective activation of integrin ${\alpha}v{\beta}3$ via "inside-out" and "outside-in" signaling. In this study, we investigated the link between signal modulators known to M-CSF- and OPN-induced osteoclast adhesion and spreading. M-CSF- and OPN-induced osteoclast adhesion was achieved via activation of stepwise signals, including integrin ${\alpha}v{\beta}3$, $PLC{\gamma}$, $PKC{\delta}$, and Rac1. Osteoclast spreading induced by M-CSF and OPN was shown to be controlled via sequential activation, consistent with the osteoclast adhesion processes. In contrast to osteoclast adhesion, osteoclast spreading induced by M-CSF and OPN was blocked via activation of $PLC{\gamma}/PKC{\alpha}/RhoA$ signaling. The combined results indicate that osteoclast adhesion and spreading are selectively regulated via $PLC{\gamma}/PKC{\alpha}-PKC{\delta}/RhoA-Rac1$ signaling.

• 한국생물공학회:학술대회논문집
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• 한국생물공학회 2002년도 생물공학의 동향 (X)
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• pp.321-324
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• 2002

본 연구에서는 hGM-CSF를 생산해 배지 내로 분바하도록 유전자 조작된 Nicotiana tabacum 세포를 수성이상계 내에서 배양하여 in situ recovery를 시도하였다. 특히 식물세포 자체의 생상에 큰 영향을 주지 않으면서도 일반 배지에서 회수한 단백질에 비해 많은 양을 생산할 수 있는 수성이상계 시스템을 선정하였다. 6% (w/w) PEG 20,000과 10% (w/w) dextran 2.000,000 을 이용하는 경우 최대 세포 농도가 18.6 g/L 로, 일반배지를 사용하는 경우 (15.7 g/L)에 비해 저해가 없음을 확인하였다. 또한 목적 단백질인 hGM-CSF의 생산에 있어서도 위의 시스템의 경우 dextran-rich phase인 아랫 상으로 분배됨으로 인해 회수가 쉬울 것으로 확인되었으며 그 생산량 또한 일반배지에서의 생산량 (1.5 ng/mL)에 비해 크게 다르지 않음을 확인할 수 있었다. 따라서 hGM-CSF의 회수를 위한 in situ recovery 시스템에 있어서 수성이상계의 이용 가능성을 확인하였다.

• Biotechnology and Bioprocess Engineering:BBE
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• 제6권1호
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• pp.72-74
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• 2001

Transgenic Nicotiana tabacum cells were cultivated for the production of murine granulocyte macrophage-colony stimulating factor (mGM-CSF) in both a stirred tank bioreactor and an airlift bioreactor with draft tube. Cell growth and mGM-CSF production in the airlift bioreactor were found to be better than those achieved in the stirred tank bioreactor. In the airlift bioreactor, 9.0g/L of cells and 2.2ng/mL of mGM-CSF were obtained (11.0g/L and 2.4ng/mL, respectively in shake flasks). Although the lag period was prolonged and mGM-CSF production was lowered by 33% in the stirred thank bioreactor as compared to the control culture, the maximum cell density was increased up to 12.0g/L due to better mixing by agitation at the higher cell density.

• 한국응용약물학회:학술대회논문집
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• 한국응용약물학회 1993년도 제2회 신약개발 연구발표회 초록집
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• pp.95-95
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• 1993

대상환자는 15예로, 14예에서 평가가능하였다. 남녀비는 8:6, 중앙연령 32세(10-70세)이었고, 대상질환은 악성골육종 7예, 악성임파종 2예, 위암2예, 폐암 2예, 그리고 자궁악성육종 1예였다. CSF 50 ug/$m^2$ 3예, 100 ug/$m^2$ 3예,150 ug/$m^2$ 3예, 250 ug/$m^2$ 3예,350 ug/$m^2$ 3예, 500 ug/$m^2$ 6예, 700 ug/$m^2$ 용량 3예에서 시행되었다. 1주기 시행한 환자는 7예, 2주기 5예, 3주기, 4주기 각각 1예씩이었다. 부작용은 50-150ug/$m^2$에서 WHO grade I의 발열, 전신쇠약, 식욕부진 등이 관찰되었으나 grade II이상의 부작용은 없었다. 250 ug/$m^2$ 이상의 용량에서도 grade II의 발열이 관찰되었을 뿐 다른 중증의 부작용은 관찰되지 않았다. 최고용량인 700 ug/$m^2$ 에서도 grade II의 발열외의 중한 부작용은 관찰되지 않았다. 각 용량에 따른 백혈구 증가율(%투여제2일/투여제1일)은 130-500% 이었다. 시행된 약동태는 CSF 투여 2-4 시간 후 최고치 (0.42-15.4 ng/ml)를 나타내고 투여 12시간까지 0.2-2 ng/ml의 농도로 지속되었다. 소변내 CSF 배설량은 총투여량의 1% 미만이었다. CSF중화항체는 전예에서 검출되지 않았다.