형광 강도 변화를 이용하여 세포막의 위상에 따른 하이드록시부티르산 혼입이 생체막에 미치는 영향을 조사하였다. 구형 인지질 이중층인 소포(vesicle)가 이중 에멀젼 기술을 통해 각 층 단위로 제조되었다. 소포 내부의 수성에는 아미노나프탈렌트리술폰산디소듐(ANTS)이 캡슐화되었으며, 소광제(quencher)로 자일렌비스피리디늄브로마이드(DPX)를 소포가 분산된 버퍼에 포함시켰다. 형광 등급은 100% 형광으로서 DPX가 포함된 완충액의 소포와 0% 형광으로서 ANTS와 DPX의 혼합물이 포함된 완충액의 소포를 고려하여 조정되었다. 소포 용액에 하이드록시부티르산 혼입은 막 구조의 변화를 유도하였으며, 이러한 변화는 하이드록시부티르산 대 지질의 비율에서 소포의 각 층의 상과 관련이 있는 것으로 관찰된다. 관찰된 결과는 머리 그룹과 꼬리 그룹 모두의 패킹 붕괴에 대한 삼투압 및 체적 효과로 인해 소포의 안정성에 의존하는 것으로 보인다.
The effect of the trehalose incorporation on the biological membranes was investigated with respect to the phase of the membranes using the fluorescence intensity change. Spherical phospholipid bilayers, vesicles, were prepared only with the variation in the phase of each layer via a double emulsion technique. In the aqueous inside of the vesicles, 8-Aminonaphthalene-1,3,6-trisulfonic acid disodium salt(ANTS) was encapsulated. As a quencher, p-Xylene-bis(N-pyridinium bromide)(DPX) was included in the buffer where the vesicles were dispersed. The fluorescence scale was calibrated with the fluorescence of ANTS vesicles in p-Xylene-bis(N-pyridinium bromide)(DPX)-included-buffer taken as 100% fluorescence and the mixture of ANTS and DPX in the buffer as 0% fluorescence. Trehalose injection into the vesicle solution led the distortion of the membrane. It was found that the distortion was related to the phase of each layer the vesicle up on the ratio of trehalose to lipid. In the identical measurements at glucose, the behavior of the distortion was completely different from that of trehalose. These results seem to depend on the stability of the vesicles, due to the osmotic and volumetric effects on the headgroup packing disruption.
Liposome은 의약과 화장품 분야에서 많은 발전을 하였다. 본 연구에서는 세포 간지질의 주요 성분인 cholesterol, palmitic acid, cholesterol ester와 lecithin을 사용하여 swelling반응에 의해 MLV liposome을 제조 하였다. 지질베이스와 마이크로플루다이저를 사용하여 MLV liposome 형성에 대한 특성들을 연구 하였다. MLV liposome은 multilamellar vesicle로서 형성되었다. MLV liposome의 gelation효과는 고온(90$\pm$5도씨)에서 polyol과 water phase에 지질을 혼합한 것에 스웰링 반응을 하였다. MLV liposome에 alpha hydroxy acid 성분들을 투입 제조하였다. MLV liposome의 최적 조건은 마이크로플루다이저에 3회 통과하였으며 vesicle의 입자크기는 150-350nm범위이고 이것을 freeze-fracture electron microscopy로 확인 하였다.
실험 계획법을 활용하여 세라마이드가 고함량으로 함유된 수화 액정형 베시클의 입자 사이즈에 영향을 미치는 인자를 분석하고 혼합물 조성의 최적화를 시도하였다. 베시클 입자 사이즈에 영향을 주는 주요 변수로 제조 온도, 에탄올 양, 초음파 시간을 각각 정하고, 다구찌 방법의 S/N비 산출과 ANOVA 분석을 통해, 이들 변수들이 입자 사이즈에 미치는 영향을 살펴보았다. 또한 혼합물 실험 계획법의 심플렉스 중심 설계에 따라, 베시클 막을 구성하는 세 지질 성분, 인지질(HPC), 콜레스테롤(Chol), 세라마이드(Cer)의 혼합 조성 실험을 수행하였다. 실험에서 얻어진 데이터로부터 회귀분석을 실시하여 모델식을 구하고, 베시클 입자 사이즈를 최소로 만들기 위한 세 지질 성분의 최적 혼합 조성은 HPC(0.6), Chol(0.1), Cer(0.3)으로 구해졌다.
protein phosphatase 2A는 bovine brain homogenate의 세포질 fraction에서 얻어졌다. 기질로서 인산화된 histione H1을 이용하여 측정한 phosphatase 의 활성은 dipalmitoyIphophatidylcholine(DPPC) 혹은 phosphatidylserine/DPPC의 혼합물로 구성된 liposome의 존재하에서 저해되었다. Protein phosphatase 2A의 lipid membrane에의 결합은 다중층 지질막의 혼합물 계에서 liposome 의 양이 증가함에 따라서 상등액 중의 phosphatase의 활성이 감소하는 것으로 확인할 수 있었다. 또한 [$^{125}I$]protein phosphatase 2A가 liposome과 동시에 용출되는 것으로도 확인되었다. 그러나 liposome에 대한 protein phosphatase의 친화력은 높지 않았다. 한편, okadaic acid와 liposome은 협동으로 phosphatase의 활성을 감소시켰다. 이것은 okadaic acid가 lipid membrane이나 membrane에 결함한 phosphatase에는 결합하지 않는다는 것을 의미한다. 그러므로 lipid membrane에 의한 protein phosphatase 2A의 활성 저해 효과는 phosphatase 2A와 lipid membrane과의 결합에 의한 것이라고 설명될 수있다.
CA(1-8)-ME(1-12) [CA-ME], composed of cecropin A(1-8) and melittin(1-12), is a synthetic antimicrobial peptide having potent antibacterial and antitumor activities with minimal hemolytic activity. In order to investigate the effects of the flexible hinge sequence, Gly-Ile-Gly, of CA-ME on antibiotic activity, CA-ME and three analogues, CA-ME1, CA-ME2, and CA-ME3, were synthesized. The Gly-Ile-Gly sequence of Ca-ME was deleted in CA-ME1 and replaced with Pro and Gly-Pro-Gly in CA-ME2 and CA-ME3, respectively. CA-ME1 and CA-ME3 showed a significant decrease in antitumor activity and phospholipid vesicle-disrupting ability. However, CA-ME2 showed similar antitumor and vesicle-disrupting activities, as compared with CA-ME. These results suggest that the flexibility or ${\beta}$-turn induced by Gly-Ile-Gly or Pro in the central part of CA-ME may be important in the electrostatic interaction of the N-terminus cationic ${\alpha}$-helical region with the cell membrane surface and the hydrophobic interaction of the C-terminus amphipathic ${\alpha}$-helical region with the hydrophobic acyl chains in the cell membrane. CA-ME3 exhibited lower antitumor and vesicle-disrupting activities than CA-ME and CA-ME2. This result suggests that the excessive ${\beta}$-turn structure caused by the Gly-Pro-Gly sequence in CA-ME3 seems to interrupt ion channel/pore formation in the lipid bilayer. We concluded that the appropriate flexibility or bilayer. We concluded that the appropriate flexibility or ${\beta}$-turn structure provided by the central hinge is responsible for the effective antibiotic activity of the antimicrobial peptides with the helix-hinge-helix structure.
The ultrastructural characteristics of germ cell differentiations during spermatogenesis and mature sperm morphology in male $Atrina$ ($Servatrina$) $pectinata$ were evaluated via transmission electron microscopic observation. The accessory cells, which contained a large quantity of glycogen particles and lipid droplets in the cytoplasm, are assumed to be involved in nutrient supply for germ cell development. Morphologically, the sperm nucleus and acrosome of this species are ovoid and conical in shape, respectively. The acrosomal vesicle, which is formed by two kinds of electron-dense or lucent materials, appears from the base to the tip: a thick and slender elliptical line, which is composed of electron-dense opaque material, appears along the outer part (region) of the acrosomal vesicle from the base to the tip, whereas the inner part (region) of the acrosomal vesicle is composed of electron-lucent material in the acrosomal vesicle. Two special characteristics, which are found in the acrosomal vesicle of A. ($S$) $pectinata$ in Pinnidae (subclass Pteriomorphia), can be employed for phylogenetic and taxonomic analyses as a taxonomic key or a significant tool. The spermatozoa were approximately $45-50{\mu}m$ in length, including a sperm nucleus (about $1.43{\mu}m$ in length), an acrosome (about $0.51{\mu}m$ in length), and a tail flagellum (about $46-47{\mu}m$). The axoneme of the sperm tail evidences a 9+2 structure.
PMAP-23 is a 23-residue antimicrobial peptide derived from porcine myloid cells. In order to investigate the effects of two Pro residues at positions 12 and 15 of PMAP-23 on antibiotic activity, two analogues in which Ala was substituted for Pro residue at position 12 or 15 were synthesized. $Pro^{12}{\rightarrow}Ala$ (PMAPl) or $Pro^{15}{\rightarrow}Ala$(PMAP2) substitution in PMAP-23 caused a significant reduction on antitumor and phospholipid vesicle-disrupting activities, but did not cause a significant effect on antibacterial activity. PMAP-23 displayed the type I ${\beta}-turn$ structure with a negative ellipticity at near 205 om in SDS micelle, whereas PMAP1 and PMAP2 had a somewhat ${\alpha}-helical$ propensity in TFE solution, as compared to PMAP-23. These results suggest that two Pro residues of positions 12 and 15 in PMAP-23 play important roles in the formation of ${\beta}-turn$ structure on lipid membrane and its ${\beta}-turn$ structure may be essential for antibiotic activity including phospholipid vesicle-disrupting property.
$^{31}P${$^1H$} nuclear Overhauser effects (NOEs) have been obtained for complexes formed between apolipoprotein B (apo B) and dipalmytoylphosphatidylcholine (DPPC) vesicles. NOE measurements have been conducted with broad-band irradiation of the entire $^1H$ spectrum in order to identify the proton source of the NOE. In a unilamellar vesicle formed spontaneously upon mixing aqueous suspensions of long-chain phospholipid with small amount of short-chain lecithin, the maximum NOE occurs at the N-methyl proton resonance position of the choline moiety. With addition of cholesterol to vesicles, the position of the NOE maximum shifts further away from the choline methyl frequency. For the ternary apo B-vesicle-cholesterol complex, the position of the maximum NOE lies halfway between those in vesicles with and without cholesterol.
In the case of occlusive dressings currently used in dressings for burn treatment, it is impossible to confirm the replacement time, so replacement is delayed, resulting in additional infection. To solve this problem, liposomes capable of bacterial sensing were prepared using 5(6)-Carboxyfluorescein, Phosphatidylcholine, 1,2-Dipalmitoyl-sn-glycero-3-phosphocholine, Cholesterol, and 10,12-Tricosadiynoic acid. In this study, evaluation of changes in drug encapsulation rate in liposomes according to changes in three types of phosphatidylcholine phospholipids during liposome production, high-performance phosphatidylcholine phospholipids selected through vesicle size analysis, low and high temperature stability evaluation, bacterial sensitization ability evaluation, animals cell responses were assessed.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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