We report a case of intraocular gnathostomiasis diagnosed by western blot assay in a patient with subretinal tracks. A 15-year-old male patient complained of blurred vision in the right eye, lasting for 2 weeks. Eight months earlier, he had traveled to Vietnam for 1 week and ate raw wild boar meat and lobster. His best-corrected visual acuity was 20/20 in both eyes and anterior chamber examination revealed no abnormalities. Fundus examination showed subretinal tracks in the right eye. Fluorescein angiography and indocyanine green angiography showed linear hyperfluorescence of the subretinal lesion observed on fundus in the right eye. Ultrasound examination revealed no abnormalities. Blood tests indicated mild eosinophilia (7.5%), and there was no abnormality found by systemic examinations. Two years later, the patient visited our department again for ophthalmologic evaluation. Visual acuity remained 20/20 in both eyes and the subretinal tracks in the right eye had not changed since the previous examination. Serologic examination was performed to provide a more accurate diagnosis, and the patient's serum reacted strongly to the $Gnathostoma$$nipponicum$ antigen by western blot assay, which led to a diagnosis of intraocular gnathostomiasis. This is the first reported case of intraocular gnathostomiasis with subretinal tracks confirmed serologically using western blot in Korea.
Measurement of hemoglobin A1c is used as an objective indicator of long-term blood glucose control in diabetic patients. We evaluated recently introduced Norudia$^{(R)}$ HbA1c (Daiichi Pure Chemical Co. Ltd, Tokyo, Japan) test reagent using enzyme method for HbA1c assay. Linearity, precision and correlation with VARIANT$^{TM}$ II Turbo HbA1c analyzer (BIO-RAD, Hercules, CA, USA) were evaluated. The reference range was determined from 201 healthy subjects. The Norudia$^{(R)}$ HbA1c test reagent was founded to be linear in a range of 5.6% to 14.0% ($r^2=0.9885$). The within-run and between-day precision were 0.954% and 1.03% for low level (HbA1c 5.24%), 0.67% and 1.28% for high level (HbA1c 9.01%), respectively. Comparison study between Norudia$^{(R)}$ HbA1c test reagent and VARIANT$^{TM}$ II Turbo showed good correlation with a slope of 1.0489. an intercept at -0.9717, and coefficient of correlation was 0.9907. The reference range of HbA1c obtained from this reagent was 4.07-5.50%. The Norudia$^{(R)}$ HbA1c test reagent showed good linearity, precision and correlation with HbA1c analyzer with HPLC method. In addition, the exclusive analyzer is not required for assay and then this kit may be useful for HbA1c assay in clinical laboratory.
Fusarium head blight (FHB; scab) caused mainly by Fusarium graminearum is a devastating disease of wheat and barley around the world. FHB causes yield reductions and contamination of grain with trichothecene mycotoxins such as deoxynivalenol (DON) which are a major health concern for humans and animals. The objective of this research was to develop an easy seed or seedling inoculation assay, and to compare these assays with whole plant resistance of twenty-nine Korean winter wheat cultivars to FHB. The clip-dipping assay consists of cutting off the coleoptiles apex, dipping the coleoptiles apex in conidial suspension, covering in plastic bag for 3 days, and measuring the lengths of lesions 7 days after inoculation. There were significant cultivar differences after inoculation with F. graminearum in seedling relative to the controls. Correlation coefficients between the lesion lengths of clip-dipping inoculation and FHB Type II resistance from adult plants were significant (r=0.45; P<0.05). Results from two other seedling inoculation methods, spraying and pin-point inoculation, were not correlated with adult FHB resistance. Single linear correlation was not significant between seed germination assays (soaking and soak-dry) and FHB resistance (Type I and Type II), respectively. These results showed that clip-dipping inoculation method using F. graminearum may offer a real possibility of simple, rapid, and reliable for the early screening of FHB resistance in wheat.
Bacterial chemotaxis is essential to the study of structure and function of bacteria. Although many studies have accumulated the knowledge about chemotaxis in the past, the motion of a single bacterium has not been studied much yet. In this study, we have developed a device microfabricated by soft lithography and consisting of microfluidic channels. The microfluidic assay generates a concentration gradient of chemoattractant linearly in the main channel by only diffusion of the chemicals. Bacteria are injected into the main channel in a single row by hydrodynamic focusing technique. We measured the velocity of bacteria in response to a given concentration gradient of chemoattractant using the microfludic assay, optical systems with CCD camera and simple PTV (Particle Tracking Velocimetry) algorithm. The advantage of this assay and experiment is to measure the velocity of a single bacterium and to quantify the degree of chemotaxis by statistically analyzing the velocity at the same time. Specifically, we measured and analyzed the motility of Escherichia coli strain RP437 in response to various concentration gradients of L-aspartate statistically and quantitatively by using this microfluidic assay. We obtained the probability density of the velocity while RP437 cells are swimming and tumbling in the presence of the linear concentration gradient of L-aspartate, and quantified the degree of chemotaxis by analyzing the probability density.
Objectives : To assess the availability of the glycophorin A (GPA) assay to detect the biological effect of ionizing radiation in workers exposed to low-doses of radiation. Methods : Information on confounding factors, such as age and cigarette smoking was obtained on 144 nuclear power plant workers and 32 hospital workers, by a self-administered questionnaire. Information on physical exposure levels was obtained from the registries of radiation exposure monitoring and control at each facility. The GPA mutant assay was performed using the BR6 method with modification by using a FACScan flow cytometer. Results : As confounders, age and cigarette smoking habits showed increasing trends with GPA variants, but these were of no statistical significance. Hospital workers showed a higher frequency of the GPA variant than nuclear power plant workers in terms of the NO variant. Significant dose-response relationships were obtained from in simple and multiple linear regression models. The slope of the regression equation for nuclear power plant workers was much smaller than that of hospital workers. These findings suggest that there may be apparent dose-rate effects. Conclusion : In population exposed to chronic low-dose radiation, the GPA assay has a potential to be used as an effective biologic marker for assessing the bone marrow cumulative exposure dose.
This study aimed to compare a microparticle enzyme immunoassay (MEIA) with a liquid chromatography-tandem mass spectrometry (LC/MS/MS) technique for the measurement of tacrolimus concentrations in adult liver transplant recipients, to investigate how the assay choice influenced the population pharmacokinetics of tacrolimus and to identify patient characteristics that affected pharmacokinetic parameters in each assay. Tacrolimus concentrations from 29 liver (n=52 paired-samples) transplant recipients measured by both MEIA and LC/MS/MS were used to evaluate the performance of these methods in the clinical setting. Tacrolimus pharmacokinetics was studied independently using MEIA and LC/MS/MS data in 70 adult patients using a population approach performed with NONMEM. Patient characteristics which influenced pharmacokinetic parameters in each assay were compared. The relation between LC/MS/MS and MEIA measurements was best described by the regression equation MEIA=1.465*LC/MS/MS-1.336 (r=0.91). Multiple linear regression analysis showed significant inverse relationships between assay difference and hematocrit (Hct) (p<0.025) in liver graft recipients. In MEIA, the population estimate of tacrolimus CL/F and apparent volume of distribution (Vd/F) were found to be 10.1 L/h and 226 L, and in LC/MS/MS, 13 L/h and 305 L respectively. Neither patient's age, weight, gender, grafted hepatic weight, albumin concentration, nor markers of liver function influenced tacrolimus CL/F The final model of CL/F was found to be 10.1+(Hct/Hct mean)$^{12.0}$ in MEIA and 13+(1+Hct/578) in LC/MS/MS indicating that CL/F was influenced by hematocrit.
Seo, Mi-Kyeong;Jeong, Yi-Na;Kim, Hoon-Joo;Kim, In-Chull;Lee, Yong-Hee
Archives of Pharmacal Research
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제19권6호
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pp.554-558
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1996
High-performance liquid chromatographic method was developed for the determination or LB 20304 (compound 1) in the plasma of rats and dogs. The analyte was deproteinized with 1 volume of methanol and 1/2 volume of 10% zinc sulfate, and the supernatant was injected onto a reversed-phase HPLC column. The mobile phase was a mixture of 24 parts of acetonitrile and 76 parts of 0.1% trifluoroacetic acid. The flow rate was 1 ml/min, and the effluent was monitored by fluorescence detector at an excitation wavelength of 337 nm and an emission wavelength of 460 nm. The retention time of compound 1 was 6.3 min. The assay of compound 1 was linear over the concentration range of 0.2-100.mu.g/ml in the plasma of rats and dogs. The lower limit of quantification was 0.2.mu.g/ml using 100.mu.l of plasma with a 97-99% accuracy and a 12-14% precision. In the 0.5, 5, and 50.mu.g/ml quality control samples, the intra- and inter-day accuracy were 88-95% and 88-97%, whereas intra- and interday precision were 0.5-6.6% and 0.2-9.3%, respectively, in the plasma of rats and dogs. The recoveries were 68-71% independent of concentration and species in the plasma. No interferences from endogenous substances were observed. Taken together, the above HPLC assay method by deproteinization and fluorescence detection was suitable for the determination of compound 1 in the preclinical pharmacokinetics.
Memantine HCl을 자외부 유도화제인 MPCN과 반응시켜 흡광광도법으로 정량하였다. 유도화반응은 pH 5, $50^{\circ}C$에서 MPCN을 1:20배 몰비로 사용하여 30분간 반응시켰으며 dichloromethane으로 추출한 후 324.5nm에서 흡광도를 측정하였다. 그 결과 memantine HCl의 최종 농도로써 $5.0{\times}10^{-6}{\sim}6.5{\times}10^{-5}M$ 사이에서 직선성을 나타냈으며 detection limit는 $0.43{\mu}g/ml$이었다. 본 분석법을 제제에 적용하였을 때 주사제는 $100.08{\pm}0.72%$였고 정제는 $99.75{\pm}0.77%$로, 부형제에 의한 영향 없이 간편하고 신속하게 재현성 있는 결과를 나타내므로 의약품의 품질관리에 효과적으로 응용될 수 있으리라 사료된다.
연구배경 : 세포에 방사선을 조사하면 세포사멸과 함께 AP-l, NF-${\kappa}B$와 같은 여러 전사인자가 활성화 되는 것으로 알려져 있다. 이중 염증과 면역반응의 중요한 전사인자인 NF-${\kappa}B$는 항아포프토시스의 기능이 있으며 NF-${\kappa}B$ 활성화를 차단함으로써 TNF-${\alpha}$나 daunorubicine 등에 의 한 항암효과를 상승시킬 수 있음이 밝혀져 있다. NF-${\kappa}B$의 항아포프토시스 기전은 NF-${\kappa}B$ 의존성 단백질인 cIAPI, 2의 전사발현 유도에 의한 것으로 cIAPl, 2는 caspase 3, 7, pro-caspase-9의 활성을 차단함으로써 아포프토시스를 억제하는 것으로 알려져 있다. 이에 저자들은 방사선 유도성 세포사멸에 비교적 내성을 보이는 A549 세포주에서 방사선에 의한 NF-${\kappa}B$ 활성화와 그에 따른 cIAP 발현유도를 조사하고 NF-${\kappa}B$ 활성화를 차단하여 방사선 유도성 세포사멸의 감작효과를 확인하기 위하여 본 연구를 시행하였다. 방 법 : 세포주는 A549 폐암세포주를 이용하였고, 방사선 조사는 Varian사의 Clinac 1800C 선형가속기를 이용하였으며 조사량은 10GY를 사용하였다. 세포독성 검사는 MTT Assay를 이용하였고, NF-${\kappa}B$ 활성화 검사는 luciferase reporter gene assay, electromobility shift assay, $I{\kappa}B-{\alpha}$ degradation에 대한 westem blot을 이용하였다. NF-${\kappa}B$활성을 차단하기 위하여 proteosome inhibitor인 MGI32와 $I{\kappa}B{\alpha}$-superrepressor plasmid를 transfection한 안정적 세포주 A549-$I{\kappa}B{\alpha}$-superrepressor를 이용하였다. cIAP의 발현은 RT-PCR을 이용하였고, cIAP2 promoter 활성은 NF-${\kappa}B$ site를 포함한 cIAP2 유전자 5' f1anking region(1.4kb)을 pGL2-Basic luciferase vector에 cloning 한 construct를 사용하여 transfection 후 luciferase assay를 시행하였다. 결 과 : A549 cell에서 10Gy 방사선 조사에 의한 세포독성은 24hr, 48hr에 각각 $10.82{\pm}.3%$, $17.7{\pm}6.4%$로 비교적 내성이 있음을 확인하였다. 방사선에 의한 NF-${\kappa}B$의 활성은 $I{\kappa}B-{\alpha}$ 분해에 대한 western blot과 EMSA로 확인하였으며 luciferase assay에서도 약 1.6 배 정도의 NF-${\kappa}B$ 활성화가 있었다. NF-${\kappa}B$활성을 차단하기 위해 사용한 MG132는 방사선 유도성 세포사멸에 영향을 주지 않았으며 A549-$I{\kappa}B{\alpha}$-superrepressor 세포주에서도 세포사멸의 감작효과는 없었다. 또한 RT-PCR 결과 방사선에 의한 cIAP1,2 mRNA 발현유도는 관찰되지 않았고 cIAP2 promoter luciferase assay에서도 cIAP2 전사활성 유도는 없었다. 결 론 : A549 폐암세포주에서 방사선에 의해 NF-${\kappa}B$의 활성화는 확인하였으나 활성화 정도가 미약하였고 NF-${\kappa}B$ 의존성 항아포프토시스 유전자인 cIAP가 방사선에 의해 발현유도 되지 않았으며, NF-${\kappa}B$ 활성을 차단함에도 세포독성에 감작효과가 없었으므로 A549 폐암세포주에서 방사선 유도성 세포사멸에 내성을 보이는 기전에는 NF-${\kappa}B$의 역할이 미미하리라고 사료된다.
본 연구의 목적은 식이내 타우린의 첨가가 성장, 등지방두께, 혈액 및 조직내 총콜레스테롤과 타우린 함량에 미치는 영향을 평가하기 위하여 실시하였다. 개시시 체중 71.11$\pm$0.14kg의 비육돈 48두를 공시하여 42일간 사양실험을 실시하였다. 실험설계는 옥수수-대두박 위주의 대조구(CON), 대조구 식이에 타우린 0.3% 첨가한 처리구(TAU0.3) 그리고 대조구 식이에 타우린 0.6%첨가한 처리구(TAU0.6)로 3개 처리로 하였다. 전체 사양실험 기간동안, 일당증체량에 있어서는 타우린 급여수준이 증가함에 따라 증가하는 것으로 나타났으며(Quadratic effect, p<0.05), 식이 효율에 있어서도 비육돈 식이내 타우린 첨가 수준이 증가함에 따라 향상되는 것으로 나타났다(Quadratic effect, p<0.02). 혈청내 총콜레스테롤 농도에 있어서는 타우린 첨가 수준이 증가함에 따라 유의적으로 감소하는 것으로 나타났으며 (Linear effect, p<0.04), 간 내 총콜레스테롤 농도에 있어서도 타우린 첨가수준이 증가함에 따라 유의적으로 감소하는 것으로 나타났다(Linear of fect, p<0.01). 혈장 및 간장내 타우린 농도에 있어서는 비육돈 식이내 타우린 첨가수준이 증가함에 따라 혈장(Linear effect, p<0.01)과 간장(Linear effect, p<0.01)에서 유의적으로 증가하는 것으로 나타났다. 또한, 등심내 타우린 농도에 있어서도 비육돈 식이내 타우린 농도가 증가함에 따라 유의적으로 증가하였다(Linear effect, p<0.01). 결론적으로, 비육돈 식이내 타우린의 첨가는 성장률을 향상시키며, 혈청 및 간내 총콜레스테롤 농도를 감소시키는 것으로 나타났다. 또한, 혈장 및 등심 내 타우린 농도를 증가시키는 것으로 평가되었다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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