• 제목/요약/키워드: lectin activity

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Partial Purification of Lectin from Mycoparasitic Species of Trichoderma

  • Singh, Tanuja;Saikia, Ratul;Arora, Dilip K.
    • The Plant Pathology Journal
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    • 제21권4호
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    • pp.301-309
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    • 2005
  • Trichoderma species/isolates exhibited varied degree of agglutination on sclerotial (Sc) and hyphal (Hy) surface of Macrophomina phaseolina. The agglutination efficiencies on Sc and Hy ranged from $11\;to\;57\%$. Isolates of T. harzianum (Th) and T. viride (Tv) showed greater agglutination on Sc ($23-57\%$) and Hy ($16-47\%$). Different enzymes (trypsin, pepsin, proteinase k, a-chymotrypsin, lyticase and glucosidase) and inhibitors (tunicamycin, cycloheximide, brefeldin A, sodium azide, dithiothreitol and SDS) reduced the agglutination potential of conidia of Th-23/98 and Tv-25/98; however, the extent of response varied greatly in different treatments. Different fractions of Th-23/98 and Tv-25/98 exhibited haemagglutinating reaction with human blood group A, B, AB and O. Haemagglutinating activity was inhibited by different sugars and glycoproteins tested. Crude haemagglutinating protein from outer cell wall protein fraction of Th-23/98 and Tv-25/98 were eluted on Sephadex G-100 column. Initially Th-23/98 and Tv-25/98 exhibited two peaks showing no agglutination activity; however, lectin activity was detected in the third peak. Similar to crude lectin, the purified lectin also exhibited haemagglutinating activity with different erythrocyte source. SDS-PAGE analysis of partially purified lectin revealed single band with an estimated molecular mass of 55 and 52 kDa in Th-23/98 and Tv-25/98, respectively. Trypsin, chymotrypsin and b-1,3-glucanase totally inhibited lectin activity. Similarly, various pH also affected the haemagglutinating activity of Th-23/98 and Tv-25/98. From the present observations, it can be concluded that the recognition/attachment of mycoparasite (T. harzianum and T. viride) to the host surface (M. phaseolina) may be most likely due to lectin-carbohydrate interaction.

방울토마토 열매 locular fluid lectin의 항균성과 생화학적 특성 (Antifungal Activity and Biochemical Characterization of Lectin Isolated from Locular Fluid of Cherry Tomato Fruit)

  • 노광수
    • KSBB Journal
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    • 제25권3호
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    • pp.289-296
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    • 2010
  • e-Lectin은 당 결합 단백질과 세포 응집 단백질로서, 식물방어의 역할도 하는데 방울토마토 열매의 locular fluid에는 곰팡이로부터 식물의 보호 기능을 하는 것으로 생각되는 chitin 결합 lectin이 들어 있다. 이에 본 연구에서는 방울토마토의 locular fluid로부터 최종적으로 Sephadex G-200을 통과시켜 lectin을 분리한 다음, 이의 항균성과 분자량, 적혈구 응집력, 혈액특이성, 최적 온도, 열 안정성 및 최적 pH 등의 생화학적 특성을 연구하였다. 식물성 병원균인 4개의 균주 중 Cladosporium cucumerinum과 Monosporascus cannonballus에 대해서는 항균 활성을 나타내었으나, Fusarium oxysporum과 Rhizoctonia solani에 대해서는 항균 활성을 나타내지 않았다. SDS-PAGE의 결과, 2개의 band로 나타났으며, 이의 분자량을 표준 단백질을 이용 측정하여 87 kDa와 47 kDa로 계산되었다. 사람의 A, B, O, AB형의 혈액을 사용하여 각각의 혈구응집반응을 확인한 결과, A, B, O, AB형 모두에서 응집반응이 일어났으며, 이 중 B형 혈액에서 가장 높은 활성을 나타내었다. 분리된 방울토마토 locular fluid lectin의 최적 반응 온도는 $30^{\circ}C$이며, 가장 높은 $30^{\circ}C$를 포함하는 $20-80^{\circ}C$ 범위에서 열 안정성을 보였고, 최적 pH는 7.0이다.

대두(大豆)-근류균(根瘤菌) 공생(共生)에서 뿌리분비물(分泌物)과 화학주성(化學走性)이 숙주인식(宿主認識)에 미치는 영향(影響) (The Effect of Root Exudate and Chemotaxis on Host Recognition in Soybean-Bradyrhizobium Symbiosis)

  • 강상재;박우철
    • Current Research on Agriculture and Life Sciences
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    • 제11권
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    • pp.121-132
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    • 1993
  • 대두(大豆)-근류균(根瘤菌)의 공생(共生)에서 숙주식물(宿主植物)의 Root Exudate에 대한 근류균(根瘤菌)의 화학주성(化學走性)이 근류형성(根瘤形性)(숙주식물(宿主植物))에 미치는 영향(影響)을 밝히기 위해 연구(硏究)한 결과(結果)는 다음과 같다. 대두(大豆) Seed Lectin은 품종간(品種間) 차이(差異)가 없었으며 분자량(分子量) 120,000정도(程度)의 4개(個)의 동일(同一)한 subunit를 가지는 물질(物質)이며, Pea Seed Lectin은 분자량(分子量) 44,000정도(程度)이며 15,000과 7,000정도(程度)의 두 종류(種類)의 subunit를 가지는 물질(物質)이며 대두(大豆) lectin은 표준 lectin 항체와 침강선을 형성하였다. 그러나 완두의 lectin은 표준 lectin과 항원-항체반응이 없었으므로 두 lectin은 동일 항원이 되지 않아 서로 다른 물질이었다. 팔달의 Crude Root Exudate에 대(對)한 근류균(根瘤菌)의 화학주성(化學走性) 비(比)는 KCTC 2422는 각각(各各) 3.5이고 LPN-100은 1.4이며 LCR-101은 각각(各各) 1.4이었다. 뿌리분비물의 각 fraction에 대한 근류균의 화학주성은 중성분획이 가장 높고 양성분획이 그다음이며 음성분획이 가장 낮은 화학주성을 나타내어 각물질에 대한 근류균의 친화도에 차이가 있었다. 근류형성(根瘤形性)의 정도(程度)는 KCTC 2422의 경우(境遇)는 접종(接種)후 7日경부터 Nitrogenase Activity가 나타났으며 LCR-101는 15일 이후(以後)에 Nitrogenase Activity를 나타내었다. LPN-100은 Nitrogenase Activity가 전혀 나타나지 않아 근류균(根瘤菌)의 화학주성(化學走性)이 숙주인식과정(宿主認識過程)에 영향(影響)을 미쳤음을 확인(確認)할 수 있었다.

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한국산 장류콩 종자 렉틴의 생화학적 특성 (Biochemical Properties of Seed Lectin from Korean Soybean Cultivars Developed for Soy Source)

  • 왕옥산;노광수
    • KSBB Journal
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    • 제24권2호
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    • pp.170-176
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    • 2009
  • 한국산 장류콩 종자로부터 최종적으로 Sephadex G-100상에서 분리한 lectin의 분자량, 적혈구 응집력, 온도, 열 안정성, 및 pH의 생화학적 특성을 조사하였다. 분리된 lectin을 SDS-PAGE한 결과, 분자량이 32 kDa와 22 kDa인 2개의 band가 나타났으며, Native PAGE에 의해서 108 kDa의 tetramer임을 알 수 있었다. Lectin은 trypsin을 처리한 사람의 A, B, AB, O 혈액과 쥐 혈액에서 혈구응집 반응이 일어나지 않았으나 토끼에서는 응집 반응이 일어났으며, trypsin을 처리하지 않은 모든 혈액에서는 응집반응이 일어나지 않았다. 이 lectin은 최적온도가 20-$50^{\circ}C$이며, 10-$60^{\circ}C$ 에서 열 안정성을 보였다. 최적 pH는 7.2로서 6.2 이하와 8.0 이상에서는 활성이 상설되었다.

A Novel Mannose-binding Tuber Lectin from Typhonium divaricatum (L.) Decne (family Araceae) with Antiviral Activity Against HSV-II and Anti-proliferative Effect on Human Cancer Cell Lines

  • Luo, Yongting;Xu, Xiaochao;Liu, Jiwei;Li, Jian;Sun, Yisheng;Liu, Zhen;Liu, Jinzhi;Damme, Els Van;Balzarini, Jan;Bao, Jinku
    • BMB Reports
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    • 제40권3호
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    • pp.358-367
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    • 2007
  • A novel mannose-binding tuber lectin with in vitro antiproliferative activity towards human cancer cell lines and antiviral activity against HSV-II was isolated from fresh tubers of a traditional Chinese medicinal herb, Typhonium divaricatum (L.) Decne by a combined procedure involving extraction, ammonium sulfate precipitation, ion exchange chromatography on DEAE-SEPHAROSE, CM-SEPHAROSE and gel-filtration on sephacryl S-200. The apparent molecular mass of the purified Typhonium divaricatum lectin (TDL) was 48 kDa. TDL exhibits hemagglutinating activity toward rabbit erythrocytes at 0.95 $\mu$g/ml, and its activity could be strongly inhibited by mannan, ovomucoid, asialofetuin and thyroglobulin. TDL showed antiproliferative activity towards some well established human cancer cell lines, e.g. Pro-01 (56.7 $\pm$ 6.8), Bre-04 (41.5 $\pm$ 4.8), and Lu-04 (11.4 $\pm$ 0.3). The anti-HSV-II activity of TDL was elucidated by testing its HSV-II infection inhibitory activity in Vero cells with $TC_50$ and $EC_50$ of 5.176 mg/ml and 3.054 $\mu$g/ml respectively. The full-length cDNA sequence of TDL was 1145 bp and contained an 813-bp open reading frame (ORF) encoding a 271 amino acid precursor of 29-kDa. Homology analysis showed that TDL had high homology with many other mannose-binding lectins. Secondary and three-dimensional structures analyses showed that TDL is heterotetramer and similar with lectins from mannose-binding lectin superfamily, especially those from family Araceae.

해양동물 눈알고둥으로부터 새로운 렉틴 성분의 분리 및 정제 (Purification and Characterization of A New Lectin from Marine Animal Lunella coronata coreensis)

  • 소명숙;서영아;전경희;정시련
    • 약학회지
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    • 제36권3호
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    • pp.241-249
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    • 1992
  • The whole body extract of Lunella coronata coreensis agglutinated nonspecifically human and other animal erythrocytes. A new lectin was purified by the following procedures: 0.15 M NaCl extraction, salt fractionation, gel filtration, anionic and cationic ion exchange column chromatographies. Through these purification procedures, specific activity of LCC-I was increased from 276 to 9714.3 units/mg, And on polyacrylamide gel electrophoresis, LCC-I exhibited one major band. A molecular weight of LCC-I was assumed to be 20,000 by sodium dodesyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis. The purified lectin was relatively stable at various pH and heat. Among the tested sugars, lactose and lactulose inhibited lectin activity at a concentration of 6.25 mM, respectively.

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표고버섯에서 분리한 렉틴의 적혈구 응집활성 (Hemagglutinative Activity of Lectin Isolated from Shiitake, Lentinula edodes)

  • 김영신;임치환;조남석
    • 한국균학회지
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    • 제30권1호
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    • pp.31-36
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    • 2002
  • 렉틴은 T-cell 자극 분열효과 및 항종양효과 이외에도 당특이성에 의한 세포표면이나 용액내에 존재하는 당류의 확인 및 연구에 유용하게 쓰이고 있어 최근들어 특히 흥미의 대상이 되고 있다. 렉틴은 주로 식물을 대상으로 연구되어져 왔으며, 이러한 연구결과, 렉틴은 단백질성 물질이라는 공통점을 제외하고는 생화학적, 면역학적 성질이 매우 다양한 것으로 나타났다. 본 연구에서는 표고버섯을 부위별로 구분하여 그 화학적 조성분석과 단백질 분리를 실시하고, 렉틴을 정제하여 생리활성의 특성을 구명하였다. 표고버섯은 신선한 것일수록 단백질 추출이 용이하며, 균산이 균병에 비해 단백질 량이 2배 정도 많았다. 렉틴은 $40^{\circ}C$ 이하에서 그리고 산성보다는 알칼리성에 더 안정하였다. 당 특이성에 있어서는 galactose, fucose, glucosamine, lactose, N-aretyl-D-galactosamine에 특이성을 지니는 것으로 나타났으며, 분리한 렉틴은 당단백질임을 알 수 있었다.

강낭콩 유식물로부터 분리한 Lectin의 생화학적 특성 (Biochemical Characterization of Lectin Purified from Kidney Bean Seedling)

  • 노광수
    • KSBB Journal
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    • 제22권1호
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    • pp.53-57
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    • 2007
  • 강낭콩 유식물로부터 PBS에 의한 추출, $(NH_4)_2SO_4$ 침전, Sepadex G-100 column chromatography에 의해 lectin을 분리한 다음, 이들의 생화학적 특성으로서 분자량, 적혈구 응집반응, 열 안정성, 최적 온도 및 최적 pH를 연구하였다. 이 과정에 토끼 혈액의 적혈구를 이용하여 활성을 측정하였다. 이 lectin의 분자량은 46 kDa와 44 kDa로서, 각각 2개의 subunit를 갖는 tetramer이다. 정제된 이 lectin의 최적 반응 온도는 30$^{\circ}C$이며, $40\sim80^{\circ}C$에서 열 안정성을 보였다. 또한 이 lectin의 최적 pH는 pH 8.2이다.

겨우살이 Lectin의 정제 및 생화학적 특성 (Purification and Biochemical Characterization of Lectin from Viscum album)

  • 장철수;오미정;노광수
    • KSBB Journal
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    • 제14권5호
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    • pp.578-584
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    • 1999
  • 겨우살이가 가지고 있는 lectin의 약리작용의 가능성에 대한 연구의 일환으로, lectin을 분리 . 정제하였으며, 분자량, subunit수, 탄수화물의 조성, 단백질의 아미노산 조성, 적혈구 응집력, 탄수화물 특이성, pH 및 열 안정성등의 생화학적 특성을 연구하였다. Lectin의 분리는 0.15 M NaCl에 의한 추출, $(NH_4)_2SO_4$ 침전, sepharose 4B affinity chromatography 및 sephadex G-150 gel filtration에 의해 11.64배 정제에 0.14%의 수율을 획득하였으며, HPLC와 전기영동을 이용하여 순도를 검정하였다. Gel filtration에 의해 분석된 lectin의 분자량은 124,000 Da이였고, SDS-PAGE에 의해 분자량이 30,000과 32,000 Da인 2개의 band로 나타나서 각각 2개의 subunit를 갖는 tetramer로 확인되었다. 겨우살이 lectin의 탄수화물은 glucose, fructose, arabinose 및 xylose를 함유하고 있다. 또한 phenlylalanine, lysine, tyrosine, aspartic acid가 비교적 풍부하였고 methionine, alanine, arginine은 비교적 적었다. Lectin은 적혈구에 종 특이성을 나타내는데 겨우살이의 혈구응집반응에서는 사람혈액형간의 차이는 없었으며, 쥐에서 가장 높았고 소에서 가장 낮았으므로 동물 종간에 대한 특이성은 뚜렸하였다. Lectin은 당 특이성을 가지는데, D-galactose, D-mannose, D-lactose 및 D-raffinose에 대해 특이성을 나타내었다. 겨우살이 lectin은 pH4~7에서 안정하였으며, 5$0^{\circ}C$까지는 10~30분 열처리해도 활성이 유지되는 열 안정성 단백질이었다.

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한국산 겨우살이(Viscum album coloratum)로부터 추출된 lectin의 닭에 대한 독성 및 뉴캐슬병 백신의 특이면역 증강 효과 (Toxicity of lectin extracted from Korean mistletoe (Viscum album coloratum) in chicks and its immunoadjuvant activity on Newcastle disease virus vaccines)

  • 여상건
    • 대한수의학회지
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    • 제46권3호
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    • pp.215-224
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    • 2006
  • In order to search the availability of the lectin extracted from Korean mistletoe(Viscum album coloratum) as an adjuvant for the avian vaccines, attempts were made to determine toxicity of the lectin in chicks and its immunostimulating activity on the inactivated vaccines against Newcastle disease virus(NDV). For the determination of toxicity, the lectin was injected into the thigh muscle of SPF chicks(Charles River) of 1-week-old and observed hematologically and pathologically. For the determination of immunostimulating effects, lectin-adjuvanted, inactivated NDV vaccines were injected into the thigh muscle of SPF chicks in the same age group. Sera of the chicks were examined for the hemagglutination-inhibition(HI) antibodies induced, their HI titers and reaction to the NDV antigens. The data were further compared with those from aluminum hydroxide [$Al(OH)_3$]-adjuvanted vaccines and vaccines without adjuvant, and the results are as follows. There were no significant changes observed in the values of RBC, WBC, Hb, PCV, MCV, MCH, MCHC, AST, ALT, BUN, creatinine and total proteins in the chicks administered with lectin of 1.1, 2.2 and $22.2{\mu}g/kg$ body weight, which means the lectin has no effects on blood values and functions of liver and kidney. In histopathologic observation, no lesions were observed in the brain, heart, liver, lung, spleen, kidney, thymus and bursa of Fabricius of the chicks administered with lectin of 1.1, 2.2 and $22.2{\mu}g/kg$ body weight. There were inflammatory lesions, such as congestion, hemorrhage, edema, infiltration of macrophages and coagulation necrosis observed in the thigh muscle of chicks administered with lectin of $22.2{\mu}g/kg$ body weight, whereas no changes were observed in 1.1 and $22.2{\mu}g/kg$ lectin administered chicks. In chicks immunized with lectin($4.4{\mu}g/kg$ of body weight)-adjuvanted B1, LaSota and Ulster 2C vaccines, HI titers in reciprocal values for $log_2$ were 1.8-2.2 at 1 week after vaccination, which was similar with those of 1.5-2.9 by $Al(OH)_3$-adjuvanted vaccines. The HI titers by the lectin-adjuvanted vaccines reached to 3.9-5.3 at 4 weeks, whereas those by the $Al(OH)_3$-adjuvanted vaccines were more high as 7.3-9.3. Meanwhile, the immunostimulating effects of the lectin were recognized while compared to the HI titers with 2.4-3.7 in chicks immunized with vaccines without adjuvants at 4 weeks after vaccination. The chicks immunized with lectin-adjuvanted vaccines were enough to resist challenges by Kyojeongwon strain, a very virulent NDV at 4 weeks after vaccination as well as chicks immunized with $Al(OH)_3$-adjuvanted vaccines. The HI titers by the lectin-adjuvanted vaccines reached to high level as 8.7-10.3 as those with 8.2-9.6 by the $Al(OH)_3$-adjuvanted vaccines at 6 weeks after vaccination, which may be the booster effects by the challenge virus. Antibodies specific to the HN and F antigens of NDV were observed in the sera of both chicks immunized with lectin-adjuvanted vaccines and $Al(OH)_3$-adjuvanted vaccines.