A bacteriocin-producing strain, J-105, was isolated from Kimchi and identified as Lactococcus sp. The optimum conditions for the bacteriocin production from the isolated microorganism were evaluated. For maximum yield of bacteriocin from Lactotoccus sp. J-105, the cell should be harvested at the early stationary phase and temperature, pH and NaCl concentration should be $25^{\circ}C$, pH 8.0 and without the addition of NaCl, respectively. Maltose should be used as a carbon source and organic nitrogen such as polypeptone should be used as a nitrogen source for the best yield. The bacteriocin from isolate was inhibitory against Acetobacter aceti, Bacillus subtilis and several strains of lactic acid bacteria. The bacteriocin of J-105 was sensitive to pepsin, but stable for heat treatment. It was stable even at autoclaving temperature for 15 min.
As an appraisal for the application of a new starter culture, more than 200 lactic acid bacteria strains were isolated from raw milk and healthy human feces. The strains showing excellent growth and acid production ability in 10% skim milk media were selected and identified as Lactobacillus casei based on the results of their API carbohydrate fermentation patterns, as well as 16S rDNA sequence analysis. To assess the effect of L. casei strains on irritable bowel disease (IBD), the inhibitory effect of the selected strains against the nitric oxide (NO) production of lipopolysaccharide (LPS)-stimulated RAW 264.7 cells was measured. Among the tested L. casei strains, L. casei MCL was observed to have the greatest NO inhibitory activity. Additionally, L. casei MCL was found to inhibit mRNA expression of pro-inflammatory cytokines (interleukin-$1{\beta}$, IL-6, TNF-${\alpha}$), as well as cyclooxygenase-2 (COX-2) and inducible nitric oxide synthase (iNOS) involved in pathophysiologic processes such as inflammation. The mRNA expression of anti-inflammatory cytokines, including IL-10 and transforming growth factor-$1{\beta}$ (TGF-${\beta}$) of L. casei MCL, was confirmed using quantitative real-time PCR. In conclusion, L. casei MCL showed decreases in the expression of pro-inflammatory cytokines and up-regulated expression of the anti-inflammatory cytokine.
More safe and natural food was recently needed by consumers. Antimicrobials including sodium azide, penicillin, and vancomycin were used for therapeutic agents against pathogens such as Listeria monocytogenes, Staphylococcus aureus, Escherichia coli O157:H7 in dairy and meat industry. These antimicrobials and preservatives were prohibited in stock farm and food because they were caused resistant strain and side effects. Bacteriocins are proteinaceous compounds that may present antimicrobial activity towards important food-borne pathogens and spoilage-related microflora. Therefore, bacteriocins were reported as an alternative of antimicrobials. Due to these properties, bacteriocin-producing strains or purified bacteriocins have a great potential of use in biologically based food preservation systems. Despite the growing number of articles regarding on the isolation of bacteriocinogenic strains, genetic determinants for production, purification and biochemical characterization of these inhibitory substances, there are only limited reports of successful application of bacteriocins to dairy and meats. This review describes bacteriocins related to dairy and meat products for the further use.
PARK JONG-HWAN;LEE YEONHEE;MOON ENPYO;SEOK SEUNG-HYEOK;BAEK MIN-WON;LEE HUI-YOUNG;KIM DONG-JAE;KIM CHANG-HWAN;PARK JAE-HAK
Journal of Microbiology and Biotechnology
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v.15
no.3
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pp.603-608
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2005
We recently isolated a novel probiotic strain, Lactobacillus fermentum PL9005 (KCCM-10250), from infant feces and showed that it had a potential immunoenhancing effect. In the present study, a safety assessment of the bacteria was performed using a BALB/c mouse model. Mice were administered with L. fermentum PL9005 daily for 28 days. There were no detectable changes in body weight, feed intake, or clinical signs, and no significant difference in hematological parameters or blood biochemistry between the L. fermentum PL9005-fed and control groups. Bacterial translocation was detected in the mesenteric lymph nodes, liver, and spleen of some mice with and without L. fermentum PL9005 feeding, however, the organisms were not related to ingestion of L. fermentum PL9005; this was confirmed by PCR using a species-specific primer. No gross lesions were detected in the liver, spleen, or intestine of L. fermentum PL9005-fed or control mice. Mucosal thickness in the ileum, cecum, and colon of L. fermentum PL9005-fed mice was not significantly different from that of corresponding organs in control mice. No inflammation or epithelial cell degeneration in the intestines was observed in any mice. These results indicate that ingestion of L. fermentum PL9005 is safe in mice and can be applied in the functional food market.
Based on observations that lactic acid bacteria have the ability to activate macrophages, we assessed the potential effects of eight different Lactobacillus strains treated with gastrointestinal enzymes on the production of nitric oxide and various cytokines in macrophages. RAW 264.7 murine macrophage cells were cultured with either precipitates or supernatants of Lactobacillus strains digested with pepsin followed by pancreatin. The increased production of nitric oxide and interleukin $(IL)-1{\beta}$, IL-6, IL-12 and tumour necrosis factor $(TNF)-{\alpha}$ were observed when cultured with precipitates, and this effect was largely strain-dependent. In contrast, the exposure of RAW 264.7 cells to supernatants produced weaker or nearly undetectable effects in comparison to the effects of exposure to precipitates. The induction of nitric oxide appeared to be unaffected. These results demonstrate that nitric oxide and cytokines were effectively induced when the bacterial precipitate was treated with macrophages. The results of the present study also indicate that Lactobacillus strains treated with digestive enzymes are capable of stimulating the production of nitric oxide and cytokines in macrophages, which may modulate the gastrointestinal immune function of the host when it is given as a feed additive.
The mode of the combined effect of adipic acid and medium chain monoglycerides was investigated by using nine strain. Though monoglycerides alone had little antibacterial activity against gram negative strains, the combined use with adipic acid showed much higher activity against others of gram positive strains as well as gram negative strains. But exceptionally, it seemed difficult practically to prevent the growth of lactic acid bacteria completely by the combined use of adipic acid and monoglyceride. For yeast and mold, monoglycerides alone had a high activity but adipic acid had a little activity. In antibacterial mechanism, we thought that adipic acid acted on the cell envelope and then monoglyceride acted on the altered cell.
Lee, Hoyong;Ahn, Young-Tae;Park, Se-Hoon;Park, Do-Young;Jin, Young-Woo;Kim, Cha Soon;Sung, Sang Hyun;Huh, Chul-Sung;Kim, Dong-Hyun
Journal of Microbiology and Biotechnology
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v.24
no.1
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pp.127-131
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2014
While searching for lactic acid bacteria that can restore aging-impaired immune responses, we isolated the Toll-like receptor (TLR) 2/NF-${\kappa}B$-activating strain Lactobacillus plantarum HY7712 from kimchi and investigated its immunomodulating effect in whole-body ${\gamma}$-irradiated mice. Exposure to HY7712 strongly activated NF-${\kappa}B$ signaling in RAW264.7 cells, but inhibited lipopolysaccharide-stimulated NF-${\kappa}B$ activation. Moreover, HY7712 protected against the downregulation of interferon (IFN)-${\gamma}$ and upregulation of interleukin (IL)-13 caused by ${\gamma}$-irradiation in mice. In mice, ${\gamma}$-irradiation impaired NK-cell activity against YAC-1 tumor cells, but following HY7712 exposure, the activity of NK cells was restored to 91.5% of the level measured in control mice (p < 0.05). These findings suggest that HY7712 activates the TLR2/NF-${\kappa}B$ signaling pathway and protects against the impairment of NK-cell activity caused by ${\gamma}$-irradiation or aging.
To develop starters for the production of functional foods or materials, lactic acid bacteria producing ${\gamma}-aminobutyric$ acid (GABA) were screened from jeotgals, Korean fermented seafoods. One isolate producing a high amount of GABA from monosodium $\text\tiny{L}$-glutamate (MSG) was identified as Enterococcus avium by 16S rRNA gene sequencing. E. avium M5 produced $18.47{\pm}1.26mg/ml$ GABA when incubated for 48 h at $37^{\circ}C$ in MRS broth with MSG (3% (w/v)). A gadB gene encoding glutamate decarboxylase (GAD) was cloned and overexpressed in E. coli BL21 (DE3) using the pET26b (+) expression vector. Recombinant GAD was purified through a Ni-NTA column and the size was estimated to be 53 kDa by SDS-PAGE. Maximum GAD activity was observed at pH 4.5 and $55^{\circ}C$and the activity was dependent on pyridoxal 5'-phosphate. The $K_m$ and $V_{max}$ values of GAD were $3.26{\pm}0.21mM$ and $0.0120{\pm}0.0001mM/min$, respectively, when MSG was used as a substrate. Enterococcus avium M5 secretes a lot of GABA when grown on MRS with MSG, and the strain is useful for the production of fermented foods containing a high amount of GABA.
The whole gal/lae operon genes of Lactococcus lactis ssp. lactis 7962 were reported as follows: galA-galM-galK-galT-lacA -lacZ-galE. The galK gene encoding a galactokinase involved in one of the Leloir pathways for galactose metabolism was found to be 1,197 bp in length and encodes a protein of 43,822 Da calculated molecular mass. The deduced amino acid sequence showed over 50% homology with GaIK proteins from several other lactic acid bacteria. The galK gene was expressed in E. coli and the product was identified as a 43 kDa protein which corresponds to the estimated size from the DNA sequence. The galactokinase activity of recombinant 5. coli was about 8 times greater against that of the host strain and more than 3 times higher than the induced L. lactis 7962.
A lactic aci bacteria producing antibacterial substance was isolated from pig feces. This strain was identified as a genus Lactobacillus, through its morphological, cultural and physiological characteristics. Lactobacillus sp. KJ-5 isolated showed the strong inhibitory effect on the growth of Salmonella paratyphi. The production of antibacterial substance was growth associated form during the batch culture of Lactobacillus sp. KJ-5 and the maximum production was obtained at the culture temperature of $37^{\circ}C$ as well as optimum temperature of cell growth. The antibacterial activity of the filtrate of culture broth was decreased by adjusting the pH 6.2 and was not affected by catalase treatment. The antibacterial substance was partially purified by methanol and acetone extraction, whtch exhibited three spots in the thin-layer chromatography and one of them showed an antibacterial activity, This substance also showed the maximum absorption of UV at 270nm and an antibacterial activity was completely inactivated by the treatment of proteolytic enzymes.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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