• Asian-Australasian Journal of Animal Sciences
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• 제6권4호
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• pp.581-589
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• 1993

A plasmid vector, $RSVLTR/{\beta}G2$, containing lacZ gene under the control of the RSVLTR promoter were transfected into chicken embryo fibroblasts by three different transfection methods. Calcium phosphate, lipsome and DEAE-dextran techniques were applied for transfection of chicken cells. A histochemical assay with X-gal was used as a simple method for screening transfected cells. Plasmid $RSVLTR/{\beta}G2$ was expressed proficiently in the chicken embryo fibroblast. Calcium phosphate-DNA precipitate transfection resulted in the highest efficiency for transient expression of $RSVLTR/{\beta}G2$. Transfected cells formed colonies on the 9th day of incubation indicating stable transformation of the inserted plasmid.

• Journal of Microbiology and Biotechnology
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• 제19권12호
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• pp.1527-1535
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• 2009

Polyphosphate (polyP) plays diverse physiological functions in prokaryotes and eukaryotes, but most of their detailed mechanisms are still obscure. Here, we show that deletion of polyphosphate kinase (PPK), the principal enzyme responsible for synthesis of polyP, resulted in augmented expression of cAMP receptor protein (CRP) and rpoS and lowered $H_2O_2$ sensitivity in Salmonella Typhimurium ATCC14028. The binding of cAMP-CRP complex to rpoS promoter and further stimulation of its transcription were proved through electrophoretic mobility shift assay, lacZ fusion, and exogenous cAMP addition, respectively. The rpoS expression increased in cpdA (cAMP phosphodiesterase coding gene) mutant, further suggesting that cAMP-CRP upregulated rpoS expression. These results demonstrate that PPK affects oxidative stress response by modulating crp and rpoS expression in S. Typhimurium.

• Journal of Microbiology
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• 제35권2호
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• pp.149-151
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• 1997

A plasmid vector with combined features of yeast shuttle vector and mammalian expression vector was constructed to facilitate expression of cloned gene in both cell-types. All necessary elements required for plasmid maintenance and selection in E. coli, yeast and mammalian cells were size-economically arranged in this plasmid. The numan cytomegalovirus (CMV) immediate early promoter and yeast GAL1 promoter were sequentially placed in front of the gene to be expressed. The synthetic splicing donor and acceptor sequences were inserted into the immediate upstream and downstream of the GAL1 promotor, allowing the CMV promotor to direct the expression of a given gene in mammalian cell environment by splicing out the interfering GAL1 promotor sequence. When the resulting vector containing LacZ as a gene was introduced into yeast and mammalian cells, both cells efficiently produced .betha.-galactosidase, dimonstrating its dual host usage.

• BMB Reports
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• 제45권10호
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• pp.577-582
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• 2012

single-minded (sim) is a master regulatory gene that directs differentiation in the central nervous system during Drosophila embryogenesis. Recent identification of the mesectoderm enhancer (MSE) of sim has led to the hypothesis that two Snail (Sna)-binding sites in the MSE may repress sim expression in the presumptive mesoderm. We provide evidence here that three Sna-binding sites proximal to the sim promoter, but not those of the MSE, are responsible for the mesodermal repression of sim in vivo. Using transgenic embryos injected with lacZ transgenes, we showed that sim repression in the mesoderm requires the three promoter-proximal Sna-binding sites. These results suggest that Sna represses the mesectodermal expression of sim by directly repressing the nearby promoter, and not by quenching adjacent transcriptional activators in the MSE. These data also showed how the MSE, lacking the three proximal Sna-binding sites, reproduced the endogenous pattern of sim expression in transgenic embryos.

• 한국생물물리학회:학술대회논문집
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• 한국생물물리학회 2001년도 학술 발표회 진행표 및 논문초록
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• pp.64-64
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• 2001

Escherichia coli has developed soxRS regulon to defend against toxicity of superoxide radical. SoxR, superoxide sensor, is oxidized by superoxide-generating agents or nitric oxide and oxidized SoxR activates the transcription of soxS gene. In order to find out the trans-acting factors regulating SoxR activity in vivo, soxS：：lacZ single copy operon fusion construct was prepared and random Tn10 insertional mutatons were performed.(omitted)

• 한국동물학회지
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• 제38권1호
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• pp.49-54
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• 1995

본 연구자들은 근원세포를 면역시켜 얻은 hybidoma들을 검색하여. 계배 근원세포의 분화와 관련된 단백질을 인지하여 분화를 억제하는 대과가 있는 monoclonal antibody 3H35를 선별하여 그 항원을 확인한 바 있다(Kim et af.. (1992), Korean J. Zool 35 29-36) 본 연구에서는 λZAP에 cloning된 chicken muscle CDNA library들을 lacZ fusion protein으로 발현시켜 항체 3H35로 검색하여 그 유전자를 찾아내었다. 선별한 CDNA clone 중 C59의 삽입 절편은 1.6 kb이었고, 발현시킨 facE fusion protein 은 60 kDa로, f-galactosidase에 대한 항체에 반응하며 3H35와도 반응함을 immunoaffinitv adsorbant와 immunoblot으로 확인하였다 Clone C59의 삽입 절편의 염기서열을 분석한 결과, 실제 유전자는 1.6 kb 이상이며, 알려진 어느 다른 유전자와도 관련이 없는 새로운 근특이 유전자로 판단되었다. 아미노산으로 전환시켰을 때 31개의 특이한 서열이 7차례 반복된 부분이 나타났으며 이 서열의 23개가 일정하게 보존되어있고 나머지 서열의 아미노산의 polarity도 매우 유사하게 효존되어있다. 이들의 보존성이 극히 높은 것으로 보아 독특한 기능을 수행하는 domain으로 추정된다.

• 유기물자원화
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• 제11권3호
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• pp.67-74
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• 2003

본 연구의 목적은 토양미생물의 일종인 Pseudomonas putida 에서 추출한 탄소고갈 유전자로부터 starvation promoter를 분리한 후 starvation vector를 개발하여 이를 미생물로부터 유용물질의 생산 및 오염물질의 정화등에 활용하기 위한 것이다. Starvation 유전자란 영양분의 결핍시에만 특수하게 발현되는 유전자의 일종으로 본 유전자로부터 promoter를 분리한 후 특정 물질을 분해 또는 생성하는 유전자를 분리된 promoter에 유전자 재조합 방법에 의하여 연결시키면 영양분의 공급을 최소화하고 세균의 생장을 억제 시키는 동시에 promoter에 연결된 유전자의 발현 기능은 최대화 시킴으로써 그 목적을 달성할 수 있다 하겠다. 본 연구에서는 기 분리된 starvation gene으로부터 promoter를 분리한 후 이를 적절한 벡터에 연결시켜 starvation vector인 pYKS101을 완성하였다. 본 벡터의 성능을 시험하기 위하여 reporter gene으로 lacZ유전자를 벡터내에 클로닝하여 세균의 염색체에 삽입시킨후 그 성능을 조사하였다. 삽입된 유전자는 예상한 바와같이 세균이 영양분이 결핍되었을 때 충분한 영양분이 공급되었을 때보다 약 4배의 활성도를 나타냄으로써 본 벡터의 유용성을 입증할 수 있었다.

• 한국미생물·생명공학회지
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• 제35권3호
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• pp.184-190
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• 2007

대략 2 kb의 크기를 가진 Pichia pastoris phosphoglycerate kinase gene (PGK1)의 프로모터부분을 266bp의 작은 크기로 최소화하여 P. pastoris에 있어 episomal의 새로운 항시적 발현벡터를 제조하였다. P. pastoris의 새로운 항시적 발현벡터를 개발하기 위하여 기존의 Pichia발현벡터인 pGABZB의 GAP프로모터부분을 연속적으로 일정 부분이 절단된 PGK1프로모터에 beta-galactosidase유전자가 결합된 부분으로 치환하였다. LacZ유전자를 reporter유전자로 사용하였을 때에 PGK1프로모터의 발현세기는 다른 항시적 프로모터인 GAP프로모터 보다는 낮았지만 TEF1프로모터 보다는 높았다. 본 논문에서 PGK1 프로모터의 불필요한 부분을 제거함으로서 Pichia에서 외래발현을 위한 새로운 episomal발현벡터인 pPGKZ-E를 제조하였으며 이 것은 P. pastoris에 있어 발현세기를 선택할 수 있는 발현벡터선택의 폭을 넓게 하였다.

• Journal of Microbiology
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• 제40권2호
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• pp.156-160
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• 2002

The whole gal/lae operon genes of Lactococcus lactis ssp. lactis 7962 were reported as follows: galA-galM-galK-galT-lacA -lacZ-galE. The galK gene encoding a galactokinase involved in one of the Leloir pathways for galactose metabolism was found to be 1,197 bp in length and encodes a protein of 43,822 Da calculated molecular mass. The deduced amino acid sequence showed over 50% homology with GaIK proteins from several other lactic acid bacteria. The galK gene was expressed in E. coli and the product was identified as a 43 kDa protein which corresponds to the estimated size from the DNA sequence. The galactokinase activity of recombinant 5. coli was about 8 times greater against that of the host strain and more than 3 times higher than the induced L. lactis 7962.

• 미생물학회지
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• 제37권3호
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• pp.228-233
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• 2001

Salmonella enterica serovar Typhimurium의 대수 생장기 산 적응기전(acid tolerance response; ATR)은 pH 4.5 이하 조건에서 산 적응결과 형성된 것이며, 이것은 세균세포가 강한 산성환경에 노출되었을 때 생존율을 높일 수 있는 기전이다. ATR은 세균의 생장단계에 따라 대수 생장기 ATR과 생장 정지기 ATR로 구분되어질 수 있으며, 각 생장 단계는 산 적응 과정에서 합성되는 고유의 ASP (acid shock protein)가 존재한다. ATR 기전은 낮은 온도 등과 같은 환경조건에 영향을 받는다는 것이 본 실험 결과를 통하여 발견되었다. 낮은 온도 및 약산성 조건에 노출되었을 경우 강한 산성 조건에서 세균의 생존율은 증가하는 양상을 보였으며, 이때의 생존율은 $37^{\circ}C$에서 보여졌던 것보다 높게 나타났다. $25^{\circ}C$에서 산 적응을 하지 않은 경우의 세균은 $37^{\circ}C$와 비교하였을 경우 약 10,000배 정도의 생존율 증가를 보여주었다. 산 내성 반응에 주요한 기능을 담당하는 rpoS 돌연변이주의 산 내성도는 $37^{\circ}C$의 결과와 비교해블 때 저온의 조건에서 산 내성능이 높게 나타났다. 비륵 rpoS 돌연변이주가 저온에서 산 적응 여부에 관계없이 pH 3.1에서 유사한 ATR 양상을 보여주고 있지만, $25^{\circ}C$의 산성 조건에서 rpoS$\Omega$Ap 돌연변이주는 지속적 산 내성도를 나타내지 않음으로써 저온에서도 rpoS 의존성 ATR 기전이 존재하고 있다는 것을 알 수 있었다. 결과적으로 저온 조건에서는 rpoS의존적 및 -비의존적 ATR기전 모두가 존재하는 것으로 여겨진다. 저온 조건과 ATR의 기초연구를 위해서 병원성 5. enterica serovar Typhimurium UK1에서 low temperature acid tolerance (lat) 유전자를 P22-MudJ(Km, lacZ)를 이용한 lacz 오페론 융합법을 사용하여 LF452 latA::MudJ를 분리하였다. LF452 latA::MudJ 돌연변이주는 저온에서 산 적응기전을 보유하지 않았으며, 결과적으로 latA는 $25^{\circ}C$에서 산 적응 내성 기전에 관여하는 중요 유전자로 판단되며, latA의 유전자는 Salmonella Genetic Map상의 21.5 min에 위치하고 있다.