Killer yeast, Hansenular capsulata S-13 were treated with heat, ethylmethane sulfonate and N-methyl-n'-nitro-n-nitrosoguanidine and a mutant(S13-E1), showing 2-fold higher killer toxin activity than that of parent strain to killer sensitive strain, Saccharomyces cerevisiae ATCC 38026 was obtained. Hansenular capsulata S13-E1 showed strong killer toxin activity to Saccharmyces mellis and Saccharomyces sal년 and four strains of gas-producing yeasts from traditional Doenjang and Kochujang. The culture condition for killer toxin production by Hansenular capsulata S13-E1 was optimized to be 1.0% potato extract, each 0.5% of peptone and glucose, and 0.025% MgSO4 with initial pH 4.5 at 3$0^{\circ}C$ and 36 hr of batch cultivation.
재래식 메주로부터 생리 기능성의 우수한 효모를 분리하여 이들을 발효산업에 이용하고자 전국 각지의 재래식 메주에서 분리한 47주의 효모중 killer 감수성 균과 장류의 가스 생성 효모에 대하여 killer 활성이 강한 S-13 효모를 선발하여 동정한 후 killer toxin 생산 최적 조건을 검토하였다. S-13의 형태학적, 배양학적 및 생리학적 특성 등을 조사한 결과 Hansenula capsulata로 추정되었고 H. casulata S-13 을 YEPD 배지(pH 4.5)에 접종하여 $25^{\circ}C$에서 36시간 대수기 말기까지 배양하였을때 가장 많은 killer toxin이 생성되었다. 또한, H. capsulata S-13은 재래식 메주에서 분리된 Saccharomyces spp. OE-2 등 7주의 메주 효모와 S. cerevisiae 등 3주의 발효산업 관련 효모에 대하여 Killer 활성을 보였다.
본 연구에서는 발효식품의 저장기간을 연장하거나 이상발효를 방지하기 위해 미생물 유래의 천연 항균성 물질인 killer toxin 생산 균주인 K3, K5, K11, K12, K15를 전통누룩으로부터 분리하였다. 분리된 killer toxin 생산 균주 중 식중독의 원인균인 Salmonella Typhimurium 및 장염비브리오의 원인균인 Vibrio parahaemolyticus의 생육을 저해하며, killer toxin 활성이 가장 우수한 K15를 최종 선발하고 이를 Biolog사 동정시스템과 ITS영역의 염기서열 homology를 조사하여 동정한 결과, Pichia anomala에 99% 상동성을 나타내어 Pichia anomala K15로 명명하였다. P. anomala K15가 생산하는 killer toxin은 단백질 분해효소에 의해 불활성화 되므로 인체에서 단백질 분해효소에 의해 쉽게 분해가 가능한 안전한 항균물질임을 확인할 수 있었다. 또한 p. anomala K15는 에탄올 내성은 약하나 고농도의 당에서 저항성이 크므로 주조 발효초기 환경에서의 이상발효를 방지할 수 있을 것으로 사료되어진다.
포도에서 분리하여 동정한 Candida dattila K109와 K112 균주는 Kluyveromyces, Hansenula, Debaryomyces, Torulopsis, Brettanomyces속 효모에 대해 killer 활성을 가졌으며, 이들 균주의 최적 pH는 3.9-4.0이고, 최적 온도는 22-26$^{\circ}C$였다. Candida dattila K109와 K112 균주의 toxin은 단백질 분해효소인 pronase E와 pepsin에 의한 killer 활성이 없어졌으며, 2$0^{\circ}C$에서는 비교적 안정하였으나 $25^{\circ}C$ 이상에서는 killer 활성이 급격히 감소하였으며, pH 2.0-4.0 범위에서 비교적 안정하였고 그 이상의 pH에서는 급격히 활성이 저하되었다. 이들 균주의 killer toxin은 gel filtration에 의하여 단백질과 당을 확인하였다. Candida dattila K109와 K112 균주는 0.0105-0.3ppm cycloheximide 처리에 의하여 처리농도가 놓을 수록 killer 활성이 소멸되는 비율이 증가하였으며, 30-37$^{\circ}C$의 가온처리에 의하여 killer활성이 소멸되지 않는 등 기존의 killer 효모의 특성과 다소 다른 특성을 나타내었다.
Theisen, Simone;Molkenau, Elisabeth;Schmitt, Manfred J.
Journal of Microbiology and Biotechnology
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제10권4호
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pp.547-550
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2000
The yeast Williopsis californica was shown to secrete a unique broad-spectrum killer toxin (Wicaltin) with antifungal activity against 14 yeast genera, including yeast-like and mycelial forms of the human pathogens Candida albicans and Sporothrix schenkii. Agar diffusion bioassays indicated that its activity was more pronounced than the antifungal potential of frequently used antimycotics; 0.07 pmol Wicaltin showed the same toxicity as 0.2 pmol miconazole and 29 pmol clotrimazole. Since the toxin's primary target would appear to be the yeast cell wall, Wicaltin may be attractive in combatting clinically relevant yeast and fungal infections.
The yeast L-A virus (4.6 kb dsRNA genome) encodes the major coat protein and a "gag-pol" fusion minor coat protein that separately encapsidate itself and $M_{1}$, a 1.8 kb dsRNA satellite virus encoding a secreted protein toxin (the killer toxin). The teast chromosomal SKI genes prevent viral cytopathology by lowering the virus copy number. Thus, $ski^{-}$ mutants are ts and cs for growth. We transformed a ski2-2 virus-infested mutant with a yeast bank in a high copy cloning vector and selected the rare healthy transformants for analysis. One type of transformant segregated M-O L-A-O cells with high frequency. Elimination of the DNA clone from the ski2-2 strain eliminated this phinotype and introduction of the DNA clone recovered from such transformants into the parent ski2-2 strain, or into ski3 or ski6 mutants gave the same phenotype. This killer-curing phenotype was due to the curing of the helper L-A dsRNA virus. The 6.5 kb insert only had this activity when carried on a high copy vector and in $ski^{-}$ cells (not in $SKI^{+}$ cells). This 6.5 kb insert acts as a mutagen on L-A dsRNA producing a high rate of deletion mutations.mutations.
Novel Ustilagomaydis strains, designated as SH1 to 14 containing new types of ds RNA segments, are identified from corn smut in Korea. Among 14 isolates, 7 isolates appear to posses virus particles and the other isolates may contain dsRNA as a plasmid form. The pattern of dsRNA is highly diverse form a typical P-type containing one or more of H, M, and L dsRNAs to the one containing one or move M dsRNAs. It is likely that the strains containing H dsRNA posses virus particles which were confirmed by sucrose density gradient followed with different range of specificity and the activity of the strain (SH14) is stronger than A4 toxin. The sensitivity of 14 isolates is also very diverse and two strains (SH10, SH11) appear tobe universal sensitve strains against 5 tested toxin samples.
Objectives : I investigated whether snake venom can synergistically strengthen the cytotoxic effects of NK-92 cells, and enhance the inhibition of the growth of lung cancer cells including NCI-H358 through the induction of death receptor dependent extrinsic apoptosis. Methods : Snake venom toxin inhibited cell growth of NCI-H358 Cells and exerted non influence on NK-92 cell viability. Moreover, when they were co-cultured with NK cells and concomitantly treated with $4{\mu}g/m{\ell}$ of snake venom toxin, more influence was exerted on the inhibition of growth of NCI-H358 cells than BV or NK cell co-culture alone. Results : The expression of Fas, TNFR2 and DR3 and in NCI-H358 lung cancer cells was significantly increased by co-culture of NK-92 cells and treatment of $4{\mu}g/m{\ell}$ of snake venom toxin, compared to co-culture of NK-92 cells alone. Coincidentally, Bax, caspase-3 and caspase-8 - expressions of pro-apoptotic proteins in the extrinsic apoptosis pathway, demonstrated significant increase. However, in anti-apoptotic NF-${\kappa}B$ activities, activity of the signal molecule was significantly decreased by co-culture of NK-92 cells and treatment of $4{\mu}g/m{\ell}$ of snake venom toxin, compared to co-culture of NK-92 cells or snake venom toxin treated by NCIH358 alone. Meanwhile, in terms of NO generation, there is a significant increase, in co-culture of NK-92 cells with NCI-H358 cells as well as the co-culture of NK-92 cells and concomitant treatment of $4{\mu}g/m{\ell}$ of snake venom toxin. However, no synergistic increase of NO generation was shown in co-culture of NK-92 cells and treatment of $4{\mu}g/m{\ell}$ of snake venom toxin, compared to co-culture of NK-92 cells with NCI-H358 cells. Conclusion : Consequently, this data provides that snake venom toxin could be useful candidate compounds to suppress lung cancer growth along with the cytotoxic effect of NK-92 cells through extrinsic apoptosis.
Enzyme activities, production of killer toxin and some functionality of forty seven yeasts isolated from traditional Meju were investigated in culture broth and cell free extracts. Activities of $\alpha$-galactosidase, invertase and inulinase were detected in cell free extracts of 38 strains, 43 strains and 45 strains, respectively and acidic and neutral protease activities also were detected in culture broth of all the strains, $\beta$-Galactosidase activity was detected in cell free extracts of OE-20 and S-14 strains. Killer toxins were produced by OE-12, S-8 (Candida spp.), OE-19 (Zygosaccharomyces spp.) and S-3 (Saccharomyces spp.). Culture broth of OE-23 and S-9 showed 61.3% and 59.2% of antioxidant activity to $\alpha$, $\alpha$-diphenyl-$\beta$-picrylhydrazyl(DPPH), but nitrite-scavenging ability as well as inhibition of tyrosinase and polyphenol oxidase were not appeared in all the strains.
우리나라는 예전부터 전통적인 방법으로 누룩을 제조하고, 이를 발효제로 막걸리를 만들어 왔다. 막걸리는 여과 또는 살균 과정없이 다양한 미생물을 살아 있는 상태로 섭취하기 때문에 영양학적으로나 기능적인 측면에서 가치가 높다. 최근 많은 연구에서 막걸리로부터 미생물을 분리동정하고 다양한 기능성에 대해 스크리닝한 결과, 높은 프로바이오틱스 활성과 다양한 스펙트럼의 항균활성을 가진 균주들이 선별되었다. 특히 일부 유산균들은 GABA와 EPS 등의 기능성 물질을 생성하기도 했다. 또한, 일부 유산균과 효모의 경우 각각 bacteriocin 및 killer toxin을 통해 항균활성을 나타내는 것으로 여겨진다. 이러한 막걸리 유래 기능성 미생물과 그 대사산물은 기능성 식품 소재나 안전한 식품첨가물 및 다양한 산업분야에서 활용될 수 있을 것이다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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