Nowadays many people are concerned about being healthy, and many dairy products are taken as health supplementary foods. Among dairy products, kefir, also called as Tibet mushroom, is a yogurt fermented by kefir grain, which is a mixture of lactic acid bacteria and yeasts. Although there are many empirical evidences that kefir is very influential for human body, the exact reason is not definitively discovered. Therefore, it would be useful to understand characteristics of a kefir grain and to categorize bacteria in a kefir grain. In this paper, molecular biological apparatus such as PCR, electrophoresis, PCR purification, DNA sequencing were used to identify and classify the species of lactic acid bacteria and yeast in a kefir grain. We used PCR-based identification method using 16S rRNA primer and Internal Transcribed Spacer (ITS) primer. We identified 6 different species which were selected on different medium. In addition, observation with scanning electron microscope (SEM) enabled us to grasp an external shape of the kefir grain. Although we found a limited number of microbial species, more intensive research are needed for extensive identification of microorganism species in Korean kefir grain.
The microbial starter used to produce kefir beverages, kefir grain, contains a microbial exopolysaccharide called kefiran. Kefir grain consisting of water-insoluble polysaccharides, proteins, and fats, which can be applied as a multi-functional biopolymer. The mass of kefir grain can increase in the fermentation process of Kefir, but it is considered very slow. The purpose of this research is to study the impact of ammonium sulfate supplementation and yeast extract on reconstituted skim milk to increase the mass kefir grain and physical properties of kefiran. Results showed that the ammonium sulfate-supplemented substrate increased the mass of kefir grain by 547% in 14 days, with the condition that the substrate must be renewed every 2 days. Refreshing the substrate is considered one of the important factors. Supplementation on substrate did not appear to affect the viability of bacterial and yeast cells. Kefir grain produced from supplemented substrate also yields better thermal stability properties and has more functional groups than without supplementation. Two Lacticaseibacillus rhamnosus (RAL27 and RAL43) and one Limosilactobacillus fermentum (RAL29) were found to produce EPS. The three isolates also showed good skim milk fermentation ability after purification from kefir grain. The kefir grain produced in this study has the potential for wider application. This study also showed that kefir grain can be adjusted in quantity and quality through fermentation substrate engineering.
다양한 건강 증진 및 의료적인 능력을 가진 영양 식품이 많은 관심을 받아 오고 있다. 이러한 이유 때문에 kefir가 다른 발효유제품보다 소비가 증가되고 있는 실정이다. 왜냐하면 기능성 식품 및 치료적인 활력이 다른 발효유제품보다 매우 높은 kefir 및 kefir 관련 제품이기 때문이다. Kefir의 유익한 건강 특성은 단백질, 비타민, 산화 방지제, 미네랄, 특정 생물기원 물질에 기인한다. Kefir와 관련된 건강 관련 특성으로는 위장 촉진, 항균 능력, 항암 효과, hypocholesterolemic 효과, 항당뇨병 효과, 항돌연변이 활성, ${\beta}$-galactosidase 활력, scavenging 활력, 유산 함량, 지질 및 혈압 제어 효과, 세포 사멸에 대한 보호, 항알레르기 특성, 항염증 작용, 세균 정착능, 면역 시스템 활성 등이 알려져 있다. 따라서 kefir는 장내 미생물을 정상화 할 수 있으며, 유아부터 성인까지 매우 적합한 발효유제품이다. Kefir는 제품 제조 시 스타터 균주로서 사용되는 독특하고 다종의 자연적인 kefir grain 때문에 특유의 발효유제품이다. Kefir의 미생물학적 및 화학적 조성은 고유의 유산균과 효모에 의한 복합적인 probiotics 효과를 제공한다. 발효 중에 생성되는 대사 물질들은 약효 식품(neutraceutical) 활력이 입증되었다. 이러한 긍정적인 건강 속성은 kefir는 매우 가치 있는 식품에 근거해서 추가적인 실험과 임상 연구를 통해서만 가능할 것으로 사료된다.
One of the prerequisites for the successful implementation of industrial-scale goat kefir production is to understand the effects of different kefir grains and culture conditions on the microbial and chemical properties of the goat kefir. Thus, the objectives of the present study were to evaluate the characteristics of kefir grains in Taiwan on the microbial and chemical properties of goat milk kefir, as well as to understand the influence of culture conditions on production of medium chain-length triglycerides (MCT). Kefir grains were collected from households in northern Taiwan. Heat-treated goat milk was inoculated with 3-5% (V/W) kefir grains incubated at 15, 17.5, 20 or 22.5$^{\circ}C$ for 20 h, and the microflora count, ethanol content, and caproic (C6), caprylic (C8), and capric acid (C10) levels measured at 4 h intervals. Our results indicate that incubation with kefir grains results in 10$^6$-10$^7$ CFU/ml microflora count and 1.18 g/L of ethanol content at 20 h of fermentation. Incubation with 5% kefir grain at 20-22.5$^{\circ}C$ produces the highest MCT levels.
본 연구는 kefir로부터 EPS를 분리하여 MA104 세포에 대한 독성과 rotavirus에 대한 저해효과를 확인하기 위하여 수행하였다. Kefir culture 및 grain 파쇄입자에서 Lactobacillus fermentum, Lactobacillus acidophilus, Lactobacillus brevis 등의 유산균과 Candida kefyr, Cryptococcus albidus, Pichia ohmeri 등의 효모가 분리 동정되었다. EPS의 1% 농도에서, MTT assay에 의한 EPS의 rotavirus에 대한 억제효과는 human rotavirus(KU)가 $72.52{\pm}6.48%$, bovine rotavirus(NCDV)가 $36.06{\pm}7.63%$, porcine rotavirus(OSU)가 $81.66{\pm}1.11%$로 나타났으며, EPS의 1/128% 농도에서, human rotavirus(KU)가 $24.98{\pm}4.58%$, bovine rotavirus(NCDV)가 $4.71{\pm}6.16%$, porcine rotavirus(OSU)가 $4.05{\pm}14.90%$로 나타났다. Kefir에서 분리한 EPS는 다양한 혈청형과 유래 동물의 rotavirus 모두에게 억제 효과가 있는 것으로 확인되었다.
본 연구에서는kefir중의 polysaccharide분획이 HRV의 MA-104세포 감염에 미치는 억제효과를 조사하였다. (1) 추출된 polysaccharide는 DEAE 이온교환 chromatography에서 fraction I의 미결합 분획과 fraction II, III, IV의 결합 분획으로 나뉘어졌다. (2) Polysaccharide fraction II, III, IV는 각각 4.8, 5.3, 1.4 mg/mL의 농도로 첨가했을 때 HRV의 MA-104 세포감염에 대하여 약 97%, 99%, 100%의 억제효과를 나타냈다. 본 연구의 결과를 종합하면 kefir의 다당체가 유아설사변에서 분리한 rotavirus S-2가 MA-104 cell 감염에 97% 이상 억제효과가 있어 동절기 유아의 바이러스성 급성설사 예방에 kefir를 급식하는 것이 바람직하다고 사료된다.
Kefir는 약한 신맛과 백색의 끈적한 특징을 가지는 산성-알코올성 발효유제품이다. Kefir는 오랫동안 probiotic 미생물로 면역조절 효과를 포함한 건강에 도움이 되는 발효유로 알려져 왔다. 본 연구는 Kefir grain를 이용한 유청발효액의 발효특성과 pro-inflammatory cytokine의 발현과 분비에 미치는 영향을 in vitro 실험을 통하여 조사하기 위해 수행했다. Kefir grain를 이용한 유청발효액의 유산균수와 효모수는 발효 16시간에 최고 수준인 1.83×108 CFU/ml, 6.5×105 CFU/ml로 나타났다. 또한 유당과 유청단백질은 부분적으로 가수분해되었다. Human mast cell (HMC)-1을 이용하여 in vitro에서 조사한 항염증 효과는 8, 16, 24시간 동안 발효한 유청발효액에서 pro-inflammatory cytokine인 interleukin (IL)-4가 발현되었으나 48시간 유청발효액에서는 발현되지 않았다. 또한 IL-8도 8, 16, 24시간 동안 발효한 유청발효액에서 발현되었으나 48시간 유청발효액에서는 발현되지 않았다. 이러한 cytokine들의 분비는 IL-4는 8, 16, 24시간 동안 발효한 유청발효액에서는 20-25 ng 정도였으나 48시간 유청발효액에서는 5 ng 정도로 낮았다. IL-8은 8, 16, 24시간 발효한 유청발효액에서는 15-20 ng 분비되었으나 48시간 유청발효액에서는 8 ng 정도로 낮았다. 이와 같이 Kefir grains을 이용한 유청발효액은 항염증 기능이 있어 기능성 식품소재와 의약품 소재로 응용할 수 있을 것으로 판단된다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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