본 연구는 농용항생제인 kasugamycin의 생산을 위하여 S.kasugaensis의 배양조건 및 배지조성을 고찰하였다. Kasugamycin 발효시 최적 탄소원 및 질소원은 각각 soybean oil과 soybean flour였다. 배지 최적온도는 28'C, 최적 pH는 6.6이었다. 본 배양의 최적 접종 상태는 64-68시간 배양한 전배양액으로 접종하였으며, 발효중 물의 첨가는 생산성의 증가를 나타냈으나 소포제로서 silicone coil 첨가는 별 영향을 관찰할 수가 없었다.
This study was performed to develop mutant strain using a combination of UV irradiation procedures with protoplast mutagenesis in order to achieve an effective kasugamycin production from Streptomyceskasugaensis. Whenlessthan 1.0g/lof Linoleic acid was used, the cell growth was not inhibited. On the other hand, the cell growth was greatly inhibited when more than 1.6 g/l of linoleic acid was used. Among the various mutant strains, SK-12 was obtained in medium containing 1.6g/l of linoleic acid, showing the highest rate of both cell growth and kasugamycin production. In order to compare kasugamycin production with the SK-12 and the parent strain using soybean oil, cultures were performed in a flask. The production of kasugamycin was increased with the increase time. The maximum kasugamycin concentration was 1.2g/l after 6 days of culture. The product yield from soybean oil was 0.05g/l/g consumed carbon source, which was roughly 5.0 fold higher than the parent strain. These results show that it was effective method for obtaining a mutant resistant to linoleic acid for the effective production of kasugamycin from soybean oil.
Effects of the inoculum size of testing organism and pH of the plate and the concentration of agar were investigated for the selection of high kasugamycin producing mutants of Streptomyces kasugaensis ATCC 15114. For the detection of high kasugamycin-producing mutants, both concentrations of agar and test organism were optimized at the concentrations of 2% and 0.35 (A$_{550}$), respectively. The pH 7 was optimum for both growing the testing organism, Pseudomonas fluorescens IFO 12180, and for obtaining more promising mutant strains of S. kasugaensis. Under these conditions, mutants had been isolated which, tested later in liquid cultures, gave higher kasugamycin yields than that of the parent strain.
방선균인 Streptomyces kasugaensis에 의해서 생산되는 이차대사산물인 kasugamycin 생산성 증대 및 단위 생산량 당 오염물질 배출량 저감을 위한 연속 고정화 배양을 수행하였다. 세포 고정화에 적합한 포자 수확을 위한 포자형성 촉진 배지 개발은 물론 고정화 담체로 사용한 셀라이트에 수확된 포자를 고정화시키는 방법을 확립하였다. 연속 고정화 배양 시 고정화세포의 유출을 방지함으로써 안정된 연속배양을 가능토록 하기위한 decantor 형태의 고정화세포 분리기가 장착된 반응기를 사용하였다. 희석 속도 및 공급액 중의 기질 농도(당 농도, 인 농도)를 변화시키며 생합성된 kasugamycin 생산성 및 화학적산소요구량(COD)을 측정하였으며 이들을 현탁세포를 이용한 회분식 발효에서의 kasugamycin 생산성 및 발효 폐액 중의 COD 값과 비교하였다. 고정화 세포를 이용한 연속배양에서의 kasugamycin 생산성이 현탁세포를 이용한 회분식 발효에 비해 2.5배 높았으며, 동시에 단위 생산량 당 COD가 2.3배 저감되는 것으로 나타났다. 이것으로부터 연속 고정화 배양이 현탁 회분식 배양에 비해 kasugamycin 생산성 및 오염물질 배출 측면에서 유리한 청정 공정임을 확인할 수 있었다.
JO YOU-YOUNG;LIU JING;JIN YING-YU;YANG YOUNG-YELL;SUH JOO-WON
Journal of Microbiology and Biotechnology
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제15권3호
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pp.491-496
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2005
The biosynthetic gene cluster for the aminoglycoside antibiotic kasugamycin was isolated and characterized from the kasugamycin producing strain, Streptomyces kasugaensis KACC 20262. By screening a fosmid library using kasA, the gene encoding aminotransferase, we isolated a 22 kb DNA fragment. The fragment contained seventeen complete open reading frames (ORFs); one of these ORFs, kasD, was identified as the gene for dNDP-glucose 4,6-dehydratase, which catalyzes the conversion of dNDP-glucose to 4-keto-6-deoxy-dNDP-glucose. The enzyme showed a broad spectrum of substrate specificity. In addition, ksR was overexpressed in E. coli BL21 and proved to be a self-resistance gene against kasugamycin. These findings suggest that the isolated gene cluster is highly likely responsible for the biosynthesis of kasugamycin.
역상 이온쌍 고성능액체크로마토그래피(RP-IPC)에 의한 살균제 농약 kasugamycin(5-amino-2-methy-6-(2,3,4,5,6-pentahydroxy cyclohexyloxy) tetrahydropyran-3-yl-amino-${\alpha}$-iminoacetic acid)의 정량분석법을 확립하였다. Ksugamycin의 정량분석법을 확립하기 위해 RP-IPC에서 organic modifier의 농도, 용리액의 pH 및 상대이온(counter ion)의 종류와 농도에 의한 시료의 머무름 거동에 대한 영향을 조사 검토하였다. 확립된 최적 변수를 바탕으로 개발된 이 분석법은 kasugamycin의 품질관리에 활용할 수 있음을 확인하였다.
느타리버섯 세균성갈색무늬병 방제 약제를 선발하기 위하여 33종의 항생제를 공시하여 P. tolaasii에 대한 항균활성을 조사하고 선발된 4종의 항생제를 이용하여 방제효과를 검정한 결과는 다음과 같다. Kanamycin등 19개의 항생제가 병원균 P. tolaasii에 대하여 항균활성을 나타내었으며, 그 중에서 tetracycline, streptomycin, kanamycin과 kasugamycin이 강한 항균활성을 나타내었다. Tetracycline과 kanamycin은 10ppm에서도 세균생장을 완전히 억제시켰고 Kasugamycin은 100ppm, streptomycin은 200ppm 이상의 농도에서 병원세균에 항균활성을 보였다. Tetracycline, kanamycin, kasugamycin, streptomycin을 이병균상에 처리한 결과 각각 72.9, 71.2, 68.1 그리고 62.7%의 방제가를 보였다. tetracycline 처리구의 느타리버섯 생산량은 무처리구보다 31.8% 이상의 증수효과를 보였다. 항생제 처리가 느타리버섯 균사생장에 미치는 영향을 조사한 결과 kanamycin을 처리한 배지에서는 항생제 처리의 영향을 전혀 받지 않았으며 오히려 균사생장을 촉진하는 것으로 밝혀졌다. Streptomycin을 처리한 배지에서는 항생제 무처리 배지에서와 동등한 수준의 균사생장을 보였다. Tetracyclin의 경우는 무처리에 비해 약 10에서 20%의 균사 생장 억제를 보였으나 Kasugamycin 100ppm 이상의 농도에서는 약 40%의 균사생장 억제를 보였다.
Kim, Chang-Joon;Chang, Yong-Keun;Chun, Gie-Taek;Jeong, Yeon-Ho;Lee, Sang-Jong
Journal of Microbiology and Biotechnology
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제12권4호
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pp.557-562
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2002
Physiological characteristics such as specific productivity, morphology of Streptomyces cells Immobilized on celite beads, and operational stability at different dilution rates were investigated in continuous immobilized-cell cultures for the production of kasugamycin. At a dilution rate (D) of 0.05 $h^{-1}$, a relatively high specific productivity was attained and the loss of cell-loaded beads was negligible. At D=0.1 $h^{-1}$, a higher specific productivity and cell concentration could be obtained, resulting in a significantly improved volumetric kasugamycin productivity. However, no stable operation could be maintained due to a significant loss of cell-loaded beads from the reactor that was caused by their fluffy morphology developed in the later stage. At D=0.2 $h^{-1}$, the production of kasugamycin and cell growth were observed to be severely inhibited by the high concentration of residual maltose.
Chemical control of bacterial canker of kiwifruit caused by Pseudomonas syringae pv. actinidiae was attempted by spraying of streptomycin sulfate ·oxytetracycline WP streptomycin WP streptomycin ·copper hydroxide WP kasugamycin SL kasugamycin·copper oxychloride WP and copper hydroxide WP. The control efficacies of the bactericides were variable depending upon the spraying schedule,. Application of streptomycin WP and streptomycin sulfate·oxytetracycline WP from middle April to early May was found to be the most effective in controlling the bacterial canker. For copper hydroxide WP the spraying from middle January to early February showed the highest control efficacy. Kasugamycin SL was the most effective in controlling the disease by spraying from middle April to early May but it was still relatibvely effective during other spray periods. Foliar application of copper hydroxide WP and copper-antibiotic formulaions after middle April caused severe phytotoxicity. Kasgamycil SL streptomycin WP streptomycin·copper hydroxide WP and copper hydroxide WP were potential bactericides which could substitute streptomycin sulfate·oxytetracycline WP. Selective applications of the bactericides according to their optimum spray time can enhance the control efficacies against bacterial canker of kiwifruit and retard the emergency of resistant strains of P. syringae pv. actinidiae to the bactericides. The optimum spray number of streptomycin sulfate·oxytetracycline WP was 3 times with 15-day-intervals or 4 times with 10-day-intervals. The result suggested that the potential bactericides to bacterial canker of kiwifruit should be also used according to their optimum spray schedules in order to get their highest control efficacies.
고추포장의 토양에서 분리한 Bacillus sp. NAAS-1 Colletotrichum acutatum에 대한 생물학적 방제 활성을 검정 하였다 이 분리균주를 일종의 작물보호제인 카밴다짐 가스가마이신 수화제와 비교하여 검정한 결과, 기준사용량 농도(50 ${\mu}L/mL$)와 비슷한 항진균 활성을 나타냈다. 또한 생물 검정 결과, 공시 작물보호제의 기준사용량 농도(50 ${\mu}L/mL$)에서 보다 고추 탄저병균의 발병억제효과가 높게 나타나내었다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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