닭의 전염성 F낭병 바이러스(IBDV)가 원인 바이러스인 전염성 F낭병은 전 세계 양계산업에 경제적으로 피해가 큰 중요한 질병이다. 이 연구의 목적은 닭에서 IBDV에 대한 방어면역을 유도하기 위한 in ovo 초회항원자극(priming)과 불활화백신에 의한 보강접종 방법에 항원보강제(adjuvant)로 chicken interleukin 6 (pcDNA-ChIL-6;plasmid encoding chicken interleukin-6)와 levamisole (LMS)의 효과를 조사하는 것이다. IBDV의 VP2, VP, VP3 protein을 암호화하는 유전자백신인 plasmid DNA vaccine (pcDNA-VP243) 단독 또는 pcDNA-ChIL-6 또는 LMS와 함께 18일령 부화란의 양막낭(amniotic sac)에 접종하고 부화한 1주령의 병아리에 불활화 IBD 백신을 근육 접종한 다음 3주령에 고병원성 IBDV인 SH/92 주로 공격 접종하고 10일 동안 관찰하였다. 백신하지 않은 공격접종 대조군이 100%의 폐사율을 보인 반면 pcDNA-VP243 단독 접종군과 pcDNA-VP243에 pcDNA-ChIL-6 또는 LMS를 첨가한 실험군은 모두 100%의 생존율을 나타내었다. 그러나 공격접종 후 F낭의 손상을 평가하기 위한 IBDV RNA의 검출, B/B ratio와 F낭의 병변지수(lesion score) 등을 분석한 결과 pcDNA-VP243에 pcDNA-ChIL-6 또는 LMS를 첨가한 실험군은 pcDNA-VP243 단독 접종군보다 향상된 방어효과를 나타내지 않았다. 이 실험결과는 유전자백신에 의한 in ovo 초회항원자극-불활화백신에 의한 보강접종법이 고병원성 IBDV로부터 닭을 보호하기 위한 효과적인 방법이었으나 pcDNA-ChIL-6 또는 LMS의 첨가로 인한 방어효과의 향상은 나타나지 않았다.
감부로병(Gumboro Disease)으로 알려진 이병은 최근에 전염성훼브리샤스낭병 바이러스(Infectious Bursal of Fabricius Disease Virus:IBDV)에 의해서 일어난다는 것이 밝혀졌다. 이 전염병은 주로 3$\~$6주령의 닭에만이 발생하며 닭이 이에 감염되면 침울해지고 몸의 균형을 잡지 못하며 떨며 항문주위의 틀이 더렵혀지는 등의 증세를 나타낸다. 우리나라에서는 아직 정식 발생보고가 없으나, 미국, 구라파 일본등지에서는 많은 발생보고가 있다. 감염내과된 닭은 5$\~$7일만에 회복되며 회복된 닭은 후유증(後遺症)이 없다. 임상소견으로는 훼브리샤스낭(囊)이 젤라친과 같은 막과 크림이나 치즈같은 물질을 같으며 비대(肥大)해지고 야외에서 발생한 닭의 경우 근육의 출혈과 가끔 신장(腎臟)이 창백, 또는 종장등의 변화가 일어난다. 따라서 본란을 통해서 이 병에 대한 증상과 바이러스의 분리 병리조직학적인 진단방법등에 대한 정보를 제공하여 우리 나라의 발생여부를 확인하는데 참고자료에 공여코저한다.
전염성 F낭병은 닭에서 F낭의 위축 및 염증이 나타나고, 이로 인해 면역억제를 특징으로 하며, 급성, 높은 점염성을 가지는 질병이다. VP2 유전자의 염기서열 분석을 통해 유전형이 분류되고, 유전형에 따라 항원성 및 병원성에 큰 차이를 나타내고 있다. 최근 중국에서 발생한 항원 변이주의 경우, 기존의 미국형 항원 변이주와는 다른 분자 특성을 보이는 것으로 나타났다. 최근 국내에서도 이러한 중국형 항원 변이주가 발생하고 있고, 따라서 본 연구에서는 국내 양계농장에서 분리된 항원 변이주의 유전체 분석을 통한 분자적 특성을 확인하였다. 국내 육계 및 토종닭으로부터 4개의 항원 변이주를 RT-PCR을 통해 확인하였고, chorioallantoic membrane 접종을 통해 분리하였다. VP2 유전자의 hypervariable region의 분석 결과, 4개의 항원 변이주 중 1개는 미국형 항원 변이주로 확인되었고, 이는 2009년 국내에서 보고된 09D243 균주와 유사한 것으로 나타났으며, 3개의 중국형 항원 변이주는 최근 국내 및 중국의 유행주와 유사한 것으로 확인되었다. 우리의 결과에서 국내 양계농장에서 중국형 및 미국형 항원 변이주가 퍼져 있음을 확인하였고, 또한 백신을 접종한 농장에서의 발생도 이뤄지고 있어 항원 변이주에 대한 상용화 백신의 보호 효능에 대한 연구도 필요합니다.
The VP2 gene of infectious bursal disease virus (IBDV) Chinju which was previously detected in Chinju, Korea was cloned and sequenced to establish the information for the development of genetically engineered vaccines and diagnostic reagents against IBDV. The nucleotide sequence of the entire Chinju VP2 gene consisted of 1,356 bases long encoding 452 amino acids in a single open reading frame (ORF). It consisted of 368 adenine (27.1%), 363 cytosine (26.8%), 339 guanine (25.0%) and 286 thymine (21.1%) residues. The predicted $M_r$ of the Chinju VP2 protein was 48 kDa, and the protein contained 13 phosphorylation sites by protein kinase C, casein kinase II or tyrosine kinase, whereas 3 asparagine-linked glycosylation sites were recognized. The nucleotide sequence of Chinju VP2 ORF had a very close phylogenetic relationship with 98-99% homology to that of the very virulent IBDVs (vvIBDVs) HK46, OKYM, D6948, UK661, UPM97/61 and BD3/99. Also, the Chinju VP2 protein revealed a very close phylogenetic relationship with 99-100% homology to that of these vvIBDVs. The Chinju VP2 protein had 100% amino acid identity in the variable region of residues 206-360 with that of the D6948, HK46, OKYM and UK661, as well as 100% identity in two hypervariable regions of residues 212-224 and 314-324 with those of the D6948, HK46, OKYM, UK661, UPM97/61 and BD3/99. The amino acid sequence of the chinju VP2 protein contained a serine-rich heptapeptide of SWSASGS as in these vvIBDVs.
Sequential morphologic changes in the lymphoid organs were examined after ocular and cloacal inoculation in 3weekold chicks with a highly virulent strain (SH/92) of infectious bursal disease virus (IBDV). The infected chickens were sacrificed at 6, 12, 24, 48, 72, and 96 hrs post inoculation (Pl), and thymus, harderian gland, ceacal tonsil, and spleen were observed. Histologically, the significant lesions were characterized by lymphocyte depletion and the earliest detectable changes were evident at 12 hrs Pl. In thymic cortex, lymphoid depletion with apoptosis and prominent "tingible body macrophages" were observed. As the infection advanced, the lesions showed more severe changes. Dying cells were characterized either by capping of nuclear chromatin (apoptosis) or by cytoplasmic swelling (necrosis). In situ staining for apoptosis, some lymphoid cells revealed typical positive reaction, even the stainability was variable depend on every lymphoid organs. These results suggest that IBBV (SH/92) cause severe damage both primary and secondary lymphoid organs, and both T and B lymphocytes. Also the lymphoid depletion of these organs is caused by necrosis and apoptosis induced by IBDV.d by IBDV.
새 깔짚을 사용하는 16개 농가와 깔짚을 교체하지 않는 15개 농가를 대상으로 2009년 7월부터 11월까지 5개월에 걸쳐 농가당 2회 입식 기준으로 병아리 입식 전과 출하 전 깔짚을 수거하여 주요 바이러스 병원체의 오염 실태를 조사하고, 생산성을 분석하였다. 그 결과, 조사 기간 동안 깔짚을 교체해 주는 농가의 75%(12/16농가)에서, 깔짚을 재사용하는 농가의 73%(11/15)에서 37주의 바이러스가 분리되었다. 바이러스분리 시기별로보면병아리 입식 직전계사에서3주, 육계 출하 직전 계사에서 34주가 분리되었다. 깔짚 형태로 보면 새 깔짚을 사용하는 계사에서 17주, 깔짚을 재사용하는 계사에서 20주가 분리되어 계사 내 바이러스 병원체 오염정도는 깔짚 교체여부와 크게 관련성이 없는 것으로 나타났다. 분리된 바이러스 37주는 병원체별로 보면 IBV 14주, IBDV 2주, FAdV 9주 그리고 CIAV 12주였다. 이 중 IBDV 1주와 CIAV 2주는 입식 직전 계사에서 분리되었다. 본 연구에서 조사한 31개 농장 62개 계군의 생산지수를 조사한 결과, 깔짚 교체 농가와 재활용 농가 간 생산성은 유의성이 있는 차이가 나타나지 않았다.
The effect of dietary vitamin E supplementation on immune responses was studied in breeder chickens during the maturing period. In experiment 1, 17-week old female birds were fed corn-soybean meal based diets supplemented with either 0, 40, 80, 120, or 160 mg vitamin E (all-rac-${\alpha}$-tocopherol acetate)/kg diet for 19 weeks. In experiment 2, 23-week old male birds were fed the corn-soybean meal based diet supplemented with either 0, 20, 40, 80 or 160 mg vitamin E/kg diet for 8 weeks. The chickens were evaluated for growth performance, antibody titer to sheep red blood cell (SRBC), Newcastle disease virus (NDV), infectious bursal disease virus (IBDV) and infectious bronchitis virus (IBV), and skin response to phytohemagglutinin-P (PHA-P). The results showed that supplemental vitamin E improved body weigh gain of laying pullets during peak-laying period but had no significant effect on growth performance of cockerels. For cockerels, addition of 20 mg vitamin E/kg diet significantly enhanced (p<0.05) immune response to SRBC compared to those added with 0, 80 and 160 mg vitamin E/kg diet; addition of 20 mg vitamin E/kg diet had higher (p<0.01) antibody titer to IBDV than those added with 40-160 mg vitamin E/kg diet. No significant effects on immune response were observed in laying pullets fed supplemental vitamin E. The findings suggest that moderate supplementation of vitamin E may enhance immune responses to selective antigens in cockerels but excessive vitamin E may depress specific immune response.
Male broiler chicks were fed graded levels of organic zinc (zinc-methionine) supplementation to investigate the effects of partial or complete substitution of the organic zinc source for inorganic ones on the development of lymphoid organs and immunological responses. A total of 450 day-old male broilers were distributed into groups of 10 chicks and randomly assigned to nine experimental diets during a 42-day feeding trial. Dietary treatments consisted of two basal diets supplemented with 40 mg/kg added zinc as feed-grade Zn sulfate or Zn oxide in which, Zn was replaced with that provided from zinc-methionine (ZnMet) complex at the levels of 25, 50, 75 or 100%. Two randomly-selected birds from each pen replicate were bled and then slaughtered by cervical cutting on the final day of the trial to measure leukocyte subpopulations and relative weights of lymphoid organs. Among lymphoid organs, only thymus weight was affected (p<0.05) by dietary treatments. The sulfate-supplemented birds were heavier (p<0.01) in relative weight of thymus than oxide-supplemented birds. The 10 days of age-assessed cutaneous hypersensivity reaction was stronger in chicks fed ZnMet-containing diets. Dietary ZnMet supplementation caused (p<0.05) an increase in proportion of lymphocytes and consequently a decrease in heterophil to lymphocyte ratio. Diet fortification by zinc-methionine complex increased (p<0.01) Newcastle antibody titer at 19 days of age. Also, a similar response was observed in antibody titers at 6 and 12 d after infectious bronchitis vaccine administration. There was no significant effect of replacement of dietary zinc on antibody titer against infectious bursal disease virus (IBDV) at the 6th d post-vaccine inoculation; however, at d 12 after vaccination, ZnMet-fortified diets improved antibody titer against IBDV. Although dietary inclusion of ZnMet had no marked effect on primary antibody titer against sheep erythrocytes, effective responses were observed during secondary reaction from the viewpoint of both total antibody and immunoglobulin Y (IgY) titers. From the present findings, it can be concluded that dietary supplementation with organic zinc improves both cellular and humoral immune responses. It is necessary to replace 75% of supplemental inorganic zinc with organic ZnMet complex to achieve the optimum immunological responses in broiler chicks.
본 연구는 육계 사료에 식물추출물($Coxynil^{(R)}$, $Growell^{(R)}$ 그리고 $Respowell^{(R)}$)의 첨가가 육계의 성장, 혈액 성상 그리고 조직 내 변화에 미치는 영향을 조사하고, 또한 항생제 대체효과가 가능한가를 알아보기 위하여 수행되었다. 총 40,000수의 Ross 종 수평아리를 공시하여 34일 동안 사양실험을 실시하였으며, 대조군(CON)으로 salinomycin-6, clopidol-25, enramycin-1 그리고 BMD-2.5를 포함하는 항생제 첨가사료를 20,000수에게 급여하였으며, 식물추출물 급여군(NP)은 항생 제대체제로 Growell India사에서 판매되는 $Coxynil^{(R)}$, $Growell^{(R)}$ 그리고 $Respowell^{(R)}$을 각각 0.03%, 0.035% 그리고 0.03%씩 첨가하여 20,000수에게 급여하였다. 종료시 체중, 증체량 그리고 사료섭취량에 있어서 CON과 NP간의 유의적인 차이는 나타나지 않았으나 NP군의 사료섭취량이 다소 감소하는 경향을 나타내었다. 한편 시험기간 동안 CON군은 총 1,693 수가 폐사하였으나 NP 군은 1,008수가 폐사하여 식물추출물의 급여가 육계를 보다 건강하게 생육시키는 긍정적인 결과를 보였다. 항체 생성 반응에 있어서는 NP군이 CON군에 비하여 낮은 IBDV와 NDV 항체역가를 나타내었다. 혈액 중 total cholesterol, HDL-cholesterol, globulin 및 IgG 함량에서도 NP군과 CON군 간의 유의적인 차이는 발견되지 않았다. 실험 종료후, 각 장기의 조직을 적출한 후에 조직 상태를 조사한 결과 CON군과 NP군 간의 큰 차이점이 발견되지 않았다. Salinomycin-6, clopidol-25, enramycin-1 및 BMD-2.5 등의 항생제를 각각 Cinnamomum camphora, Zingiber officinale 그리고 Operculina turpethum을 주성분으로하는 $Coxynil^{(R)}$, $Growell^{(R)}$ 및 $Respowell^{(R)}$으로 대체하여 육계 사양실험을 실시한 결과, 상호간에 큰 차이를 나타내지 않았다. 본 연구 결과를 통하여, 상기 3종류의 식물 추출물들의 복합첨가는 육계 사양시 항생제를 대체할 수 있는 것으로 사료된다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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