• Reproductive and Developmental Biology
• /
• 제29권1호
• /
• pp.37-41
• /
• 2005

본 연구는 한우 수정란의 체외생산에 있어서 효율과 품질의 향상을 위해서, 미성숙 난포란을 회수하는 난소의 형태와 배양 용기로서 straw의 효과를 검토하였다. 난소의 형태에 따른 수정율은 전 군에서 70.3∼84.1%로서 비슷한 경향이었다. 8세포기 및 배반포기 발달율은 황체와 난포가 모두 존재하지 않는 대조군이 가장 높았다. 배반포의 inner cell mass(ICM), trophectoderm(TE), total cell number(TCN) 및 ICM/TCN 비율은 낭종군과 퇴행황체군이 다른군에 비하여 높은 경향이었다. 체외성숙에 이용하는 배양용기에 따른 수정율은 0.5 ㎖ straw 군이, 8세포기 발달율은 대조군이 가장 높았으나, 배반포기 발달율은 23.1∼30.7％로서 각 군 간에 비슷한 경향이었다. 한편 각각의 배양 용기에서 유래된 배반포의 ICM, TE, TCN 및 ICM/TCN 비율은 유사한 경향이었다.

• 한국수정란이식학회지
• /
• 제29권2호
• /
• pp.127-132
• /
• 2014

This study was carried out to investigate the effects of tissue inhibitor of matalloproteinase-1 (TIMP-1), Activin A and Heparin binding epidermal growth factor (HB-EGF) on in vitro production of bovine embryos. In experiment 1, presumptive zygotes were cultured in the medium supplemented with TIMP-1 ($0.5{\mu}g/ml$), Activin A (100 ng/ml), or HB-EGF (100 ng/ml) at $39^{\circ}C$ in a humidified atmosphere of 5% (v/v) $CO_2$, 5% (v/v) $O_2$ and 90% (v/v) $N_2$. In experiment 2, TIMP-1 + HB-EGF or Activin A + HB-EGF combinations were supplemented in the culture medium. The developmental rate to blastocysts, hatching rate and total cell numbers of the blastocysts were evaluated in both experiments. The embryos cultured in medium without growth factor supplementation was used as control group. In experiment 1, the embryos cultured in medium supplemented with TIMP-1 and Activin A showed significantly higher developmental rate to blastocysts than those cultured with HB-EGF and control (36.9%, 34.1%, 21.2% and 23.1%, respectively) (P<0.0001). However, the hatching rate of blastocyst was significantly higher in embryos with HB-EGF than those with TIMP-1, Actvin A and Control groups (84.4%, 58.8%, 51.4% and 49.3%, respectively) (P<0.001). Total cell number per blastocyst was also significantly higher in embryos with HB-EGF group ($174.3{\pm}2.5$) than those with TIMP-1, Activin A (149.7 and 150.0, respectively) (P<0.05) and Control (119.0) (P<0.001). In experiment 2, embryos cultured with combined treatment of Activin A and HB-EGF resulted in significantly higher rates of blastocysts formation (48.0%), hatching rate (89.7%) and total cell number in blastocyst ($182.3{\pm}2.1$) than those with TIMP-1 and HB-EGF combination group (32.0%, P<0.001; 76.6%, P<0.05; $165.7{\pm}4.2$, P<0.001, respectively). Our data demonstrate that in vitro production of bovine embryos could be improved by combined supplementation of Activin A and HB-EGF in culture medium.

• 한국가축번식학회지
• /
• 제26권2호
• /
• pp.173-182
• /
• 2002

포유동물의 체외수정란 치적발달조건을 수립하기 위하여 난자의 성숙, 수정 및 배양시 형태학적인 관찰만으로는 불충분하여 각 세포내 구성물 및 핵상 등의 변화를 조사하여 개별 수정란의 품질평가를 통하여 수정란 발달 능력을 향상시키는 방법의 개발이 필요하다. 최근 체외생산된 수정란이 발달율 및 착상율이 현저히 감소되는 원인을 조사한 결과 이러한 수정란에서 할구의 파편화가 보다 더 진행되는 것을 관찰하였다. 이에 본 실험의 목적은 체외수정과 핵치환 유래 소 배반포에서 세포사멸 기전으로 알려진 apoptosis 조절 유전자로써 Bcl-2와 Bax 유전자의 전사체 발현량을 비교 조사함으로써 착상전 수정란 발달과정에서의 역할을 확립하고자 하였다. Apoptosis의 분석은 TUNEL 방법으로 수행하였다 체외수정과 핵치환유래 배반포에서 Bcl-2와 Bax 유전자의 발현량은 RT-PCR로 확인하였다. 핵치환유래 배반포에 있어 TUNEL 표식으로 확인된 비율은 체외수정 된 배반포보다 유의하게 높다 (P<0.001). 체외수정된 배반포의 Bcl-2의 발현량은 핵치환유래 배반포보다 높다. 반대로 체외수정된 배반포의 Bax 발현량은 핵치환 유래 소 배반포보다 낮았다 (P<0.05). 이러한 결과는 체외수정보다 핵치환 유래 소의 배반포에서 좀더 많은 파편화를 초래함을 보여준다. 또한, 핵치환 유래 수정란의 발달 정지의 증가는 apoptosis와 같은 핵의 파편화로써 야기될 수 있다고 사료된다.

• 한국발생생물학회:학술대회논문집
• /
• 한국발생생물학회 2003년도 제3회 국제심포지움 및 학술대회
• /
• pp.7-8
• /
• 2003

Since it was first reported in 1997, somatic cell cloning has been demonstrated in several other mammalian species. On the mouse, it can be cloned from embryonic stem (ES) cells, fetus-derived cells, and adult-derived cells, both male and female. While cloning efficiencies range from 0 to 20%, rates of just 1-2% are typical (i.e. one or two live offspring per one hundred initial embryos). Recently, abnormalities in mice cloned from somatic cells have been reported, such as abnormal gene expression in embryo (Boiani et al., 2001, Bortvin et al., 2003), abnormal placenta (Wakayama and Yanagimachi 1999), obesity (Tamashiro et ai, 2000, 2002) or early death (Ogonuki et al., 2002). Such abnormalities notwithstanding, success in generating cloned offspring has opened new avenues of investigation and provides a valuable tool that basic research scientists have employed to study complex processes such as genomic reprogramming, imprinting and embryonic development. On the other hand, mouse ES cell lines can also be generated from adult somatic cells via nuclear transfer. These 'ntES cells' are capable of differentiation into an extensive variety of cell types in vitro, as well assperm and oocytes in vivo. Interestingly, the establish rate of ntES cell line from cloned blastocyst is much higher than the success rate of cloned mouse. It is also possible to make cloned mice from ntES cell nuclei as donor, but this serial nuclear transfer method could not improved the cloning efficiency. Might be ntES cell has both character between ES cell and somatic cell. A number of potential agricultural and clinical applications are also are being explored, including the reproductive cloning of farm animals and therapeutic cloning for human cell, tissue, and organ replacement. This talk seeks to describe both the relationship between nucleus donor cell type and cloning success rate, and methods for establishing ntES cell lines. (중략)

• 농업과학연구
• /
• 제22권1호
• /
• pp.62-68
• /
• 1995

본 연구는 돼지 수정란의 2, 4, 8세포배 및 상실배로부터 분리된 분할배의 작성율, 발생능 및 급속동결에 미치는 영향을 구명하고자 실시되었으며, 그 결과는 다음과 같다. l. Pronase 처리로 분할배를 작성했을 때, 성공율은 2세포배에서 85.7% 이었고, 평균은 68.0% 이었다. Manipulator를 이용했을 경우에는 2세포배 76.6% 및 4세포배 74.3%의 성공율을 나타냈다. 2. 분할배를 체외배양했을 때 배반포기까지의 발달율은 2, 4, 8세포배 및 상실배에서 pronase 처리의 경우 각각 24.1%, 20.4%, 25.5% 및 26.2%이었고 manipulator를 이용하였을 경우 각각 36.4%, 39.5%, 36.1% 및 4l.9% 이었다. 3. 분할배를 동결 융해했을 때 배반포기까지의 발달율은 2세포배에서는 glycerol(16.l%), 4세포배에서는 DMSO(16.7%) 및 상실배에서는 ethyleneglycol(27.6%)의 내동제를 이용한 경우에서 각각 가장 좋은 성적을 나타냈다.

• 한국수정란이식학회지
• /
• 제21권2호
• /
• pp.157-162
• /
• 2006

소 난포란의 체외 성숙은 과립막 세포, 난자의 핵성숙을 촉진하는 미지의 혈청내의 물질뿐만 아니라, 호르몬이나 생리 활성 인자 등에 의해 촉진됨이 밝혀졌다. 이에 따라 체외 성숙 및 체외 발달에 사용되는 배양액의 조성도 복합 배양액에서 단순 배양액으로 전환을 시도하고 있으며, 체내의 조건에 보다 더 접근하고자 하는 시도들이 수행되고 있다. 본 연구는 한우 난포란의 성숙 시 FGF의 첨가가 체외 성숙율 및 체외 수정 후 배발달율에 미치는 영향에 대하여 조사하였다. 한우 난포란의 체외 성숙시 FGF를 0.1, 1, 10 ng/ml를 첨가하였을 때 24 시간째에 Metaphase II 도달율은 각각 72.7, 70.0, 75.0%로서 무첨가 대조군의 37.5% 에 유의적으로 높은 성숙율을 보였다(p<0.05). 그러나 FGF 첨가 농도간에는 차이가 인정되지 않았다. FGF로 체외 성숙된 난포란의 체외 수정 후 배발달율은 0, 0.1, 1, 10 ng/ml FGF 첨가군에서 각각 25.0, 9.5, 0, 2.9%를 보여, 무첨가 대조군에 비해 FGF 첨가군에서 낮았다(p<0.05). FGF로 체외 성숙된 난포란을 체외 수정 후 10% FBS-HPM 199, 0.8% BSA-HPM 199 및 0.1% PVA-HPM에 배양한 결과 12.4, 12.8, 8.5%의 배반포 발달율을 보였으며, 무혈청 배양액인 IVMD, IVD에 배양한 결과 38.4 및 34.8%의 배반포 발달율로 유의적인 차이를 나타냈다(p<0.05). 결론적으로 FGF는 한우 난포란의 체외 성숙시 유용한 물질이나, 한우 난자의 체외 발달에는 단독의 효과를 기대할 수 없었으며, 다른 생리 활성 인자들 간의 상호 관계에 대하여 더 많은 연구가 요구된다.

• Journal of Animal Science and Technology
• /
• 제44권6호
• /
• pp.701-710
• /
• 2002

본 연구는 소 난자의 초자화 동결 방법을 설정하기 위하여 체외성숙 소 난자에서 난구세포가 부착된 상태 또는 제거한 상태로 microdrop (MD) 방법과 straw (Straw) 방법을 이용하여 초자화 동결하여 생존율을 검사하였다. 동결 융해난자는 a) 단위발생을 유도하였고 b) 체외수정 후 전핵 형성을 관찰하였으며 c)체외수정 후 수정란 발달을 검사하였다. 초자화 동결 난자의 생존율은 MD 방법을 이용하였을 때가 Straw를 이용하였을 때 보다 높았다 (92.50 vs. 74.19%, p<0.05). MD 방법을 이용하였을 때 대부분의 난자가 생존을 하였다. 단위발생을 유도하였을 때 난할율과 배반포 발달율은 MD (45.05%, 10.81%, p<0.05)가 Straw 방법 보다 높았다 (27.17%, 6.52%, p<0.05). 난구세포의 부착 유무에 따라 동결 융해 후 체외수정 하여 자웅 전핵 형성을 각각 검사하였다. 난구세포 제거 난자에서는 MD와 Straw 방법으로 동결 융해하였을 때 차이가 없었다(80.36% vs. 67.31 %, p<0.05). 정상 수정율 (2PN)에서는 세 처리간에 차이가 없었다 (Fresh; 54.55% vs. MD; 42.22% vs. Straw; 37.14%, p>0.05). 그러나 미수정란 (<1PN)은 Fresh 난자가 동결융해 난자보다 유의적으로 낮았다 (Fresh; 32.47% vs. MD; 57.78% and Straw 62.86%, p<0.05). 다정자 침입은 (3PN) 신선란 (12,99%)에서 발생하였으나 동결 융해 난자에서는 발생하지 않았다. 난구세포가 제거된 난자에서, 정상 수정율 (2PN)은 Fresh와 동결 융해 난자간에 유의적인 차이를 보였다 (Fresh; 59.38% vs. MD; 17.31% and Straw; 30.43%, p<0.05). 또한 미수정율 (<1PN)에 있어서도 신선란과 동결 융해난은 유의적인 차이를 보였다 (Fresh; 23.44% vs. MD; 73.08% and Straw 58.70%, p<0.05). 다정자 침입 (3PN, >4PN)은 신선란과 동결 융해란 모두에서 나타났다. 체외수정 후, 난구세포가 부착된 난자의 2세포기 발달율은 신선란에 비하여 MD 또는 Straw 처리구에서 유의적으로 낮았다 (Fresh; 81.76% vs. MD; 22.22% and Straw; 11.36%, p<0.05). 동결융해난자는 배반포 발달율에 있어서도 신선란에 비하여 유의적으로 낮았다 (Fresh; 28.38 vs. MD; 1.71% and Straw 0%, p<0.05). 난구세포가 제거된 난자에서 2세포기 발달율은 신선란과 MD에서 차이가 없었다 (27.59% vs. 19.25%, p<0.05), 그러나 배반포 발달율에 있어서는 신선란이 MD 또는 Straw 처리구보다 유의적으로 높았다 (4.31% vs. 0.62% and 0%, respectively; p<0.05). 이상의 결과에서, 초자화 동결융해한 소 난자는 체외수정 후 배반포로 발달이 가능함을 나타내주고 있다.

• 한국수정란이식학회지
• /
• 제17권1호
• /
• pp.55-59
• /
• 2002

ICSI시 동결 융해한 부고환 정자의 이용 가능성을 알아보고자 난자의 배양시 체외성숙율과 활성화 처리를 한 난자와 동결 융해한 부고환 정자로 ICSI시 체외발생율을 조사하였으며, 결과를 요약하면 다음과 같다. 1. 난포란을 회수 후 24시간 배양하였을 때 배양 시간에 따른 GV, MI, M II로의 체외성숙율은 각각 7/60(11.7%), 5/60(8.3%), 48/60(80.0%)였고 30시간 배양 시간에 따른 GV, MI, M II로의 체외성숙율은 각각 3/60(5.0%), 4/60(6.7%), 53/60(88.3%)였고 퇴화란은 각각 2/60(3.3%)와 1/60(1.7%)였다. 2. 동결 융해한 부고환 정자를 이용하여 활성화 처리를 한 난자에 ICSI를 하였을 때 상실배와 배반포로의 체외발생율은 각각 12/46(26.1%), 22/46 (47.8%)로서 비활성화처리 난자군 5/39 (12.8%), 10/39(25.6%)에 비해 높은 체외발생율을 나타냈다. 3. 활성화 처리를 한 난자에 신선정자, 부고환 정자 및 동결 융해한 부고환 정자로 ICSI시 체외 발생율은 각각 24/45(53.3%), 15/40(37.50%), l1/43 (25.6%)로서 신선정자에 비해 동결 융해한 부고환 정자처리군은 체외발생율은 약간 낮았지만 이용 가능성이 있음을 확인하였다.

• 한국수정란이식학회지
• /
• 제10권2호
• /
• pp.163-169
• /
• 1995

In the experiment I for maas production of bovine early embryos, 18~20hpi fertilized eggs (756 eggs) and parthenogenic eggs (618 eggs) which were treated by 10% ethanol were cultured in both TGM and CZB. In the experiment II, suppiment effects each in CZB and CRlaa were tested by matured and fertilized oocytes which were after 18~20hpi. In the case of experiment I after 48hr, the cleavage rates of normally fertilized eggs were 66.6% in TCM treatment and 77.7% in CZB treatment, and after 240h the blastocysts were 7.5% in TCM and 14.1% in CZB. In the parthenogenic eggs, the deavage rates at 48hr were 39.6% in TCM and 57.5% in CZB, and at 240h, the blastocysts were 0.9% in TCM and 4.4% in CZB. These results showed that the effects of CZB on developmental ability to parthenogenic eggs as well as nomally fertilized eggs are relatively high. In experiment W, the effect of exposing the cleaved embryos to CZB for 30h on the blastocyst formation was examined. Similar rates of blastocyst formation were obtained both in TCM and CZB, suggesting that CZB exposure. during ealry development is critical. In experiments III ~ V, the effects of supplements were examined. The cleavage rates of CZB treatments at 48h were 83.8% in control, 78.1% in BSA+A.A+SIT, 75% in 5% FCS+A. A+SIT, 88.6% in BSA+A.A+SIT and not co-cultured BSA+A.A+SIT had 85.7% and in the case of 240h blastocysts showed 22.6, 0.0, fl.1, 6.5 and 0%, respectively. As a result, this study showed that CZB was effective culture system for in vitro development, and that CZB and CR$_1$aa had no significant differences and effects between them. It may be concluded that in the simple media containing supplements could replace the co-culture systems of bovine early embryo development.

• 한국수정란이식학회지
• /
• 제21권3호
• /
• pp.183-190
• /
• 2006

본 연구는 고급육을 생산한 한우의 유전자를 재활용하기 위해 기초 등록우와 혈통 등록우의 육질등급이 1 등급 이상인 암소의 난소에서 개체별로 채취한 난포란을 개체별로 각각 체외 성숙, 체외 수정 및 체외 배양하였다. 그 결과를 요약하면 다음과 같다. 기초 등록우의 육질 등급별로 회수된 난포란은 각각 1 등급 평균 28.9개, $1^+$등급 평균 28.8개, $1^{++}$ 등급 29.6개로 평균 29.0개였다. 기초 등록우의 육질 등급별 배반포배 형성율은 각각 1 등급 27.2%, $1^+$ 등급 28.7%, $1^{++}$ 등급 32.9%로 평균 8.4개의 배반포배가 생산되었으며, 배반포배 형성율은 육질등급간에 유의적 차이가 없었다. 혈통 등록우의 육질 등급별로 회수된 난포란은 각각 1 등급 평균 25.8개, $1^+$등급 평균 27.1개, $1^{++}$ 등급 27.0개로 평균 26.7개였다. 혈통 등록우의 육질 등급별 배반포배 형성율은 각각 1 등급 23.0%, $1^+$ 등급 33.7%, $1^{++}$등급 42.6%로 평균 8.6개의 배반포배가 생산되었으며, 배반포배 형성율은 육질등급간에 유의적 차이가 있었다(p<0.05).