Cytotoxicity assays using artificial skins have been proposed as in vitro alternatives to minimize animal ocular and dermal irritation testing. Accordingly, the responses of artificial skins to the well-characterized chemical irritants toluene, glutaraldehyde, and sodium lauryl sulfate (SLS), and the nonirritant polyethylene glycol were studied. The evaluation of the irritating and non-irritating test chemicals was also compared with the responses observed in human dermal fibroblasts and human epidermal keratinocytes grown in a monolayer culture. The responses monitored included an MTT mitochondrial functionality assay. In order to better understand the local mechanisms involved in skin damage and repair, the production of several mitogenic proinflammatory mediators, interleukin-l$\alpha$, 12-HETE, and 15-HETE, was also investigated. Dose-dependent increases in the levels of かIn and the HETEs were observed in the underlying medium of the skin systems exposed to the two skin irritants, glutaraldehyde and SLS. The results of the present study show that both human artificial skins can be used as efficient in vitro testing models for the evaluation of skin toxicity and for screening contact skin irritancy.
Atopic dermatitis (AD) is usually caused by foods such as wheat, egg, milk, and peanuts, leading to common health problems in early childhood with complications like urtication. The aim of this study was to evaluate ethanol extracts of rice and rice snacks concentrated until the ethanol was completely eliminated and hot-air dried. In vitro analyses were carried out using murine macrophage RAW 264.7 cells. We measured cytotoxicity, nitric oxide (NO) production, and inflammatory cytokine level. The NO level of the cells exposed to lipopolysaccharide (LPS) was significantly reduced by rice and rice snack extracts. $TNF-{\alpha}$ level decreased in contrast to the LPS group, although a significant difference was not observed. On the other hand, IL-6 significantly decreased in both rice and rice snack extracts in a dose-dependent manner. The results of the present study suggest that rice and rice snack decreased NO and inflammatory cytokine levels. Therefore, rice could be useful as a raw material for relieving child atopic dermatitis caused by snacks made from wheat.
소핵시험은 세포분열 단계 중 간기 세포의 세포질 내 소핵 유무를 조사함으로써 유전독성을 평가하는 시험법이다. 최근 화장품 안전성 평가에 동물실험을 금지하거나 최소화하려는 노력이 확산되고 있어 유전독성 평가에 있어서도 기존의 동물실험이 아닌 새로운 in vitro 시험법이 요구되고 있다. 본 연구에서는 3차원 배양인공피부모델인 KeraSkin$^{TM}$을 이용하여 도포 처치된 물질의 유전독성을 평가하였다. 2종의 유전독성물질인 mitomycin C (MMC)와 methyl methanesulfonate (MMS)는 농도 의존적으로 세포독성과 소핵 형성이 유도된 반면, 대조물질인 4-nitrophenol (4-NP)와 trichloroethylene (TCE)에서는 농도 의존적으로 세포독성은 관찰되었으나 소핵은 형성되지 않았다. 따라서 인공피부모델을 이용한 소핵시험이 화장품과 같은 피부적용물질의 in vitro 유전독성 평가에 유용할 것으로 사료된다.
Boiled-water extracts from 101 Korean medicinal plants were tested in vitro for their inhibitory activity against influenza virus type A by means of a modified hemagglutination inhibition test. Thirteen of the 101 extracts exhibited strong anti-influenza virus type A activity at concentrations of less than $780\;{\mu}g/ml$. Out of the above 13 extracts, MW-40 (Chaenomeles speciosa), MW-88 (Citrus junos), and MW-100 (Zingiber officinale) exhibited marked antiviral activity in the concentration range of $0.195\;{\mu}g/ml$ to 100 mg/ml, $0.0487\;{\mu}g/ml$ to 100 mg/ml, and $0.0487\;{\mu}g/ml$ to 100 mg/ml, respectively. The extracts MW-88 and MW-100 were not cytotoxic to red blood cells, whereas MW-40 showed very weak cytotoxicity in the concentration range of 50 mg/ml to 100 mg/ml. Therefore, the present results demonstrate that boiled water extracts of 2 Korean medicinal plants, MW-88 and MW-100, have strong anti-influenza virus type A activity and no cytotoxic effects, and they may inhibit attachment of the virus to the cell and may be used for prophylaxis.
최근의 소비자들은 waterproof 기능을 가진 광범위한 UV 차단 제품을 선호하며, 피부 안전성에도 많은 관심을 가지고 있다. NR method로 세포 자극성(in-vitro)을 실험한 결과, UV-B의 자외선 차단제들은 0.08 w/v% 이상에서 세포의 생존율이 떨어졌고, UV-A의 자외선 차단제들은 0.06 w/v% 이상에서 세포의 생존율이 떨어졌다. 무기 자외선 차단제들의 patch-test는 각각 10.5와 11.25 이하로 피부에 자극성은 없었다. UV 흡수 곡선, UV-B는 octyl methoxycinnamate(OMC), UV-A는 butyl methoxy dibenzoylmethane(BMDM) 가장 적합하였다. 따라서, 유기 자외선 차단제는 OMC와 BMDM이 nylon과 polyethylene에 코팅된 원료인 $Nylonpoly^{TM}$ UVA/UVB을 사용하였다. 무기 자외선 차단제는 zinc oxide(ZnO)와 titanium dioxide($TiO_2$)를 사용하였다. ZnO와 $TiO_2$의 혼합 비율은 6:4가 적당하였다. 총 UV차단제의 함량은 ZnO 6%, $TiO_2$ 4%와 $Nylonpoly^{TM}$ UVA/UVB 5%를 썬 스크린 크림에 혼합하였다. In-vi-tro의 SPF값은 38.9이었다. 응용으로, 동일 함량을 넣은 O/W type과 W/S type의 썬 스크린 크림을 만들어 시간 경과에 따른 SPF를 측정한 결과, SPF가 O/W type보다 W/S type이 5배 이상 오래 지속되었다. 이것은 해수욕, 등산, 스키를 탈 경우에 효과적이다. 본 연구는 자외선 차단제의 피부 트러블을 최소화하고자 하였으며, 매끄러움성, 피부 안전성과 자외선 차단 효과가 우수한 화장품이라고 생각되어진다.
The in Vitro chemosensitivity of fibroblast cell strains was determined using a semiautomated tetrazolium-based colorimetric assay(MTT assay) to 16 cosmetic materials. This assay is useful method to evaluate toxic effects of the chemicals. From assay results, we determined that the preservatives are more toxic than moisteurizers. The chemicals in the same group have a different toxicity. That is, in preservatives, Germall -115 is more toxic than Danisol -M, -p, and in surfactant sodium laurel sulfate than Myrj 52, and in moisteurizers, 1, 3-butylene glycol is more safe than the others. When the results from this assay for preservatives were compared with patch test results, good correlation was observed. Forthemore, this assay method can be used together with Patch test for the evaluation of the chemical toxicity, particularly in cosmetic field.
Selaginellae Herba has been used as folk medicine for antineoplastics, coagulants, antidotes and invigorants. To find an in vitro screening method for liver protective effect of Selaginellae Herba in benzo(a)pyrene intoxicated injury were examined in primary cultured rat hepatocytes. Using MTT assay, herba concentration showed dose dependently viability. The lowest concentration of benzo(a)pyrene giving cytotoxicity revealed around 50gM. The hepatoprotective effect of Selaginellae Herba in both water and chloroform extracts was also increased dose dependently.
화장품의 변질요인은 크게 물리적 또는 화학적 변화에 의한 요인과 미생물오염으로 인한 각종 문제점으로 대별될 수 있다. 이 중에서 미생물 오염문제는 제품의 상품가치에 미치는 영향 뿐만 아니라 지속적인 사용에 의한 피부의 위생적 측면때문에 그 중요성에 대한 인식이 높아지고 있다. 따라서, 제품개발시는 화장품 처방중의 영양성분의 배합, pH, 유화형태, 방부제의 혼합, 분배계수 및 그 안정성을 고려하여야 함은 물론이고 처방중의 모든 원료의 각각에 대한 항균능 및 피부자극여부를 사전에 미리 조사하여 각 제품별로 적당한 방부체계를 선택하는 것은 매우 중요한일이다. 독성실험방법에 있어서 in vivo 실험에 대체할 수 있는 새로운 in vitro 실험방법 수립 즉, 동물실험을 하지 않고 in vitro 실험결과로부터 in vivo 결과를 예측할 수 있도록 새로운 in vitro 실험체계의 가능성을 실험하였다. 4종의 cell line중 transformed mouse fibroblast L929가 본 실험에서 사용하기에 배양상의 용이성과 안정성, 재현성의 관점에서 가장 알맞은 cell line이었다. transformed mouse fibroblast L929를 사용한 NR$_{50}$ assay와 Draize score간의 regression coefficient ${\gamma}$값은 0.91이었다. 혈청은 시험물질의 세포에 대한 민감성에 영향을 주었다. 따라서, modified serum-free method를 이용함으로써 regression coefficient가 증가된 즉, 상관성 및 재현성이 높은 결과를 얻을 수 있었다. 이러한 기술은 독성실험에 실험동물을 사용하지 않고 in vivo test에 대체 할 수 있고, 또한 화학물질에 대한 prescreening으로 이용할 수 있을 것으로 판단된다.원과 섭식장소, 수중생물의 경우는 특히 수온, 수량 영양원등이다.(중략). 본 연구의 접근방법으로는 ASRS의 개념적인 Reference Model을 수립하고 이 Reference Model에 대한 Formal Model로 DEVS(Discrete Event System Specification)을 이용하여 시스템을 Modeling하였다. 이의 Computer Simulation을 위하여 DEVS형식론 환경에서의 Simulation Language인 DEVSim ++ⓒ를 이용하여 시스템을 구현하였다.. 실형 결과로는 먼저 선형 상미분방정식의 예로 mass-damper-spring system, 비선형 상미분방정식의 예로는 van der Pol 방정식, 연립 상미분방정식의 예로는 mixing tank problem 등을 보였으며, 그의 공학에서 일어나는 여러 가지 문제들도 다루었다.화물에 대한 방어력이 증가되어 나타난 결과로 여겨지며, 또한 혈청중의 ALT, ALP 및 LDH활성을 유의성있게 감소시키므로서 감잎 phenolic compounds가 에탄올에 의한 간세포 손상에 대한 해독 및 보호작용이 있는 것으로 사료된다.반적으로 홍삼 제조시 내공의 발생은 제조공정에서 나타나는 경우가 많으며, 내백의 경우는 홍삼으로 가공되면서 발생하는 경우가 있고, 인삼이 성장될 때 부분적인 영양상태의 불충분이나 기후 등에 따른 영향을 받을 수 있기 때문에 앞으로 이에 대한 많은 연구가 이루어져야할 것으로 판단된다.태에도 불구하고 [-wh]의미의 겹의문사는 병렬적 관계의 합성어가 아니라 내부구조를 지니지 않은 단순한 단어(minimal $X^{0}$ elements)로 가정한다. 즉, [+wh] 의미의 겹의문사는 동일한 구성요 소를 지닌 병렬적 합성어([$[W1]_{XO-}$$[W1]_{XO}$ ]
Blueberry juice possesses rich-procyanidins and - anthocyanidin, comprised a group of with numerous health benefits such as protection against coronary heart disease, detoxification, and obesity. Blueberry (Vaccinium virgatum) juice extracts were analyzed and separated by an HPLC method for the purpose of the separation and quantification in polyphenolic groups. In specific HPLC conditions, a binary mobile phase consisting of formic acid: water (10:90, v/v, solvent A) and formic acid: water: acetonitrile (10:60:30, v/v/v, solvent B) was utilized and it is detected at 546 nm wavelength. The phenolic contents of the extracts are determined using Folin-Ciocalteu phenol reagent. In order to test anti-inflammation activity assay, after producing nitric oxide (NO) in lipopolysaccharide activated RAW 264.7 cells, at concentration of $20-500{\mu}g/mL$ it reduced to NO production at a dose-dependent manner. Importantly, cytotoxicity assay with up to $500{\mu}g/mL$ of the extract from blueberry juice showed ~100% cell viability for RAW264.7 cell line. Therefore, Korean blueberry juice might have potential as anti-oxidant and antiinflammation agents.
The microculture XTT antiviral assay method is used to quantitate HIV-1 induced cytopathic effects as modulated by test substances. This relatively simple assay facilitated the safe and rapid determination of in vitro antiviral activity of selected chemicals as well as direct cytotoxicity. This experiment also confirmed that this system measures infection and subsequent viral replication in target cells and XTT formazan formations correlated with the accumulation of extracellular virions, as measured by quantitative HIV-1 induced syncytium foramtion. The present results with Glycyrrhizin using this in vitro culture system demonstrated that effective dose, EC50(the concentration at which increases XTT formazan production in infected cultures to 50% of that in untreated, uninfected controls) was 250ml. As comparison, AZT was included in this experiment and demonstrated that EC50 AZT of was 0.05g/ml, approximately 5,000 times more potent than Glycyrrhizin based on EC50 ratio's alone. However, this potency is limited by severe cytotoxicity of AZT, while Glycyrrhizin is approximately 16 times less toxic(IC50 of Glycyrrhizin 800 and AZT 51 g/ml). While AZT's anti-HIV-1 viral activity is mediated by inhibition of reverse transcriptase of the virus, Glycyrrhizin faild to demonstrate any inhibitory activity against reverse transcriptase. Further study is necessary in order to understand the precise mechanisms of Glycyrrhizin action against HIV-1 viruses. Althouth Glycyrrhizin is less effective antiviral agent than AZT, much less toxicity of Glycyrrhizin is desirable in terms of chronic treatment. Combination treatment of AZT and Glycyrrhizin may be therapeutically beneficial. Clinical effectiveness of two drug combination therapy for AIDS patient is unknown at this time. However, this experimental investigation presents the scientific rational basis for such therapeutic approach.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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