Hepatic cirrhosis is a common response to chronic liver injury from many causes and is one of the most common cause of all deaths. This study was carried out to compare experimental hepatic cirrhosis in rats to understand this disease and to apply for the pharmacokinetics in disease state. Following three kinds of experimental models were induced; 1) Bile duct ligation/scission (BDL/S), 2) N, N-dimethylnitrosamine(DMN), 3) Carbon tetrachloride. The hepatic cirrhosis was characterized by examing the liver/body weight ratio, serum biochemical values, hydroxyproline content in liver and histopathological lesions in cirrhotic rat liver. The results are as follows : (1) In BDL/S, the liver was enlarged to 250% of normal liver. In contrast the liver was shrinked to 48% and 78% of the normal liver in DMN and carbon tetrachloride, respectively. (2) In carbon tetrachloride and BDL/S, the serum ALT, AST, ALP and total bilirubin levels were significantly increased to 200~300% of normal level, while ALT and total bilirubin levels were significantly increased in DMN group. (3) Hydroxyproline content in cirrhotic rat liver was significantly 200~500% higher than that of normal liver. (4) Nodular formation with fibrosis was observed in BDL/S, DMN, carbon tetrachloride induced cirrhotic rat liver.
We investigated the pathogenesis of liver tissue damage during the lipid peroxidation and fibrogenesis with the observation of correlations between the parameters of collagen synthesis (and deposition) and lipid peroxidation in liver fibrosis (cirrhosis) rats. Rats were randomly divided into two groups, normal and $CCl_4$-thiopental sod. intoxicated group. And the one group was treated intragastrically with the mixture of $CCl_4$-thiopental sod. 3 times per week for 3 weeks. The liver tissue and sera were used for the measurement of hydroxyproline (HYP), malonedialdehyde (MDA) and superoxide dismutase (SOD). Biochemical parameters such as aspartate transaminase (AST), alanine transaminase (ALT), alkaline phosphatase (ALP), total-bilirubin and blood urea nitrogen (BUN) were measured. Additionally, the expression of collagen ${\alpha}1$(III) and $\beta$-actin mRNA was observed by RTPCR. The histological change in liver tissue was also observed by Masson's trichrome and H&E staining. Correlation analysis was carried by Spearman's rho method. All biochemical parameters except total-bilirubin were significantly higher in the $CCl_4$-thiopental sod. treated group than that of the normal group (p < 0.01). In the $CCl_4$-thiopental sod. treated group, Hyp as a parameter of collagen synthesis (deposition) and MDA as a metabolite of lipid peroxidation, were significantly elevated by 1.98 and 2.11 times higher than that of the normal group (p < 0.001) respectively. The activity of SOD in the $CCl_4$-thiopental sod. treated group is decreased significantly by 44.8% (p < 0.001). And collagen ${\alpha}1$(III) mRNA was more expressed in the $CCl_4$-thiopental sod. treated group than that of the normal group. However, the expression of $\beta$-actin mRNA is showed similar in both of groups. A good correlation was observed between the content of hyp and MDA concentration (r = 0.70, n = 40) in the two groups. And the correlation between the levels of hyp and SOD (r = -0.71, n = 25) is also reliable. However, no correlation were observed between MDA concentration and SOD (r = -0.40, n = 25) in the two groups. Elevated levels of MDA in $CCl_4$-thiopental sod. treated rats indicated enhancement of lipid peroxidation, which is accompanied by a decrease in SOD activity. Moreover, we could confirm that the parameters of collagen synthesis (and deposition) is in good correlation with the metabolite of lipid peroxidation (MDA) and the lipid peroxidation antagonizing enzyme (SOD). Hence, we propose that (1) lipid peroxidation and collagen synthesis (and deposition) could be enhanced by intragastrically application of $CCl_4$-thiopental sod. during a short terms. And (2) the intoxication of $CCl_4$-thiopental sod. could be used for monitoring of lipid peroxidation and collagen synthesis (and deposition) for test of antioxidant and antifibrotic agent.
1. Objectives This study was carried out to investigate the effects of Gunyuljejo-tang on the $CCl_4$-induced Liver Damage in Rats. 2. Methods Sprague-Dawley rats were devided into 5 experimental groups : Normal, $NS+CCl_4$(Solid extract of $CCl_4$ injection group after Normal Saline feed), $GYJJT+CCl_4$(Solid extract of $CCl_4$ injection group after Gunyuljejo-tang feed), $CCl_4+NS$(Normal Saline feed group after $CCl_4$ injection), $CCl_4+GYJJT$(Solid extract of Gunyuljejo-tang feed group after $CCl_4$ injection). Biochemical assays for serum enzyme activities such as AST, ALT, ALP, BUN, Creatinine, Uric Acid, Total Protein, Albumin, Total Cholesterol, Triglyceride, Glucose, and mRNA Revelation of Cytochrome p450 and activities such as LPO, GSH, GST, Glutathione Reductase, Glutathione Peroxidase, SOD, Catalase, Hydroxyproline, and ${\beta}$-Glucuronidase were performed. 3. Results (1) $GYJJT+CCl_4$ showed lower revelation of Cytochrome p450. (2) $GYJJT+CCl_4$ showed higher GSH activity than $NS+CCl_4$, $CCl_4+GYJJT$ showed higher GSH activity than $CCl_4+NS$ injection significantly. (3) $GYJJT+CCl_4$ showed higher GST activity than $NS+CCl_4$. $CCl_4+GYJJT$ showed higher GST activity than $CCl_4+NS$ significantly. (4) $GYJJT+CCl_4$ showed higher Glutathione Peroxidase activity than $NS+CCl_4$, $CCl_4+GYJJT$ showed higher Glutathione Peroxidase activity than $CCl_4+NS$ significantly. (5) $CCl_4+GYJJT$ showed higher SOD activity than $CCl_4+NS$ significantly. (6) $CCl_4+GYJJT$ showed higher Catalase activity than $CCl_4+NS$ significantly. (7) $GYJJT+CCl_4$ showed lower Hydroxyproline than $NS+CCl_4$ significantly, $CCl_4+GYJJT$ showed higher Hydroxyproline than $CCl_4+NS$ significantly. (8) $GYJJT+CCl_4$ showed higher ${\beta}$-Glucuronidase activity than $NS+CCl_4$, $CCl_4+GYJJT$ showed higher ${\beta}$-Glucuronidase activity than $CCl_4+NS$ significantly. 4. Conclusions Gunyuljejo-tang has the recovering effects on the $CCl_4$-induced Liver Damage significantly.
BACKGROUND/OBJECTIVE: Orostachys japonicus A. Berger (Crassulaceae) has been used in traditional herbal medicines in Korea and other Asian countries to treat various diseases, including liver disorders. In the present study, the anti-fibrotic effects of O. japonicus extract (OJE) in cellular and experimental hepatofibrotic rat models were investigated. MATERIALS/METHODS: An in vitro hepatic stellate cells (HSCs) system was used to estimate cell viability, cell cycle and apoptosis by MTT assay, flow cytometry, and Annexin V-FITC/PI staining techniques, respectively. In addition, thioacetamide (TAA)-induced liver fibrosis was established in Sprague Dawley rats. Briefly, animals were divided into five groups (n = 8): Control, TAA, OJE 10 (TAA with OJE 10 mg/kg), OJE 100 (TAA with OJE 100 mg/kg) and silymarin (TAA with Silymarin 50 mg/kg). Fibrosis was induced by treatment with TAA (200 mg/kg, i.p.) twice per week for 13 weeks, while OJE and silymarin were administered orally two times per week from week 7 to 13. The fibrotic related gene expression serum biomarkers glutathione and hydroxyproline were estimated by RT-PCR and spectrophotometry, respectively, using commercial kits. RESULTS: OJE (0.5 and 0.1 mg/ mL) and silymarin (0.05 mg/mL) treatment significantly (P < 0.01 and P < 0.001) induced apoptosis (16.95% and 27.48% for OJE and 25.87% for silymarin, respectively) in HSC-T6 cells when compared with the control group (9.09%). Further, rat primary HSCs showed changes in morphology in response to OJE 0.1 mg/mL treatment. In in vivo studies, OJE (10 and 100 mg/kg) treatment significantly ameliorated TAA-induced alterations in levels of serum biomarkers, fibrotic related gene expression, glutathione, and hydroxyproline (P < 0.05-P < 0.001) and rescued the histopathological changes. CONCLUSIONS: OJE can be developed as a potential agent for the treatment of hepatofibrosis.
본 연구의 목적은 in vitro 실험에서 human dermal fibroblast cell을 이용한 섬유아세포 증식과 콜라겐 생성을 통한 전층피부창상치유에 대한 효과를 알아보는 것이다. In vitro 실험에서, 베타글루칸 및 양성대조물질 oncostatin M을 사용하여 처치 후 24 또는 48시간 이후 MTT assay와 세포수 관찰을 통해 섬유모세포 증식효과에 대해 평가하였다. Procollagen 생산에 대한 효과를 평가하기 위해 베타글루칸 및 양성대조물질 oncostatin M 처치 48시간 후 hydroxyproline을 HPLC를 이용하여 정량하여 평가하였다. 창상재구축에 대한 효과를 평가하기 위해 베타글루칸 및 양성대조물질 fucoidan fraction 7을 FPCL 모델을 이용하여 평가하였다. 베타글루칸 처치군은 음성대조군 대비 0.1 mg/ml 이상의 농도에서 용량의존적이고 유의적인 OD 또는 섬유아세포수의 증가가 관찰되었다. 게다가 베타글루칸 처치군은 창상면으로 유주된 세포수가 음성대조군 대비 1 mg/ml 이상의 농도에서 용량의존적이고 유의적인 증가가 관찰되었다. 그러나 베타글루칸 처치군은 음성대조군 대비 모든 용량에서 procollagen 생산에 대한 유의적인 변화가 관찰되지 않았다.
These studies were carried out to examine the estradiol-17$\beta$ levelsin plasma and ovarian tissues, as well as the contents of collagen and catecholamines in the uterus, and to determine the effects of GnRH administrations of uterine involution in postpartum Korean native goats. Plasma concentrations of estradiol-17$\beta$ were 63.81$\pm$8.00 pg/ml at day 1 of kidding, declined to 36.78$\pm$22.90 ng/ml at day 24 and decreased progressively to 27.81$\pm$17.06 and 12.46$\pm$8.13 pg/ml at days 30 and 36 postpartum, respectively. In ovarian tissues, the concentrations of estaiol-17$\beta$ were increased just before parturition and decreased immediately after parturition. The plasma estradiol-17$\beta$ levels were slightly higher on days 12 and then decreased gradually after parturition. The concentraitons of estradiol-17$\beta$ in the ovaries of postpartum goats were increased at day 36 after treatments with GnRH. The total hydroxyproline contents in the uterus was slightly higher prior to parturition and decreased gradually with the postpartum intervals after parturition. Hydroxyproline concentraitons in the uterus were decreased at days 24 and 36 postpartum after treatments with GnRH. The norepinephrine concentrations in myometrium from the pregnant and postpartum goats were correspondingly low both immediately before and after partuition. Norepinephrine concentrations in the pregnant horn of the uterus were increased from days 12 to 36 of postpartum and those levels of the non-pregnant horn were also increased from days 24 to 36 postpartum. Slightly higher concentrations were present in the non-pregnant horn in comparison to the pregnant horn but these differences were not significant. Postpartum, the uterine norepinephrine concentration was slightly increased at day 36 after treatments with GnRH. Dopamine concentrations were greater than those of norepinephrine. The concentrations of dopamine in the uterus of pregnant goats was not significantly different from that in the postpartum animals. Dopamine concentraitons of pregnant horn in postpartum goats were increased at day 24 after treatments with GnRH.
This study was conducted to examine contents of total acid and free amino acids in the Demi-glace with added quantity of Omija extracts. Firstly, The level of Total acid content of Demi-glace sauces was $1.08{\sim}1.89%$ and Omija extracts was $2.77{\sim}7.24%$. The more Omija extracts added, there was the higher total acid contents. Sauces and extracts of 5% Omija was the highest. Secondly, Total free amino acids contents of control was 2518.52mg%, and Omija sauces was $2261.52{\sim}2894.14mg%$. 2% Omija sauces was the highest among them. Hydroxyproline of total 34 free amino acids was the highest, and Glutamic acid 158.42mg%, Proline 78.90mg% was next in order. Arginine was the highest with $27.40{\sim}34.40mg%$ among 9 essential amino acids contents. Glutamic acid was the highest contents with $123.18{\sim}158.42mg%$. Compared to control's(0.41mg%), Omija added group was $20.63{\sim}27.82mg%$ and it was the highest increase. While other 15 amino acid was analyzed, Hydroxyproline was the highest contents with $1,737.22{\sim}2,205.80mg%$. Compared to control group(15.63mg%), proline was $57.01{\sim}78.90mg%$ Omija added group and it was increased with the highest contents. In essential amino acid, flavor enhancing amino acid and other amino acid were increased and the highest contents with 2% added Omija sauce. Thirdly, sensory characteristics of Demi-glace sauces based on overall preference, It was find that 2% added Omija was the best. 2% added was the best for color, flavor, taste, texture, overall acceptability(P<.001). In terms of Demi-glace sauces' gender preference, male and female people liked 2% added Omija color, flavor, taste, texture, overall acceptability. It was find that there was no significant differences between male and female.
엑스성분에 대하여 비교적 알려진 것이 적은 담수어 중 가물치를 시료로 하여 가열 시간별로 육액스분중의 아미노산 및 그 관련화합물의 함량변화를 분석 검토하였다. 가물치의 생육중에는 glycine, taurine, glutamic acid, histidine이 특히 많은 함량을 보였고, 요소가 많이 함유되어 있는 것도 특기할 점이었다. 전술한 4 가지 성분이 전체아미노산 및 그 관련화합물중 약$53\%$를 차지하였다. 가열시간에 따른 전질소엑스분의 양적 변화를 측정한 결과, 대체로 가열 120분까지는 대폭 증가하였으나 그 이후부터는 감소하는 관계를 보였다. 120분간의 가열에서 특히 현저한 증가를 보인 성분은 요소를 비롯하여 taurine, glycine, alanine, hydroxyproline, ${\beta}$-aminoisobutyric acid 등이었다. 엑스분을 가수분해한 결과, 일부의 성분은 증가하였으며, ethanolamine, lysine, 1-methylhistidine, phenylalanine, glutamic acid, taurine 등은 현저한 증가경향을 보였다.
본 연구는 피혁 폐기물로부터 크롬 이온을 분리한 상태로 Collagen을 추출할 수 있는 최적 조건에 관한 것이다. Collagen 추출에 있어 온도, pH, 그리고 알칼리 용액 농도의 영향을 실험했다. 실험결과 점도측정에 의해 초기 변성온도는 $25^{\circ}C$, 완전 변성온도는 $31.5^{\circ}C$였다. Collagen 추출의 최적조건은 가용화 온도 $15^{\circ}C{\sim}20^{\circ}C$, pH 1.5, 알칼리 용액 3%였다. PH 1.5에서 크롬 이온이 거의 분리되었다. 탄닌 폐기물로부터 크롬 이온의 분리효율은 99.5% 이상이었다. 피혁 폐기물로부터 조단백질의 추출율은 89.%이었다. 추출된 조단백질내에 hydroxyprolne과 collagen의 함량은 각각 8.53%, 63.62%였다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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