Nam In-Young;Cho Jae-Chang;Myung Hee-Joon;Joh Ki-Seong
Journal of Microbiology and Biotechnology
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제16권8호
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pp.1292-1300
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2006
Aeromonas encheleia, a potential human intestinal pathogen, was shown to infect a human intestinal epithelial cell line (Caco-2) in a noninvasive manner. The transcriptional profile of the Caco-2 cells after infection with the bacteria revealed an upregulated expression of genes involved in chloride secretion, including that of phospholipase A2 (PLA2) and platelet-activating factor (PAF) acetylhydrolase (PAFAH2). This was also confirmed by a real-time RT-PCR analysis. As expected from PLA2 induction, PAF was produced when the Caco-2 cells were infected with the bacteria, and PAF was also produced when the cells were treated with a bacterial culture supernatant including bacterial extracellular proteins, yet lacking lipopolysaccharides. Bacterial aerolysin was shown to induce the production of PAF.
The fecal ${\beta}-glucuronidase$ activity of patients with colon cancer and healthy controls were measured to determine the relationship between the fluctuation of intestinal bacterial ${\beta}-glucuronidase$ and colon cancer. The fecal ${\beta}-glucuronidase$ activity of patients with colon cancer was 1.7 times higher than that of the healthy controls. However, when these fecal specimens were sonicated, the enzyme activity of patients with colon cancer was 12.1 times higher than that of the healthy controls. The fecal ${\beta}-glucuronidase$ activity of human Intestinal bacteria was drastically induced by its substrate or the bile secreted after a subcutaneous injection of 1,2-dimethylhydrazine (DMH) and benzo[a]pyrene into rats. DMH-and benzo[a]pyrene-treated biles induced ${\beta}-glucuronidase$ activity in the human intestinal microflora by approximately 1.5- and 2.3-fold, respectively. They also induced ${\beta}-glucuronidase$ in E. coli HGU-3, which is a ${\beta}-glucuronidase$-producing bacterium from the human intestine. D-saccharic acid 1,4-lactone similarly inhibited fecal ${\beta}-glucuronidase$ in several patients with colon cancer in addition to the healthy controls. This suggests that potent ${\beta}-glucuronidase$ activity is a prime factor in the etiology of colon cancer.
The growth-inhibitory activity of Cassia tora seed-derived materials against seven intestinal bacteria was examined in vitro, and compared with that of anthraquinone, anthraflavine, anthrarufin, and 1-hydroxyanthraquinone. The active constituent of C. tore seeds was characterized as quinizarin, using various spectroscopic analyses. The growth responses varied depending on the compound, dose, and bacterial strain tested. At 1 mg/disk, quinizarin exhibited a strong inhibition of Clostridium perfringens and moderate inhibition of Staphylococcus aureus without any adverse effects on the growth of Bifidobacterium adolescentis, B. bifidum, B. longum, and Lactobacillus casei. Furthermore, the isolate at 0.1 mg/disk showed moderate and no activity against C. perfringens and S. aureus. The structure-activity relationship revealed that anthrarufin, anthraflavine, and quinizarin moderately inhibited the growth of S. aureus. However. anthraquinone and 1-hydroxyanthraquinone did not inhibit the human intestinal bacteria tested. As for the morphological effect of 1 mg/disk quinizarin, most strains of C. perfringens were damaged and disappeared, indicating that the strong activity of quinizarin was morphologically exhibited against C. perfringens. The inhibitory effect on aflatoxin $B_1$ biotransformation by anthraquinones revealed that anthrarufin ($IC_50,\;11.49\mu\textrm{M}$) anthraflavine ($IC_50,\;26.94\mu\textrm{M}$), and quinizarin ($IC_50,\;4.12\mu\textrm{M}$), were potent inhibitors of aflatoxin ${B_1}-8,9-epoxide$ formation. However, anthraquinone and 1-hydroxyanthraquinone did not inhibit the mouse liver microsomal sample to convert aflatoxin $B_1$ to aflatoxin ${B_1}-8,9-epoxide$. These results indicate that the two hydroxyl groups on A ring of anthraquinones may be essential for inhibiting the formation of aflatoxin ${B_1}-8,9-epoxide$. Accordingly, as naturally occurring inhibitory agents, the C. tora seed-derived materials described could be useful as a preventive agent against diseases caused by harmful intestinal bacteria, such as clostridia, and as an inhibitory agent for the mouse liver microsomal conversion of aflatoxin $B_1$ to aflatoxin ${B_1}-8,9-epoxide$.
When ginsenosides Rbl, Rb2, and Rc were anaerobically incubated with commercial and human intestinal lactic acid bacteria, most commercial lactic acid bacteria did not metabolize these ginsenosides to compound K. However, lactic acid bacteria, B. minimum KK-1, Bifidobacterium cholerium KK-2, and B. cuniculi K-513, isolated from human intestinal microflora transformed these ginsensosides to compound K. When the bacterial mixtures of commercial lactic acid bacteria were incubated with these ginsenosides, these compounds were not transfformed to compound K. However, when Bzfidobacterium KK-1 and KX-2 were miked, these ginsenosides were synergistically transformed to compound K. When water extract of ginseng was incubated with these mixed bifidobacteria, compound K was potently produced. Therefore, it is suggested that, if ginseng with these mixed bifidobacteria is fermented, compound K-enforced ginseng materials could be produced that show cytotoxicity against tumor cell lines.
차세대 염기서열 분석(next generation sequencing, NGS) 기술의 발전으로 16S rRNA의 염기서열 분석이 미생물 군집 분석의 주된 방법으로 사용되고 있다. 인간의 건강과 질병에 관여하는 미생물들을 밝혀내기 위한 인간 미생물군집 프로젝트(human microbiome project, HMP)가 최근에 완료되었다. HMP는 세균에 의해 발생하는 여러 질병들의 특성들을 밝혀내었고, 특히 장에 서식하는 세균들에 대해 많은 연구가 수행되었다. 비록 인간의 장내 세균들에 대한 연구는 잘 수행되어왔지만, 다른 가축의 장내 세균에 대한 연구는 거의 이루어지지 않았다. 본 연구에서는 가축의 분변 미생물 다양성에 관해 조사하였고, 분변미생물 생태연구의 중요성을 제시 할 것이다. 한국에서의 분변 미생물 군집 프로젝트(fecal microbiome project) 시작을 본 연구논문을 통해 보고하고자 한다.
Five hundreds of bifidobacteria were isolated from an healthy Korean and the inhibitory effects of these isolated bacteria on harmful enzymes of human intestinal microflora were examined by cocultivation of the isolated bifidobacteria with E. coli HGU-3 or total human intestinal microflora. In comparison with the results of E. coli or intestinal microflora cultivation, Bifidobacterium breave K-110, B. breve K-111 and B. infantis K-525 effectively inhibited harmful enzymes (${\beta}-glucuronidase$ and tryptophanase) of E. coli and lowered the pH of the culture media. Also they inhibited the harmful enzymes (${\beta}-glucosidase$, ${\beta}-glucuronidase$, tryptophanase and urease) and ammonia production of intestinal microflora, and lowered pH of the culture media by increasing the number of bifidobateria on intestinal microflora. The inhibitory effect of bifidobacteria on Growth of Helicobacter pylori and Rotavirus infection were exammed. Bifidobacterium K-110 and K-111 inhibited effectively them. When these isolated bifidobacteria were administered to mice, the activities of fecal harmful enzymes were inhibited and the AC and ACF formation were suppressed. Among tested bifidobacteria, B. breve K-110 had high inhibitory effect of fecal harmful enzymes and ACF formation.
Following ginsenoside-Rb1-hydrolyzing assay, strictly anaerobic bacteria were isolated from human feces and identified as Prevotella oris. The bacteria hydrolyzed ginsenoside Rb1 and Rd to $20-O-{\beta}-D-glucopyranosyl-20(S)-protopanaxadiol$ (I), ginsenoside Rb2 to $20-O-[{\alpha}-L-arabinofuranosyl (1{\rightarrow}6)-{\beta}-D-glucopyranosyl] - 20(S)-protopanaxadiol$ (ll) and ginsenoside Rc to $20-O-[{\alpha}-L-arabinofuranosyl (1{\rightarrow} 6){\beta}-D-g1ucopyranosyl]-20(S)-protopanaxadiol$ (III) like fecal microflora, but did not attack ginsenoside Re nor Rgl (Protopanaxatriol-type). Pharmacokinetic studies of ginseng saponins was also performed using specific pathogen free rats and demonstrated that the intestinal bacterial metabolites I-111, 20(S)- protopanaxatriol(IV) and 20(S)-protopanaxadiol(V) were absorbed from the intestines to $blood(0.4-5.1\;{\mu}g/ml)$ after oral administration with total saponin(1 g/kg/day).
The growth-inhibiting effects of Pinus densiflpora leaf-derived materials on nine human intestinal bacteria were investigated using the impregnated paper disk method, and their activities were compared with those of 13 commercially available terpenes. The biologically active constituent of the extract of P densiflora leaf was characterized as the monoterpene (1R)-(+)-$\alpha$-pinene by various spectroscopic analyses. Responses varied according to bacterial strain, chemicals, and dose. At 10 mg/disk, limonene and (1R)-(+)-$\alpha$-pinene strongly inhibited the growth of Clostridium perfringens, Staphylococcus aureus, and Escherichia coli, without adverse effects on the growth of five lactic acid-bacteria (Bifidobacterium adolescentis, B. bifidum, B. longum, Lactobacillus acidophilus, and L. casei). Little or no inhibition against seven bacteria was observed with anethole, borneol, camphor, caryophyllene, 1,8-cineole, estragole, linalool, and $\alpha$-terpineol. Structure-activity relationship revealed that (1R)-(+)-$\alpha$-pinene had more growth-inhibiting activity against C. perfringens than (1R)-(+)-$\beta$-, (1S-(-)-$\alpha$-, and (1S-(-)-$\beta$-pinenes. Furthermore, the growth-inhibition against L. casei was much more pronounced in (1R)-(+)-$\beta$- and (In-(-)-$\beta$-pinenes than (1R)-(+)-$\alpha$- and (1S)-(-)-$\alpha$-pinenes. These results indicate that the (+)-$\alpha$ form seems to be required against C. perfringens and $\beta$ form against L. casei for growth-inhibiting activity. Morphologically, most strains of C. perfringens were damaged and disappeared at 5 and 2 mg/disk of (1R)-(+)-$\alpha$-pinene. Morphological study revealed that (1R)-(+)-$\alpha$-pinene had more growth-inhibiting activity against C. perfringens than (1R)-(+)-$\beta$-, (1S)-(-)-$\alpha$-, and (1S)-(-)-$\beta$-pinenes. As naturally occurring growth-inhibiting agents, the Pinus leaf-derived materials described above could be useful preventive agents against diseases caused by harmful intestinal bacteria such as clostridia.
버섯이 유산균 증식 효과를 측정한 결과 대부분의 버섯이 B. breve에 대한 증식 효과와 배양배지의 pH 저하 효과가 우수했으며 식용버섯 중에서는 표고버섯, 운지버섯, 영지버섯, 느타리버섯이 우수했다. 사람 및 흰쥐의 장내 세균을 버섯추출물 함유 배지에서 배양시 배지의 pH 저하 효과가 우수한 표고버섯, 운지버섯, 양송이버섯은 장내유산균을 선택적으로 증식시켰다. B. breve 배양시 버섯추출물의 첨가는 균의 성장을 촉진하였으며 ${\beta}-glucosidase$의 효소 활성을 억제하였으며, 이는 배양배지의 pH 저하 효과와 비례하였다. 표고버섯, 영지버섯, 운지버섯은 사람 및 흰쥐의 장내 세균총 효소인 ${\beta}-glucosidase$ 및 tryptophanase 효소 활성을 억제하였으며 pH 저하 효과와 비례하였다.
김치는 한국인의 대표적인 발효식품으로서 정장 작용이 있다고 여겨져 왔다. 그러나 이를 입증하는 객관적인 자료가 미비한 상태이다. 이에 본 연구에서는 김치의 섭취가 인체의 장내 미생물에 미치는 영향을 조사하였다. 인체 실험대상자는 10명으로 실험기간중의 이들의 식이는 생균제, 항생제, 유산균 발효 제품을 제외한 자유식을 섭취하게 하였다. 실험 기간은 10주로 2주 간격으로 김치 비섭취 및 섭치 기간을 반복했으며 섭취 기간 중에는 매일 200 g의 김치를 섭취하게 하였다. 각 기간별로 분변의 장내 미생물 균총 분포도(Bacteroides, Bifidobacterium, Escherichia coli, Streptococcus, Lactobacillus, Leuconostoc, Staphylococcus, Clostridium perfringens), 변의 pH, 수분 함량 및 $\beta-glucosidase$, $\beta-glucuronidase$ 등의 효소활성도를 조사하였다. 조사 결과 김치의 섭취 기간 중 김치에 존재하는 젖산균인 Lactobacillus와 Leuconostoc의 수가 장내에서 유의적으로 증가하였으며(p<0.05) 그 외 조사된 다른 균총수의 변화는 유의적이지 않았다. 장내 유해효소로 알려진 $\beta-glucosidase$와 $\beta-glucuronidase$의 수준은 김치 섭취시에 유의적으로 감소하였다(p<0.05).
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[게시일 2004년 10월 1일]
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