Objectives: This study was performed to elucidate the effects of Kwibi-tang extract(KB) on dermal fibroblast. Methods: To demonstrate the effects of KB on dermal fibroblast, we used human dermal fibroblast(F6) and UVB light(30 $mJ/cm^2$) was used to damage to dermal fibroblast. we measured the nitrite production, LDH release in UVB-irradiated dermal fibroblast to elucidate the action-mechanism of KB. Also, we evaluated cell proliferation of dermal fibroblast and the amount of increased PICP, TIMP-1 in dermal fibroblast. Results: 1. KB decreased the cell proliferation of F6 dermal fibroblast in concentration of 50 ${\mu}g/ml$. 2. KB decreased the synthesis of PICP in concentration of 50 ${\mu}g/ml$. 3. KB decreased the synthesis of TIMP-1 in concentration of 50 ${\mu}g/ml$. 4. KB have no effect on the damage in UVB-irradiated F6 dermal fibroblast. Conclusions: From the results, we concluded KB decreases the cell proliferation and collagen synthesis in dermal fibroblast. So we suggest that KB has the anti-hyperplasy of dermal fibroblast.
Purpose: Current common method of cytotoxicity evaluation for elastomeric impression materials use animal based cell lines, which the clinical relevance has been often questioned. Hence, the purpose of this study was to examine the difference in results with both human based and animal based fibroblast cell line. Materials and Methods: Three types of fibroblast cells were used in this study; conventional mouse fibroblasts of L929, human gingival fibroblasts (HGF-1), and immortalized human oral fibrobalsts (hTERT-hNOF). Test on extract and test by direct contact using different commercially available elastomeric impression materials were carried out according to the international standards. Result: There was significant difference in cell viability between types of fibroblasts cell used, where HGF-1 showed highest cell viability and L929 the lowest. Conclusion: Within the limitation of this study, careful consideration must be given when selecting the cells and interpreting the results for cytotoxicity evaluation of elastomeric impression materials, where use of human based cell lines such as hTERT-hNOF would be appropriate for both ease of cytotoxicity test and clinical relevance.
In order to investigate the biocompatibility of silver-palladium alloys, gingival fibroblast was obtained from a healthy human gingival and cultured in MEM medium with the addition of silverpalladium alloys. Four different mixture of silver-palladium alloys comprising of Ag-Pd-Au, Ag-Pd-In and Ag-Sn were tested. Results were assessed by calculating the cell multiplication rate per millimeter of medium and morphological changes in cells were also observed and noted.The obtained results were as follows; 1. Ag-Pd-Au alloy was indicated to be most biocompatible with gingival fibroblast. Also there was a decrease in cytotoxicity of the alloy as the concentration of gold increased. 2. Ag-Pd alloy showed a decrease in cell multiplication rate as compared to Ag-Pd~Au alloy. 3. Silver-palladium alloy supplemented with Indium increased the cell multiplication rate. 4. Among the alloys tested, Ag-Sn alloy was indicated to be the most cytotoxic and the least biocompatible with human gingival fibroblast.
녹차분말을 포함하는 차가버섯 조성물의 수용성 추출물에 의한 인체 위암 세포 AGS 및 대장암 세포 HCT-15, 그리고 마우스 정상세포 NIH3T3 fibroblast의 세포생육에 미치는 효과를 세포 수 측정방법과 MTT assay 방법으로 측정하였다. 차가버섯 조성물의 수용성 추출물은 인체 대장암 세포주 HCT-15와 위암 세포주 AGS의 생육을 억제하였다. 그러나 동일한 실험조건 하에서 마우스 정상 세포주 NIH3T3은 80% 이상의 생존율을 나타내었다. 본 연구의 결과로 차가버섯 조성물의 수용성 추출물은 정상세포에는 독성을 나타내지 않으면서 위암 및 대장암 세포에는 높은 생육억제 효과를 나타냄을 알 수 있었다.
Allergic inflammation is thought to be a Th2 cell-dominant immune response during which tissue-resident fibroblasts produce chemokines which contribute to the recruitment of migratory leukocytes to sites of tissue injury. Thymus and activation-regulated chemokine (TARC; CCL17) is a potent member of the CC chemokine family and a selective chemoattractant for Th2 cells. In order to study the regulatory profiles of TARC production by $TNF-{\alpha}$, $IFN-{\gamma}$, and Il-4 in human normal skin fibroblast, CCD-986sk cell line was used. The expression of TARC protein was measured using ELISA, and mRNA level was detected by RT-PCR. The combination of $TNF-{\alpha}$ and IL-4 induced a time-and dose-dependent synergistic increase in the expression of TARC at both protein and mRNA levels in the cultured human skin fibroblasts. Exposure of the cells to single cytokine had no effect on TARC expression. The high concentration (100 ng/ml) and long incubation time (72 h) of $IFN-{\gamma}$ further enhanced the TARC production induced by $TNF-{\alpha}$/lL-4 in the skin fibroblast. This synergistic effect of Th1 and Th2 type cytokines on TARC production by skin fibroblasts may contribute to the inflammatory cell infiltration and tissue damage with allergic inflammation.
The selective migration, attachment and proliferation of periodontal ligament cells are the desired goal of periodontal regeneration therapy. Fibronectin is well known for an attachment protein for dentin surface. Also, Fibroblast growth factor (FGF) is well known to enhance the periodontal regeneration. The purpose of this study was to evaluation the effect of fibronection and FGF on the attachment rate and the cellular activity. Human gingival fibroblast and periodontal ligament cells were cultured from the teeth extracted for non-periodontal reson. Cultured human gingival fibroblast and periodontal ligament cells in vitro were treated with fibronectin and FGF a various dosage and culture times. Cellular activity was examined by MTT assay. The results of this study was demonstrated that cell attachment rate of experimental group was under the control value at 1st, 2nd, 3rd incubation day. But, at 3rd incubation day, attchment value tended to return to the control value. In case of fibronectin alone application, cellular activity was decreased than that of control at 1st, 2nd incubation day. But 3rd day, cellular activity was returned to the control value. The activity of gingival fibroblast in FGF alone application was decreased thatn that of control at each incubation day. But activity of periodontal cell group was increased cell activities at 2nd, 3rd day. Additionally cellular activity of fibronectin & FGF combined application on gingival fibroblast group was similar to control value at incubation day. But activity of periodontal ligament cell group was increased at 2nd, 3rd day compared with control group.This study demonstrated that combined application of fibronectin & FGF induced the selective chemotaxis for periodontal ligament cell in vitro.
Human gingival fibroblasts have proven to useful as a species specific cell culture system in various system on periodontal disease and regeneration. However, their use is limited, since they are hard to obtain and lifespan is short due to replicative senescence. To overcome these disadvantages, we transfected primary human gingival fibroblasts by the E6 and E7 genes of the Human papilloma virus(HPV) 16. The full length of HPV 16 E6 and E7 was cloned from the pBR322 into BamHl and Sal I of a pBabe vector including hygromycin B resistance. Before pBabeE6/E7 plasmid transfection, peak 8 GFP including G418 resistance was transfected into primary GF to check the transfection efficency. PBabe E6/E7 plasmid was transfected using Lipofectamine plus following manufacter's instruction into primary normal human gingival fibroblasts in 60mm dishes with FBS free DMEM. After 2 days of transfection, the cells were treated with hygromycin for 2 weeks until the transfected control cells died. The resulting hygromycin resistant colonies were pooled, and clonned, and sucessful transfection was established for immortalized gingival fibroblast cell lines. Immoralized GF cells showed stellate shape, that is similar to that of orange grains, and more rapid growth and higher proliferation than that of primary gingival fibroblasts. This cell lines overcame crisis and could be cultured over 30 subcultured, could be use for three dimentional culture, epithelial-mesenchymal interaction study.
Radiation sensitivity data was generated for two human cancer cell lines(KB, RPMI 2650) and human primary gingival fibroblast was tested three times using a viable cell number counting with a hemocytometer, MTT(3-[4,5-Dimethylthiazol2-yl]-2,5-diphenyl tetrazolium bromide) assay, and LDH(Lactate dehydrogenase) assay. Single irradiation of 2, 4, 6, 10, 15, 20Gy were applied to the tumor cell lines and the primary cultured gingival fibroblast The two fractions of 4Gy and 10Gy were seperated with a 4 hour time interval. The irradiation was done with 241.5cGy/min dose rate using /sup 137/Cs MK cell irradiator at room temperature. The obtained results were as followed : 1. There was significantly different viable cell numbers as the amount of radiation dose on the tested cells were cell number counted with a hemocytometer. In fractions, there were more viable cells remaining. 2. Phase-contrast microscopically, radiation-induced morphologic changes were pronounced on the tumor cells, however, almost no differences on the gingival fibroblast. 3. There was significantly different absorbance at 2Gy on RPMI 2600, 4Gy on KB and GF in MTT assay. In fractions, the absorbance was significantly higher on KB. 4. The level of extracellular LDH activity in the experimental group was significantly higher in the 2-4Gy than the control group. 5. The total level of extracellular and intracellular LDH activity was decreased as increased amounts of radiation dose was applied.
Objectives : In this study, we investigated the effect of Fructus Ligustri Lucidi $H_2O$ fraction (FLLW) on cell proliferation, and the phosphorylation of ERKs and Akt in human dermal fibroblast neonatal (HDFn). Methods : After treatment of HDFn with FLLW, MTT assay was performed to quantitatively determine cellular viability. The ERK and Akt pathways were analyzed in vitro by Western blot in a HDFn. HDFn proliferation after FLLW and minoxidil treatment in the absence or presence of PD98059, a MEK inhibitor, LY294002, and a PI3K inhibitor, was examined by Western blot or MTT assay. Results : FLLW increased cell proliferation in a dose-dependent manner and minoxidil used as positive control also induced cell proliferation in HDFn. FLLW increased the phosphorylation of ERK and Akt. In addition, minoxidil, too, induced the phosphorylation of ERK and Akt in HDFn. PD98059 and LY294002 significantly attenuated FLLW-inducible p-ERK and p-Akt expression and proliferation in cultured HDFn. Conclusions : Our results suggest that FLLW stimulates the growth of fibroblast cells through ERK and Akt pathways. Therefore, FLLW is a potential agent for the inducer of fibroblast growth.
The purpose of this study was to determine the role of substituted groups in phenolic compounds to develop an anticancer agent having strong cytotoxicity against cancer cells but weak against normal cells. The phenolic compounds used in this study were gallic acid and ferulic acid with hydroxyl and carboxyl groups, syringic acid with hydroxyl, carboxyl and methoxy groups, and pyre-gallol with hydroxyl groups. Cytotoxicities of these compounds were evaluated by MTT assay for cell viability and XTT assay for cell adhesion activity in normal human skin fibroblast (Detroit 551) and human skin melanoma (SK-MEL-3) cells. Syringic acid, gallic acid and ferulic acid decreased the cell viability and cell adhesion activity in SK-MEL-3 cells but not in Detroit 551 cells while pyrogallol decreased in both cells. The susceptibility of cell viability based on the $IC_{50}$ values of MTT assay in Detroit 551 cells was in the following order: pyrogallol > gallic acid > ferulic acid > syringic acid, while it was in SK-MEL-3 cells: Syringic acid > progallol > ferulic acid > gallic acid. These results suggest that carboxyl and methoxy groups of these compounds play an important role in selectivity of cytotoxicity in normal and cancer cells.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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