• 한국수정란이식학회지
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• 제13권2호
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• pp.159-172
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• 1998

사람 성장호르몬 수용체(hGHR) cDNA는 PCR방법에 의하여 fagment로서 보고되어진 바 있으나, liver cDNA로 부터 전장을 cloning한 보고는 없는 실정으로 본 연구에서는 기능을 가진 약 4.6kbp의 cDNA hGHR을 cloning 하는데 성공하였다. 먼저 cloning하기 위하여 human liver mRNA와 human breast cancer tissue로부터 회수한 mRNA를 RT-PCR방법에 의하여 human cDNA library와 cloning에 필요한 probe를 제작하였다. human library mRNA는 GT-PCR방법에 의하여 증폭하여 증폭되어진 산물은 λZAP Vector를 이용하여 cDNA library를 구축하였고,screeing을 위하여 임 보고 되어진 hGHR fragment native sequence를 기초로 N-terminal부분의 primer를 설계하여 950bp의 probe를 얻는데 성공하였다. 이 probe를 이용하여 준비된 human liver cDNA library로부터 2.5$\times$10 6개의 plaque로부터 6개의 positive clone을 획득하였고, 이들중 poly Asignal인 "AATAAA"를 포함하고 있는 가장 긴 약 3.8kbp의 clone을 sequencing한 결과 open reading frame을 포함하고 있었으나, 5'부분의 결손되어 있었다. 그리하여 이 부분은 human breast cancer tissue로 부터 회수한 mRNA를 RT-PCR에 의하여 증폭하였고, sequencing결과 이미 보고되어진 native hGHR와 비교한 결과 하나의 nucleotide가 silent mutation으로 판명되었다.한편 human liver cDNA library로부터 cloning한 3.8cp의 positive clone의 5'end의 결손된 부분에 silent mutation된 PCR 산물을 연결함으로써 native hGHR와 유사한 cDNA hGHR subcloning에 성공하였다. 이러한 cDNA hGHR의 clone이 function을 가지고 있는지를 검토하기 위하여 eukaryotic 발현 vector인 pCXN2에 의거 ligation한 후 chinese hamster ovary cell[CHO-KI]에 transfect를 실시하였다. Dexamethasone은 첨가하지 않고 hGH만의 존재하에서 이들 cell을 배양시키고 cell menbrane에서 발현 여부를 판정키 위하여 hGHR monocloual antibody를 사용하여 flow cytometery해석을 실시하는 한편 125I-hGH binding assay에 의하여 hGH binding activity를 측정하였다. 최종적으로 GH signal transduction의 target genedf으로 알려져 있는 serine protease inhibitor 2.1(Spi 2.1) gene의 promotor activity를 검토한 결과 hGHR을 transfect한 CHO Cell에 있어서 hGH의 농도에 의존적으로 증가되었다. 따라서 본 실험에서 cloning한 cDNA hGHR는 native hGHR와 같은 기능을 가지는 것으로 판명되었다.것으로 판명되었다.

• BMB Reports
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• 제32권5호
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• pp.502-505
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• 1999

cDNA fragments of ovine liver pyridoxal kinase were amplified by PCR using degenerate oligonucleotide primers derived from partial amino acids sequences of the enzyme. Using PCR products as probes, several overlapping cDNA clones were isolated independently from an ovine liver and a human brain cDNA library. The largest cDNA clone for each was selected for sequence analysis. The ovine liver cDNA encodes a polypeptide of 297 amino acid residues with Mr of 32,925, whereas the human clone is comprised of an open reading frame encoding 312 amino acid residues with Mr of 35,102. The deduced sequence of the human brain enzyme is completely identical to that of human testes cDNA recently reported (Hanna et al., 1997). The ovine enzymes have approximately 77% sequence identity with the human enzyme although the two sequences are completely different in the N-terminus comprising 32 residues. This result suggests that pyridoxal kinase is highly homologous in mammalian species.

• BMB Reports
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• 제28권5호
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• pp.402-407
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• 1995

Single-run Partial cDNA sequencing was conducted on 1,592 randomly selected human fetal liver cDNA clones of Korean origin to isolate novel genes related to liver functions. Each partial cDNA sequence determined was analyzed by comparing it with the databases. GenBank, Protein Information Resource (PIR) and SWISS-PROT Protein Sequence Data Bank. From a set of 1.592 cDNA clones reported here, 1,433 (90.0% of the total) were informative cDNA sequences. The other 159 clones were identified as DNA sequences which had originated from the cloning vector. Among 1,433 informative partial cDNA sequences, 851 (59.3%) clones were revealed to be identical to known human genes. These known genes have been classified into 225 different kinds of genes. In addition, 340 clones (23.7%) showed various degrees of homology to previously known human genes. Ninety four (6.6%) clones contained various repeated sequences. Twenty four (1.7%) partial cDNA sequences were found to have considerable homology to known genes from evolutionarily distant organism such as yeast, rice, Arabidopsis, mouse and rat, based on database matches, whereas 124 (8.7%) had no Significant matches. Human homologues to functionally characterized genes from different organisms could be classified as candidates for novel human genes of similar functions. Information from the partial cDNA sequences in this study may facilitate the analysis of genes expressed in human fetal liver.

• Archives of Pharmacal Research
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• 제20권5호
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• pp.459-464
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• 1997

The human liver cDNA clone UDPGTh2, encoding a liver UDP-glucuronosyltransferase (UDPGT) was isolated from a .gamma. gt 11 cDNA library by hybridization to mouse transferase cDNA clone, UDPGTm1. UDPGTh2 encoded a 529 amino acid protein with an amino terminus membrane-insertion signal peptide and a carboxyl terminus membrane-spanning region. There were three potential asparagine-linked glycosylation sites at residues 67, 68, and 315. In order to obtain UDPGTh2 protein encoded from cloned human liver UDP-glucuronosyltransferase cDNA, the clone was inserted into the pSVL vector (pUDPGTh2) and expressed in COS 1 cells. The presence of a transferase with Mr-52,000 in transfected cells cultured in the presence of $[^{35}S]$ methionine was shown by immunocomplexed products with goat antimouse transferase IgG and protein A-Sepharose and analysis by sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis and autoradiography. The expressed UDPGT was a glycoprotein as indicated by electrophoretic mobility shift in Mr-3,000-4,000 when expressed in the presence of tunicamycin. The extent of glycosylation was difficult to assess, although one could assume that glycosyl structures incorporated at the level of endoplasmic reticulum were always the core oligosaccharides. Thus, it is likely that at least two moieties inserted can account for the shift of Mr-3,000-4,000. This study demonstrates the cDNA and deduced amino acid sequence of human liver UDP-glucuronosyltransferase cDNA, UDPGTh2.

• Animal cells and systems
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• 제5권3호
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• pp.231-236
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• 2001

SINE-R retroposons have been derived from human endogenous retrovirus HERV-K family and found to be hominoid specific. Both SINE-R retroposons and HERV-K family are potentially capable of affecting the expression of closely located genes. From cDNA library of human fetal brain, we identified seven SINE-R retroposons and compared them with sequences derived from GenBank database. The SINE-R retroposons from human feta1 brain showed 85∼97% sequence similarities with the human-specific retroposon SINE-R.C2. They also showed 88∼96% sequence similarities with the sequence of the schizo-cDNA clone that derived from postmortem frontal cortex tissue of a schizophrenic patient. Phylogenetic analysis using the neiqhbor-joining method revealed that the seven new SINE-R retroposons from cDNA library of the human feta1 brain have proliferated independently during human evolution. The data indicate that such SINE-R retroposons are expressed in human fetal brain and deserve further investigation as potential leads to understanding of neuropsychiatric diseases.

• 한국동물학회지
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• 제39권3호
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• pp.248-256
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• 1996

본 연구의 목적은 인간의 Poly(ADP-ribose) synthetase (PARS)의 cDNA를 클로닝하여 발현시키기 위해 수행하였다. 먼저, 인간의 PARS cDNA 전체를 포함한 pPARS3.1을 pGEM-7Zf(+) 등의 발현 벡터 클로닝하였다. 이 결과로 생성된 재조합 플라스미드 pPARS6.1이 인간의 PARS cDNA 전체를 포함하고, 올바른 방향으로 삽입되었는지를 확인하기 위해 제한효소 지도를 작성하였고, random primed DNA probe을 이용한 Southern blot 분석에 의해서 PARS가 클로닝되었다는 것을 확인하였다. 또한, 염기서열 분석 결과, 단백질 합성이 시작되는 유전 암호가 정확한 순서로 위치하고 있음을 확인하였다. 재조합된 pPARS6.1의 발현을 위해 배양시 0.4 mM IPTG로 처리하여 만들어진 인간의 PARS 단백질이 10% SDS-PAGE에서 120 kDa 위치에 이동하였다는 것을 nick-translated된 DNA를 probe로 이용하여 확인하였고, Southwestern blot 실험 결과 120 kDa과 98kDa에 위치하는 단백질이 DNA와 결합함을 알 수 있었다.

• 한국동물학회지
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• 제11권3호
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• pp.83-84
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• 1968

DNA-agar 법에 의한 hybridization에 의하여 사람의 DNA 와 박테리아의 DNA 사이의 유사점을 찾아보고자 시도하였다. HeLa DNA 를 agar에 교착시키고, Xanthomonas pelargonii의 $^14C-DNA$ 를 절단하여 용액상태로 이용하였다. 사람의 DNA와 박테리아의 DNA 사이에는 그 유사성을 발견할 수 없었다. 만일 두 DNA 사이에 유사성이 존재한다고 하더라도 인간의 染色體의 0.01% 미만 밖에 안될 것으로 본다. 이것은 한 cistron 이 포함되는 염기쌍의 수를 1,000이라 가정한다면, $2\times10^5$의 염기쌍, 즉 200의 박테리아 cistron이 사람의 DNA에 보존되어 있는 셈이 된다.

• Asian-Australasian Journal of Animal Sciences
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• 제18권4호
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• pp.483-489
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• 2005

To understand the molecular mechanisms that regulate intramuscular fat deposition and its release, cDNA clones expressed in adipose tissues of Korean cattle were identified by differential screening from adipose tissue cDNA library. By partial nucleotide sequencing of 486 clones and a search for sequence similarity in NCBI nucleotide databases, 245 clones revealed unique clones. By a functional grouping of the clones, 14% of the clones were categorized to metabolism and enzyme-related group (stearoyl CoA desaturase, lactate dehydrogenase, fatty acid synthase, ATP citrate lyase, lipoprotein lipase, acetyl CoA synthetase, etc), and 6% to signal transduction/cell cycle-related group (C/EBP, cAMP-regulated phosphoprotein, calmodulin, cyclin G1, cyclin H, etc), and 4% to cytoskeleton and extracellular matrix components (vimentin, ankyrin 2, gelosin, syntenin, talin, prefoldin 5). The obtained 245 clones will be useful to study lipid metabolism and signal transduction pathway in adipose tissues and to study obesity in human. Some clones were subjected to full-sequencing containing open reading frame. The cDNA clone of bovine homolog of human prefoldin 5 gene had a total length of 959 nucleotides coding for 139 amino acids. Comparison of the deduced amino acid sequences of bovine prefoldin 5 with those of human and mouse showed over 95% identity. The cDNA clone of bovine homolog of human ubiquitin-like/S30 ribosomal fusion protein gene had a total length of 484 nucleotides coding for 133 amino acids. Comparison of the deduced amino acid sequences of bovine ubiquitin-like/S30 ribosomal fusion protein gene with those of human, rat and mouse showed over 97% identity. The cDNA clone of bovine homolog of human proteolipid protein 2 mRNA had a total length of 928 nucleotides coding for 152 amino acids. Comparison of the deduced amino acid sequences of bovine proteolipid protein 2 with those of human and mouse showed 87.5% similarity. The cDNA clone of bovine homolog of rat thymosin beta 4 had a total length of 602 nucleotides coding for 44 amino acids. Comparison of the deduced amino acid sequences of bovine thymosin beta 4 gene with those of human, mouse and rat showed 93.1% similarity. The cDNA clone of bovine homolog of human myotrophin mRNA had a total length of 790 nucleotides coding for 118 amino acids. Comparison of the deduced amino acid sequences of bovine myotrophin gene with those of human, mouse and rat showed 83.9% similarity. The functional role of these clones in adipose tissues needs to be established.

• 한국발생생물학회지:발생과생식
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• 제1권1호
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• pp.37-43
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• 1997

DNA 회복효소인 MPG는 DNA의 퓨린기에 결합되어 있는 메틸기 등 이물질을 염기와 함께 제거하는 작용을 한다. 본 연구에서는 노던 블롯팅 방법을 이용하여 Balb/c mice의 각 조직별로 발생단계별 mRNA 발현 정도를 조사하였다. 뇌와 콩팥조직에서는 출생직후에 발현이 가장 활발하였으며, 성체시기까지 비교적 높은 활성도가 유지되었다. 위장 조직에서는 출생직후에서 일주일 후까지는 명확히 관찰되었으나, 그 이후는 발현이 약화되었다. 간장과 폐조직에서는 그 발현 정도가 매우 약했으며, 특히, 간조직의 경우 출생 직후보다 성체에서 그 발현이 현저히 감소되었다. 이들 조직에서의 활성도는 출생후 24시간 이내에서 1주일후까지 상대적으로 높게 유지되다가 점차 감소되었다. 즉, 수유기(출생직후부터 1주일후)에는 그 활성도가 성체시기(4주에서 6개월)보다 높게 유지되었다. 이러한 결과들로 미루어 보아 늙은 생쥐가 젊고 어린 생쥐보다 alkylating mutagen들에 노출되었을대 암에 걸릴 위험성이 높다고 생각된다.

• 미생물학회지
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• 제28권2호
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• pp.91-97
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• 1990

생체내의 유해산소를 제거하는 superoxide dismutase (superoxide : superoxide oxidoreductase E.C.1.15.1.1) 중 세포질내에서 그 활성을 지니는 인체의 세포질 superoxide dismuta~ie (SODl) 유전자를 사람의 간 cDNA library로부터 동위원소로 표지된 oligonucleotide probe를 이용, in situ plaque hybridization 방법으로 선별 분리하여 내장균 벡터로 클로닝하였다. 이 클론은 SOD1 유전자의 5"L"TR과 3’UTR을 포함한 1.6 kb 정도의 cDNA였다 SOD1 구조유전자만을 선택적으로 분리하기 위해서 ATG를 포함하는 sense strand primer와 3’UTR 부위의 antisense strand primer를 이용하여 중합효소연쇄반응(Polymerase Chain Reaction) 방법을 써서 SOD1 구조유전자 부위만을 선택적으로 증폭시켰다. Taq DNA polymerase에 의해 증폭된 DNA를 벡터 pUCl9의 multiple cloning site (MCS) 내의 Hinc II 위치에 넣였으며 이 insert DNA를 M13 mp19으로 옮겨 dideoxy chain termination 방법으로 sequenase를 사용하여 염기서열을 결정하였다. 클론닝된 cDNA는 153개의 아미노산을 포함하고 있는 하나의 open reading frame (ORF)을 가셨다. 중합효소연쇄반응에 의해 이때 증폭된 SOD1 구조유전자를 $\lambda P_{L}$ 프로모터를 포함하고 있는 발현 벡터 pUPL에 옮긴 후 대장균에서 대량으로 발현시켰다. 이때 발현된 단백질 SOD1은 고유의 효소활성을 가지고 있었다.