The effect of Si supplied during plant cultivation on tolerance to high temperature stress in Euphorbia pulcherrima Willd. 'Ichiban' was investigated. Rooted cuttings were transplanted into 10-cm pots and a complete nutrient solution, containing 0 or $50mg{\cdot}L^{-1}$ Si as either $K_2SiO_3$, $Na_2SiO_3$, or $CaSiO_3$, was supplied through subirrigation or weekly foliar applications. After two months of cultivation, plants were placed in an environment-controlled chamber and subjected to $35{\pm}1^{\circ}C$ (high temperature) conditions for 18 days. Enhanced specific activities of enzymatic antioxidants (APX) and suppressed specific activities of non-enzymatic antioxidants (ELP) were observed in the high temperature-stressed plants with Si application. The Fv/Fm (maximum quantum yield of photosystem II), photosynthetic rate, and Si contents in the shoot increased in the treatments of $K_2SiO_3$ and $Na_2SiO_3$ supplied through subirrigation. The Si-treated plants had more tolerance of high temperature stress than the control plants. Of the Si sources and application methods tested, $K_2SiO_3$ and $Na_2SiO_3$ supplied through subirrigation were found to be the most effective in enhancing tolerance to high temperature stress.
Three hundred gram of Korean ginseng root was extracted with 95% ethanol on a boiling water bath for about 300 hr. Evaporation of alcohol yieled 50.2g of dark brown residue which was used by dissolving 4 mg of the residue in 1 ml of physiological saline. The ginseng group and the saline group received each day 0.5 ml per 100 g body weight of ginseng extract and physiological saline, respectively. Both the ginseng and saline group with stress were exposed to positive radial acceleration (1∼29g), cold (5$^{\circ}C$, 0$^{\circ}C$ &-10$^{\circ}C$) and heat (35$^{\circ}C$) environment, and surgical stress. After termination of the last stress, the tolerance, body weight, visceral organ weight, basal metabolism rate, rectal temperature, the number of erythrocyte and leucocyte, hemoglobin level, hematocrit ratio, total serum protein content and it's fraction and the content of adrenal ascorbic acid in the experimental animal exposed to stress were measured and at the corresponding periods, the same measurements were also carried out with the ginseng and the saline groups without stress exposure (serving as control). Results obtained were as follows. 1. Administration of ginseng does depressed the decrease of the tolerance, body weight, visceral organ weight, basal metabolism rate, the number of erythrocyte, hemoglobin value, hematocrit ratio and the A/G ratio in the mice and rats exposed to various stress. 2. The change of the rectal temperature, eosinophile counts, total serum protein content and the content of adrenal ascorbic acid of ginseng group that exposured to various stress facilitates the reaction to, and accelerates the recovery from the stress. 3. Even after hypophysectomy which served the link between the central and the peripheral portion of the stress mechanism, the adrenal ascorbic acid content of ginseng group decreased significantly more than that of the saline group 30 min. after administration of ACTH, while the value approached the normal level significantly closer in the ginseng group than in the saline group 1 and 2 hr after ACTH administration. Judging from the above results, it is concluded that administration of ginseng extract tolerated the experimental animals under the environment of stressfu1 stmuli, although the ginseng has no significant influence upon the stress mechanism in the absence of stressful stimuli. The site of action of the ginseng appears to be in the peripheral portion of the stress mechanism.
We have explored the importance of two ATP binding domains of Hsp104 protein in protection of yeast cells from cadmium exposure. In the previous study we have discovered that the presence of two ATP binding sites was essential in providing heat sh ock protection as well as rescuing cells from oxidative stress. In this paper we first report wild type cell with functional hsp104 gene is more resistant to cadmium stress than hsp104-deleted mutant cell, judging from decrease in survival rates as a result of cadmium exposure. In order to demonstrate functional role of two ATP binding sites in cadmium defense, we have transformed both wild type (SP1) and hyperactivated ras mutant (IR2.5) strains with several plasmids differing in the presence of ATP binding sites. When an extra copy of functional hsp104 gene with both ATP binding sites was overexpressed with GPD-promoter, cells showed increased survival rate against cadmium stress than mutants with ATP binding sites changed. The degree of protection in the presence of two ATP binding sites was similarly observed in ira2-deleted hyperactivated ras mutant, which was more sensitive to oxidative stress than wild type cell. We have concluded that the greater sensitivity to cadmium stress in the absence of two ATP binding sites is attributed to the higher concentration of reactive oxygen species (ROS) produced by cadmium exposure based on the fluorescence tests. These findings, taken all together, imply that the mechanism by which cadmium put forth toxic effects may be closely associated with the oxidative stress, which is regulated independently of the Ras-cAMP pathway. Our study provides a better understanding of cadmium defense itself and cross-talks between oxidative stress and metal stress, which can be applied to control human diseases due to similar toxic environments.
To study the functioning of HSP70 in Escherichia coli, we selected NtHSP70-2 (AY372070) from among three genomic clones isolated in Nicotiana tabacum. Recombinant NtHSP70-2, containing a hexahistidine tag at the amino-terminus, was constructed, expressed in E. coli, and purified by $Ni^{2+}$ affinity chromatography and Q Sepharose Fast Flow anion exchange chromatography. The expressed fusion protein, $H_6NtHSP70$-2 (hexahistidine-tagged Nicotiana tabacum heat shock protein 70-2), maintained the stability of E. coli proteins up to 90$^{\circ}C$. Measuring the light scattering of luciferase (luc) revealed that NtHSP70-2 prevents the aggregation of luc without ATP during high-temperature stress. In a functional bioassay (1 h at 50$^{\circ}C$) for recombinant $H_6NtHSP70$-2, E. coli cells overexpressing $H_6NtHSP70$-2 survived about seven times longer than those lacking $H_6NtHSP70$-2. After 2 h at 50$^{\circ}C$, only the E. coli overexpressing $H_6NtHSP70$-2 survived under such conditions. Our NtHSP70-2 bioassays, as well as in vitro studies, strongly suggest that HSP70 confers thermo-tolerance to E. coli.
Journal of The Korean Society of Grassland and Forage Science
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v.36
no.3
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pp.243-247
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2016
Arsenic (As) is a toxic element that easily taken up by plants root. Several toxic forms of As disrupt plant metabolism by a series of cellular alterations. In this study, we applied annealing control primer (ACP)-based reverse transcriptase PCR (polymerase chain reaction) technique to identify differentially expressed genes (DEGs) in alfalfa roots in response to As stress. Two-week-old alfalfa seedlings were exposed to As treatment for 6 hours. DEGs were screened from As treated samples using the ACP-based technique. A total of six DEGs including heat shock protein, HSP 23, plastocyanin-like domain protein162, thioredoxin H-type 1 protein, protein MKS1, and NAD(P)H dehydrogenase B2 were identified in alfalfa roots under As stress. These genes have putative functions in abiotic stress homeostasis, antioxidant activity, and plant defense. These identified genes would be useful to increase As tolerance in alfalfa plants.
Heat shock protein 70 (HSP70) is known as molecular chaperone, the fundamental protein participating in various processes, from nascent protein synthesis to protection of proteins during abiotic stresses and developmental programs. However, their biological functions in plants are not yet well known. Here, NtHSP70-1 (AY372069), HSP70 of Nicotiana tabacum induced by heat stress was investigated. To analyze the protective role of NtHSP70-1, transgenic tobacco plants, which constitutively overexpressed NtHSP70-1 as well as contained either the vector alone or having NtHSP70-1 in the antisense orientation, were constructed. The altered NtHSP70-1 levels in plants were confirmed by western blotting and transgenic sense lines exhibited tolerance to heat stress. Seedlings with the constitutively expressed NtHSP70-1 grew as green or healthy plants after heat stress. In contrast, transgenic vector or antisense lines exhibited yellowing of leaves or some delay in growth, which finally led to death. Evaluation of chlorophyll contents of heat-shocked transgenic tobacco seedlings indicated that NtHSP70-1 contributes to thermotolerance by preventing chlorophyll synthesis in plants.
This experiment was conducted to evaluate the effects of the broiler's genotype ($G_t$) and ambient temperature ($T_a$) on performance and core body temperature ($T_core$) of broiler chicks. A factorial arrangement of two $G_t$ (Hubbard and ISA J57 chicks) and two $T_a$ (moderate, $23{\pm}0.5^{\circ}C$ and hot, $33{\pm}0.5^{\circ}C$) were used in this study. Performance data (body weight gain, feed intake and feed:gain ratio) were determined weekly for six weeks. Chicks' $T_core$ was measured using a biotelemetric system between Weeks five and six. Results showed that body weight gain and feed intake were significantly high, and feed:gain ratio was significantly low for Hubbard chicks compared to those of ISA J57 chicks. High $T_a$ significantly reduced weight gain and feed intake. Furthermore, the reduction in body weight gain and feed intake under the hot $T_a$ was more pronounced for Hubbard chicks than those of the ISA J57 chicks resulting in significant $G_t$ by $T_a$ interaction. Chicks grown under moderate $T_a$ had significantly lower $T_core$ than those grown under hot $T_a$. The $T_core$ of the Hubbard chicks was significantly lower than that of the ISA J57 at the moderate $T_a$ while under the hot $T_a$, the magnitude of the change in $T_core$ was more pronounced in Hubbard chicks than that of ISA J57; this resulted in a significant $G_t$ by $T_a$ interaction. The results of this study indicate that chicks with higher potential for growth under thermo-neutral temperature are more susceptible to heat stress than chicks with lower potential for growth. This maybe due, at least in part, to their lower body $T_core$ under moderate temperature and to the lesser ability of these fast growing chicks to regulate their $T_core$ when exposed to heat stress, as was clearly shown on these birds' performance.
Alkyl hydroperoxide reductase subunit C from Pseudomonas aeruginosa PAO1 (PaAhpC) is a member of the 2-Cys peroxiredoxin family. Here, we examined the peroxidase and molecular chaperone functions of PaAhpC using a site-directed mutagenesis approach by substitution of Ser and Thr residues with Cys at positions 78 and 105 located between two catalytic cysteines. Substitution of Ser with Cys at position 78 enhanced the chaperone activity of the mutant (S78C-PaAhpC) by approximately 9-fold compared with that of the wild-type protein (WT-PaAhpC). This increased activity may have been associated with the proportionate increase in the high-molecular-weight (HMW) fraction and enhanced hydrophobicity of S78C-PaAhpC. Homology modeling revealed that mutation of $Ser^{78}$ to $Cys^{78}$ resulted in a more compact decameric structure than that observed in WT-PaAhpC and decreased the atomic distance between the two neighboring sulfur atoms of $Cys^{78}$ in the dimer-dimer interface of S78C-PaAhpC, which could be responsible for the enhanced hydrophobic interaction at the dimer-dimer interface. Furthermore, complementation assays showed that S78C-PaAhpC exhibited greatly improved the heat tolerance, resulting in enhanced1 survival under thermal stress. Thus, addition of Cys at position 78 in PaAhpC modulated the functional shifting of this protein from a peroxidase to a chaperone.
Journal of The Korean Society of Grassland and Forage Science
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v.36
no.3
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pp.237-242
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2016
Copper (Cu) is a necessary microelement for plants. However, high concentrations of Cu are toxic to plants that change the regulation of several stress-induced proteins. In this study, an annealing control primer (ACP) based approach was used to identify differentially expressed Cu-induced genes in alfalfa leaves. Two-week-old alfalfa plants (Medicago sativa L.) were exposed to Cu for 6 h. Total RNAs were isolated from treated and control leaves followed by ACP-based PCR technique. Using GeneFishing ACPs, we obtained several genes those expression levels were induced by Cu. Finally, we identified several genes including UDP-glucuronic acid decarboxylase, transmembrane protein, small heat shock protein, C-type cytochrome biogenesis protein, mitochondrial 2-oxoglutarate, and trans-2,3-enoyl-CoA reductase in alfalfa leaves. These identified genes have putative functions in cellular processes such as cell wall structural rearrangements, transduction, stress tolerance, heme transport, carbon and nitrogen assimilation, and lipid biosynthesis. Response of Cu-induced genes and their identification in alfalfa would be useful for molecular breeding to improve alfalfa with tolerance to heavy metals.
Tropical natives (TROP) are capable of tolerating tropical heat because of their long-term adaptation to tropical environments. When exposed to heat stress, these natives tend to respond with lower sweat output, which is generally thought to be the result of heat acclimatization. The main objective of this study was to clarify central mechanisms inherent to suppressed thermal sweating in tropical natives (Malaysians) by comparing their sweating responses to those of temperate native (TEMP) (Koreans). This experiment was conducted in a thermoneutral climatic chamber ($24{\pm}0.5^{\circ}C,\;40{\pm}3%$ relative humidity). Heat loads were applied to each subject by the immersion of their lower legs in a hot water bath ($43^{\circ}C$ for 30 min). Sweat onset-time and sweat volume were compared between TROP and TEMP. The sweat onset-times on four selected points on the body ranged from 10.25 to 13.47 min in TEMP subjects, and from 16.24 to 17.83 min in TROP subjects (p<0.001). The local sweat volumes at the same sites ranged from 4.30 to $9.74 mg/cm^2$ in TEMP subjects, and from between 1.80 to $4.40mg/cm^2$ in TROP subjects (p<0.001). These results demonstrated a significant difference between TROP and TEMP subjects with regard to the manner in which they regulate their body temperatures when exposed to heat loads, and verified that long-term thermal adaptation blunts sweating sensitivities.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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