The roots of grapevine in the field in which the crown gall was occurred severely in Chungbuk province were collected and Agrobacterium spp. were isolated from the roots using the selective media. The selected 13 isolates were identified as A. tumefaciens with fatty acid analysis using MIDI system, nucleotide sequence of 16S rDNA, biochemical characteristics, and PCR with the species-specific primers. A. vitis, a pathogen of crown gall disease of grapevine was not isolated from the roots. All of the isolates did not show pathogenicity on the tomato seedlings and the stem and root of grapevine. Eric-PCR showed that DNA band patterns of the root isolates were a little more similar to A. tumefaciens than A. vitis. However, overall similarity between the root isolates and the pathogenic strains of A. tumefaciens and A. vitis was low by rep-PCR. These results suggest that a pathogen causing crown gall in grapevine in Chungbuk province may transmitted through the seedlings rather than via soil or roots.
Jung, Sung-Min;Hur, Youn-Young;Preece, John E.;Fiehn, Oliver;Kim, Young-Ho
The Plant Pathology Journal
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v.32
no.6
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pp.489-499
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2016
Green shoot cuttings of 10 different grapevine species were inoculated with Agrobacterium vitis to find disease-related metabolites in the grapevine. Crown galls formed 60 days after inoculation varied in gall severity (GS) evaluated by gall incidence (GI) and gall diameter (GD), which were classified into three response types as RR (low GI and small GD), SR (high GI and small GD), and SS (high GI and large GD), corresponding to resistant, moderately resistant, and susceptible responses, respectively. In this, 4, 4, and 2 Vitis species were classified into RR, SR, and SS, respectively. Gas chromatography mass spectrometry (GC-MS) analysis of the grapevine stem metabolites with A. vitis infection showed 134 metabolites in various compound classes critically occurred, which were differentially clustered with the response types by the principal component analysis. Multivariate analysis of the metabolite profile revealed that 11 metabolites increased significantly in relation to the response types, mostly at post-inoculation stages, more prevalently (8 metabolites) at two days after inoculation than other stages, and more related to SS (7 metabolites) than RR (3 metabolites) or SR (one metabolite). This suggests most of the disease-related metabolites may be rarely pre-existing but mostly induced by pathogen infection largely for facilitating gall development except stilbene compound resveratrol, a phytoalexin that may be involved in the resistance response. All of these aspects may be used for the selection of resistant grapevine cultivars and their rootstocks for the control of the crown gall disease of the grapevine.
The main grape producing regions in Korea were surveyed for the occurrence and relative incidence of crown gall disease on grapevine. The results of the survey showed that the disease tended to affect tetraploid cultivars, which produce a large and sweet fruit but are very weak to cold weather. Incidence of crown gall disease was high on the tetraploid cultivars, Kyoho (Gerbong), Daebong, and Black Olympia while it was low on the diploid cultivars, Cambell Early and Sheridan. The disease incidence was very high on Anseong, Cheonan, and Chincheon, where the major growing areas of tetraploid cultivars and grapevines were burried in the winter to protect from freeze injury, whereas it was low in Yungdong, Kimcheon, and Nonsan. Crown gall disease did not increased with grapevine age on both Cambell Early and Kyoho. It remained low in Cambell Early, but high for all ages on Kyoho, Galls were found on the crown region and mid part of the trunk, but more galls were on small branches and canes on Kyoho grapevines. More than one third of ZKyoho grapevines inspected had galls on multiple locations on grapevines. On Kyoho, 56.3% of the galls covered more than 50% of the crown gall disease affects severely on the cultivar.
Agrobacterium vitis causes a crown gall disease in grapevine and that is one of the major hindrances for the wide cultivation and production of grapevine. We studied the possibility of biological control using selected biological control agent. One isolate from the infected soil, named as strain 27, was able to inhibit the biovar 1; A. tumefaciens C58 and Ach5, biovar 2; A. rhizogenes 13264, and biovar 3; A. vitis, in vitro and in vivo test. The putative biological control agent, A. radiobacter strain 27 was carrying the plasmid and the size of isolated plasmid was very similar to that of pAgK84 of A. radiobacter K84.
To investigate the severity of crown gall disease on grapevine, the ratio of healthy vs. galled grapevines and the presence of the pathogen of the disease in soil were measured in Korean vineyards. In field and greenhouse cultivations, the crown gall incidence of the cv. Kyoho grapevines was $0.4{\sim}97.9%$ and $1.4{\sim}3.8%$ and those of cv. Campbell Early was $1.2{\sim}2.1%$ and $0{\sim}1.8%$, respectively. The higher populations of Agrobacterium spp. were isolated from soils of grapeveins with crown gall than from soils of noninfected vineyards. Based on the colony shapes and growth on plates, 480 isolates of Agrobacterium spp. from 21 soil samples were collected. Only 13 isolates out of 480 developed the gall on inoculated grapevines.
Grapevines will experience various types of winter damage. Some winter damages are caused by mechanical injury, freezing temperatures or poor vine vigor. This research was conducted to find out the appropriate control methods through selection of resistant rootstocks and improvement of overwintering methods for the control of crown gall disease on 'Kyoho' grape. The crown gall symptoms were not found when three stock plants of grapevine SO4, 5BB and 3306 were inoculated with $10^4cfu/ml$ of Agrobacterium vitis strains (YK2823, YK3312, LMG259, HKA234). But when they were inoculated with higher concentration $(10^6 cfu/ml)$ of A. vitis, irrespective of stocks plants, crown galls were formed all of them and the gall size was much smaller than that of kyoho. Three stock plants were selected as resistant based on above mentioned. Covering trunks and branches with rice straw and insulating coverlet was the most effective method for prevention of crown gall disease. This treatment minimized the ambient temperature changes on grapevine trees during winter season to $9.6^{\circ}C$ and the normal plant growth was due to the absence of freezing injury.
Proceedings of the Korean Society of Plant Pathology Conference
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1994.06a
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pp.11-26
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1994
Crown gall of stonefruit and nut trees is one of the very few plant diseases subject to efficient biological control. The disease is caused by the soil-inhabiting bacteria Agrobacterium tumefaciens and Agrobacterium rhizogenes and the original control organism was a non-pathogenic isolate of A. rhizogenes strain K84. Control is achieved by dipping planting material in a cell suspension of strain K84 which specifically inhibits pathogenic strains containing a nopaline Ti plasmid. Because the agrocin 84-encoding plasmid (pAgK84) is conjugative, it can be transmitted from the control strain to pathogenic strains which, as a result, become immune to agrocin 84 and cannot be controlled. To prevent this happening, the transfer genes on pAgK84 were located and then largely eliminated by recombinant DNA technology. The resulting construct, strain K1026, is transfer deficient but controls crown gall just as effectively as does strain K84. Field data from Spain confirm that pAgK84 can transfer to pathogenic recipients from strain K84 but not from strain K1026. The latter has been registered in Australia as a pesticide and is the first genetically engineered organism in the world to be released fro commercial use. It is recommended as a replacement for strain K84 to prevent a breakdown in the effectiveness of biological control of crown gall. Several reports indicate that both strains K84 and K1026 sometimes control crown gall pathogens that are resistant to agrocin 84. A possible reason for this is that both strains produce a second antibiotic called 434 which inhibits growth of nearly all isolates of A. rhizogenes, both pathogens and non-pathogens. Crown gall of grapevine is caused by another species, Agrobacterium vitis. It is resistant to agrocin 84 and cannot be controlled by strains K84 or K1026. It is different from other crown gall pathogens in several characteristics, including the fact that, although a rhizosphere coloniser, its also lives systemically in the vascular tissue of grapevine. Pathogen free propagating material can be obtained from tissue culture or, less surely, by heat therapy of dormant cuttings. A number of laboratories are searching for a biocontrol strain that will prevent, or at least delay, reinfection. A non-pathogenic A. vitis strain F/25 from South Africa looks very promising in this regard.
Kim, Jong-Kun;Lim, Sun-Hwa;Lee, Dae-Sung;Choi, Jae-Eul;Yun, Hae-Keun;Park, Sang-Hun;Kang, Sung-Su;Kang, Hee-Wan
Research in Plant Disease
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v.12
no.3
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pp.205-212
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2006
Agrobacterium vitis is a causal agent of crown-gall disease on grapevine. Bacterial strains were isolated from crown galls of different grapevine varieties in grapevine farms of Kyungbuk(Kimcheon), Chungbuk(Okcheon), Chungnam(Daejon, Choenan) and Kyeonggi(Suwon, Ansung) areas in Korea from 2002 to 2005. Primer sets, Phe A and VirA, which were derived from pectate lysase gene and virA gene of Ti-plasmid in A. vitis were used to detect A. vitis strains from crown galls. PheA and VirA primers amplified DNA fragments of 0.25 kb and 0.5 kb from fifty-one bacterialstrains. They formed crown galls on grapevine variety, Kyoho, or carrot disks with variable pathgenecity It was confirmed that the biochemical characteristics of 10 bacterial strains that was strong pathogene city on grapevine were mostly in agreement with type culture strains of A. vitis, showing growth in the presence of 2% NaCl, non-production of acid from melezitose and negative response in production of 3-Ketolactose.
Fifty nine strains of Agrobacterium vitis, the causal agent of crown-gall disease on grapevine, originating from different geographical regions and 16 grapevine cultivars including 35 Kyoho cultivar of Korea, were characterized by PCR polymorphic analysis using Universal Rice Primer(URP). Of 12 URP primers, primers URP1F, URP2R, URP2F, and URP4R, URP17R were available for detecting PCR polymorphic bands among the A. vitis strains. PCR polymorphic bands produced by primers URP2F and URP17R were profiled to 12 strain types. A. vitis strains originated from Kyoho cultivar of grapevine showed relatively simple genetic diversify of the four PCR types, while the A. vitis strains originated from other grapevine cultivars and type culture strains showed various genetic diversity with 8 types. Unweighted Pair-Group Method with Arithmetic mean(UPGMA) cluster analysis using the URP-PCR polymorphic bands showed 59.4. vitis strains are genetically clustered into large seven groups.
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