The antibacterial and antifungal effect of grapefruit seed extract(GFSE) was investigated for its purpose of application to a diverse spectrum of field as sanitizers, disinfectants and preservatives. GFSE showed coparatively high content of such flavoniods as naringin and hesperidin and ascorbic acid. GFSE containing a low level of organic acids is a heavy viscous and water-soluble liquid. As a result of the antimicrobial test of GFSE, Bacillus subtilis and Aspergillus oryzae did not survive at detectable levels when treated with more than 100 ppm of GFSE. The minimum inhibitory concentrations of GFSE for a wide variety of pathogenic and putrefactive bacteria, fungi and yeasts were 100 ppm and 250 ppm, respectively. In the comparable electron micrograph of microbial cells treated with GFSE or not, we could conclude that GFSE destroy microorganisms by disrupting the functions of the cell wall membrane and microbial spores.
농산물 및 그 가공식품을 수확·저장·가공하는 기간중에 Aspergillus parasiticus가 오염되어 aflatoxin을 생성하는 것을 방지할 목적으로 생육배지에 graefruit 종자추출물(GFSE)을 처리하여 곰팡이의 생육 및 aflatoxin 생합성을 저해하는 뚜렷한 효과를 관찰할 수 있었다. 4000 ppm의 GFSE농도 처리로 Aspergillus parasiticus의 생육을 92% 저해하였으며, 5000ppm 농도에서는 곰팡이 생육을 완전히 저해하였고 3000ppm 이상의 농도에서 aflatoxin 의생성을 100% 억제하였다. 한편, GFSE 처리에 의하여 aflatoxin 생합성 경로증, averufin, versiconal acetate 등의 중간대사산물이 aflatoxin으로 주입되는 것이 완전히 저해된 반면, versicolorin A, versicolorin A hemiacetal, sterigmatocystin 등은 aflatoxin 으로 전환되는 결과를 보여주어 GFSE는 versiconal acetate를 포함한 그 이전의 중간 대사물이 반응기질이 되는 효소 반응계를 저해하는 것으로 나타났다. 전자현미경을 이용한 곰팡이균체 및 포자의 형태변화는 GFSE처리에 의하여 세포막기능에 파괴되어 세포구성 내용물이 유실되고 곰팡이가 사멸하고 aflatoxin 생합성 기작이 중단되는 결과를 초래하였다.
To investigate the effect of several bactericides and fungicides against fruit & vegetable decay grapefruit seed extract(GFSE) was tested in a dilution solution. GFSE was shown to be effective against decay and rind breakdown and to extend the shelf-life of fruits and vegetables during storage and tiansport. Antimicrobial efficiency of GFSE on a wide spectra of gram + & - bacteria, moulds and yeasts was demonstrated by the measurement of minimal inhibitory concentrations performed (Bacteria 10-500ppm, Fungi:250-1,000ppm, Yeasts:100-250ppm). GFSE was separated and extracted into water-soluble fraction, water-insoluble and non-dialyzed fraction to isolate the antimicrobial substances. The water-soluble fraction showed the most active antimicrobial effect. The antimicrobial substances were isolated by gas chromatography. As the result of the isolation using GC, Peak-D was found to be the antimicrobial compound in GFSE. The identification of the most antimicrobial substance was carried out by using GC-MS.
To investigate the antimicrobial activities and effect of grapefruit seed extract(GFSE) on the physiological function of microorganism, antimicrobial activity, fatty acids of bacterial cell lipid and amino acids of bacterial cell protein were measured. The change of cell morphotype was observed by transmission electron microscope. GFSE was very stable on the wide range temperture and pH. The growth rate of E. coli and B. suvtilis were decreased above 40ppm GFSE There fore, minimum inhibitory concentration (MIC) of the E. coli and B. subtilis to GFSE were determined around 40ppm. In the change of fatty acids quantities, hexadecanoate was significantly decreased on the treatment compared with control in case of E. coli, whereas tridecanoate was not detected in case of B. subtilis. In the change of amino acids quantities, alanine, glutamic acid, glycine, lysine were decreased on the treatment compared with control in case of E. coli and B. subtilis Transmission electron microsgraphs(TEM) showed the microbial cells were destroyed by GFSE.
어묵에 grapefruit 종자 추출물의 농도별로, 침지 처리한 후 저장기간에 따른 물리, 화학적 변화를 검토하여 다음과 같은 결과를 얻었다. 1. 저장 기간 중 어묵의 조단백함량 변화는 대조구에 비하여 GFSE 의 처리 농도가 높을수록 더 작았다. 2. Texture 는 저장기간이 경과함에 따라 감소하는 경향을 나타내었으나 GFSE 용액 처리구에서는 감소율이 낮았다. 3 어묵 단백질의 SDS-PAGE pattern 변화는 저장기간이 경과함에 따라 분자량, 30,000-32,000의 protein은 점차 가수분해되어 소멸되는 현상을 보였으며 특히 대조군의 경우 2일 경과 후부터 급격한 분해라 이루어져 단백질 major band의 손실율이 크게 증가한 것으로 나타난 반면, GFSE처리 시험구의 경우 4일 경과시에야 비로소 뚜렷한 손실반응을 보여 GFSE처리에 의하여 어묵단백질의 변패 발생 시기를 상당 기간 연장함을 확인할 수 있다.
김치의 저장성을 연장하기 위한 시도의 하나로 1,000 ppm 농도의 자몽종자추출물(grapefruit seed extrtact, GFSE)과 구연산 용액에 절임 배추를 각각 씻어서 김치를 담근 다음 숙성시키면서 품질 특성의 변화를 측정하였다. GFSE 및 구연산에 세척한 배추로 담근 김치는 대조구에 비하여 pH 저하 및 적정산도의 증가가 늦어지는 것으로 나타나 숙성 기간의 연장 효과가 있는 것으로 나타났다. 또한 환원장은 GFSE로 처리한 시험구가 숙성 20일까지 가장 높은 값을 나타내어 발효가 억제되는 것으로 나타났다. GFSE를 처리한 시험구는 숙성 10일까지 대조구에 비하여 총균수 및 유산균수가 낮은 것으로 나타났으나 구연산 처리구는 대조구와 큰 차이를 나타내지는 않았다.
To investigate the distribution of Vibrio parahaemopyticus in the southern 4 coastal areas, Vibrio parahaemolyticus was isolated from seawater, shellfish and sediment from May to October in 1991, and antimicrobial effect of grapefruit seed extract (GFSE) on the growth of isolated strains were examined. In the 120 sample from 4 coastal areas, 16 strains of Vibrio parahaemolyticus were isolated and identified. The distribution serotype of isolated strains was 10 types of monovalent k-antiserum. Especially k-5 and k-28 were highly distribyted with 3 and 4 strains. 31.3% of isolated strains showed positive on Kanagawa phenomenon test. All isolated Vibrio parahaemolyticus were sensitive to chloramphenicol and gentamycin, 5 and 6 strains were resistant to streptomycin and colistin, respectively. Isolated strains were compared with geographical, month and sample. The distribution of 16 isolated Vibrio parahamolyticus was high at Hadong with 50%(8 strains), on July with 43.8%(7 strains) and from seawater with 37.5%(6 strains) respectively. Minimal inhibitory level of GFSE to Vibrio parahaemolyticus was 50 ppm. With 100 ppm treatment of GFSE, the destroy of cell membrane function, outflow of cell ingredients and ghost morphology of cell were investigated.
수확한 밀감(Satsuma mandarin)을 grapefruit 종자 추출물(GFSE)로 처리하여 $15{\sim}20^{\circ}C$, 상대습도 60% 조건하에서 저장하면서 밀감과피의 파손 및 연화정도를 대조구(GFSE 무처리구)와 비교하고, 오염곰팡이를 분리하여 (GFSE 처리가 곰팡이 생육에 미치는 항균효과 실험을 실시함과 동시에 투과전자현미경을 이용하여 곰팡이 포자의 형태변화를 중심으로 항균효과를 관찰하였다. 저장 8주후, 대조구의 경우, 밀감시료중 80% 정도는 과피가 심하게 곰팡이로 오염되어 파손되었으며 내부과육조직도 연화되어 폐기현상을 보인 반면, 100ppm의 GFSE 처리시험구의 경우, 밀감시료의 27% 정도 곰팡이가 오염되었고, 그 중 반수정도만 과피가 분해 파손 되었으며 250ppm GFSE 처리시험구는 단지, 13%의 밀감과피에서만 곰팡이가 오염되었을 뿐아니라, 박피해낸 과육의 조직감도 우수하였고 과즙액의 용출현상도 보이지 않아 기호도면에서 저장초기의 밀감시료에 뒤떨어지지 않는 것으로 나타났다. 한편, 변패밀감과피에 오염된 Penicillium속 곰팡이를 분리하여 GFSE 처리에의한 곰팡이 생육저해율을 조사한 결과, 100ppm 농도에서 71.8%, 250ppm 농도에서 91.2%, 500 ppm 이상의 농도처리로 100% 저해율을 나타냄으로써, 곰팡이에 의한 밀감변패현상을 방지하기 위한 GFSE의 최소저해농도는 $250{\sim}500ppm$ 정도로 판명되었다. 또한, GFSE 처리 전후의 곰팡이 포자 conidia의 세포구조를 비교 검토한 결과, GFSE 처리에 의하여 포자벽주위의 세포구조가 붕괴되고 포자내용물의 유실현상이 심화되어. 곰팡이의 증식기능이 크게 상실되어 곰팡이를 사멸케 하는 결과를 초래하는 것으로 나타났다.
Grapefruit seed extract(GFSE)의 여러가지 미생물에 대한 항균력과 물김치 저장 효과를 검토한 결과는 다음과 간다 1. GFSE의 세균류에 대한 항균력에서 Vibrio속은 50ppm, Bacillus cereus와 Staphylococcus aureus는 30ppm, Serratia속은 10ppm 이상에서 균의 증식이 억제되었다. 2. 세균중 패혈증 원인균으로 알려진 Vibrio vulnificus에 대한 항균성은 nutrient broth에서 GFSE 30ppm 농도까지는 증식을 확인할 수 있었으나 50ppm 이상의 첨가에서는 72시간까지 균의 증식을 볼 수 없었다. 그리고 $5\%$ skim milk에서의 본 균에 대한 GFSE 살균력을 실험한 결과 $5.2\times10^5$에서 저장 120시간 후에는 GFSE농도 0, 10, 30, 50 및 100ppm에서 각각 $9.6\times10^3,\;5.3\times10^3,\;5.6\times10^2$, 48, 35/ml로 감소되어 GFSE농도 50ppm 이상에서는 살균효과가 있음을 알 수 있었다. 3. 곰팡이류에 대한 항균력은 Aspergillus parasiticus가 100ppm, Asperillus versicolor 50, Penicillium funiculosum 100, Pyrenochaeta terrestris 30 그리고 Trichodema viride는 30ppm까지 증식하였으나 그 이상의 농도에서는 증식이 억제되었다. 4. 물김치에 GFSE를 각각 50, 100ppm 첨가하여$5^{\circ}C$와 $20^{\circ}C$에서 저장하면서 pH변화를 확인한 결과 $5^{\circ}C$에서는 20일과 25일, $20^{\circ}C$에서는 17일과 20일까지 pH변동이 거의 없어 물김치의 보존기간을 연장시킬 수 있었다.
GFSE 분말제재를 절인 배추에 대하여 0.1%, 0.3% 및 0.5%씩 첨가하여 김치를 만들고 10%에서 숙성하면서 pH, 적정산도, 환원당 함량, 총균수, 젖산균수와 같은 품질 특성을 조사하였다. 숙성 기간이 경과함에 따라 김치의 pH는 감소하였는데, 대조구와 GFSE 분말제재 0.1% 첨가구, 0.3%와 0.5% 첨가구는 서로 비슷한 경향을 나타내었다. 대조구는 숙성 5일의 pH가 4.20으로 김치의 숙성 적기로 판단되는 범위에 도달하였는데, 0.5% 첨가구는 숙성 30일까지 도달하지 않았고, 0.3% 첨가구는 숙성 25일에 pH 4.19였다. 적정산도는 김치의 숙성 기간이 경과함에 따라 계속 증가하였으며, 시험구간의 변화 경향은 pH와 유사하였다. 환원당 함량은 김치의 숙성과 더불어 감소하였으며, 대조구와 GFSE 분말 제재 0.1% 첨가구는 숙성 10일까지 급격히 감소하였고 그 이후에는 큰 변화를 나타내지 않았다. GFSE 분말제재 0.3%, 0.5% 첨가구의 환원당 함량 감소는 비교적 완만하였으며, 숙성 전 기간에 걸쳐서 감소하였다. GFSE 분말제재는 김치의 담금 직후 총균수와 젖산균수를 낮추는 작용을 하였으며, 숙성 기간 중에도 젖산균의 증식을 억제하였다. 특히 GFSE 분말 제재 0.5% 첨가구는 숙성 20일 이후에 젖산균수가 급격하게 줄어들었고, 30일에는 다른 시험구보다 2log(CFU/mL) 이하 낮았다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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