During the last three decades considerable advances has been made in goat embryo production and transfer technology. The Korean native black goat is the most useful domestic ruminant in this country for biological investigation and application because it has a lot of merits such as relatively short generation period (1 vs 2 year for a cow), easy of handling, well adaptation, high fertility, convenient and inexpensive. This article covers the methods of superovulation, estrus synchronization, embryo collection and transfer techniques, pregnancy diagnosis and subsequent pregnancy and kidding rates for the production of transgenic Korean native black goats. More than one hundred goat kids have been produced as a result of our transgenic goat project via microinjection of foreign gene into pronuclei, in vitro culture, transfer of various stages of fresh and frozen-thawed microinjected embryos into oviducts or uteri of recipient does. We have got two transgenic goats carrying a transgene targeting the expression of recombinant human granulocyte colony stimulating factor (hG-CSF) to the mammary gland so far. Since collection and transfer of embryos in this species is usually accomplished by laparotomy, exteriorization of the reproductive tract for surgical embryo collection leads to the formation of post-operative adhesions. Nonsurgical or laparoscopic technique to reduce adhesions from repeated surgeries has great advantages in improving embryo production and transfer especially from valuable donors. We will discuss this later.
A 6-year retrospective cohort study was conducted among Thai hematologic malignancy (HM) patients receiving intensive chemotherapy. Of the 145 eligible patients receiving 893 chemotherapy sessions, 46.9% were female, median age was 52 years, and the most common HM diagnosis was diffuse large B-cell lymphoma (46.2%). Febrile neutropenia (FN) occurred in 14.9% of chemotherapy sessions with an incidence of 24.8 per 1,000 chemotherapy cycles per year. Independent factors associated with FN were receiving the first chemotherapy cycle [adjusted hazard ratio (aHR) 4.1], having hemoglobin ${\leq}100g/L$ (aHR 3.7) and platelet ${\leq}140,000/{\mu}L$ (aHR 2.7) on chemotherapy day and receiving acute myeloid leukemia regimens (aHR 20.8). Granulocyte colony stimulating factor was significantly associated with reduced rate of FN when given in those receiving CHOP regimen. With the median follow-up time of 16 months, the overall survival time was significantly longer in patients without FN than those with FN (61.7 vs. 20.8 months; p<0.001).
본 연구에서는 hGM-CSF를 생산해 배지 내로 분바하도록 유전자 조작된 Nicotiana tabacum 세포를 수성이상계 내에서 배양하여 in situ recovery를 시도하였다. 특히 식물세포 자체의 생상에 큰 영향을 주지 않으면서도 일반 배지에서 회수한 단백질에 비해 많은 양을 생산할 수 있는 수성이상계 시스템을 선정하였다. 6% (w/w) PEG 20,000과 10% (w/w) dextran 2.000,000 을 이용하는 경우 최대 세포 농도가 18.6 g/L 로, 일반배지를 사용하는 경우 (15.7 g/L)에 비해 저해가 없음을 확인하였다. 또한 목적 단백질인 hGM-CSF의 생산에 있어서도 위의 시스템의 경우 dextran-rich phase인 아랫 상으로 분배됨으로 인해 회수가 쉬울 것으로 확인되었으며 그 생산량 또한 일반배지에서의 생산량 (1.5 ng/mL)에 비해 크게 다르지 않음을 확인할 수 있었다. 따라서 hGM-CSF의 회수를 위한 in situ recovery 시스템에 있어서 수성이상계의 이용 가능성을 확인하였다.
Transgenic Nicotiana tabacum cells were cultivated for the production of murine granulocyte macrophage-colony stimulating factor (mGM-CSF) in both a stirred tank bioreactor and an airlift bioreactor with draft tube. Cell growth and mGM-CSF production in the airlift bioreactor were found to be better than those achieved in the stirred tank bioreactor. In the airlift bioreactor, 9.0g/L of cells and 2.2ng/mL of mGM-CSF were obtained (11.0g/L and 2.4ng/mL, respectively in shake flasks). Although the lag period was prolonged and mGM-CSF production was lowered by 33% in the stirred thank bioreactor as compared to the control culture, the maximum cell density was increased up to 12.0g/L due to better mixing by agitation at the higher cell density.
CJ-50001 is a recombinant granulocyte-colony stimulating factor (rG-CSF) developed by Cheil Jedang R&D Center. The effects of CJ-50001 on the increase of peripheral neutrophil count following intravenous and subcutaneous single administration at a dose of 20$\mu$g/kg in normal ICR mice and SD rats, respectively, were compared with those of Grasin, a control drug. Both CJ-50001 and Grasin significantly increased the peripheral neutrophil number in four treatment groups and the maximum number of neutrophil was achieved at 12 to 18 h in rats and mice, respectively. The dose dependency test was studied for CJ-50001 only in normal mice by intravenous or subcutaneous administration. When administered i.v or s.c at the various doses in normal mice, CJ-50001 significantly increased the neutrophil number over the dose of 160 ng/kg, compared with the vehicle control group. From these results, it was concluded that CJ-50001 showed efficacy similar to Grasin in the peripheral neutrophil count increase.
The peripheral neutrophil recovery test was conducted to determine the efficacy of CJ-50001, a drug developed in Cheil Jedang R&D center as a recombinant granulocyte-colony stimulating factor (rG-CSF). Grasin was used as control drug. CJ-50001 and Gratin were subcutaneously administered to ${\gamma}$-ray irradiated mice for 21 days at a dose of 10$\mu$g/kg after bone marrow transplantation and the recovery of neutrophil number was examined on the days of 9, 13, 17, and 21 after the drug administration. It was observed that the peripheral neutrophil number of the vehicle control group was recovered to the normal level on the day of 13 after the transplantation whereas the group administered with CJ-50001 and Grasin respectively, showed the normal level of peripheral neutrophil number on 9th day after the bone marrow transplantation. The number of peripheral neutrophils reached the highest level on the 21 st day of drug administration, and was recovered to the normal level on the 4th day after ceasing of the drug administration (on the 25th day of the transplantation). Thus, it was presumed that CJ-50001 showed efficacy similar to Grasin on the peripheral neutrophil recovery after bone marrow transplantation.
한국수정란이식학회 2000년도 수정란의 위생적 처리·검사 및 특수가축의 수정란이식 기술 심포지움
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pp.64-75
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2000
During the last three decades considerable advances has been made in goat embryo production and transfer technology. The Korean native black goat is the most useful domestic ruminant in this country for biological investigation and application because it has a lot of merits such as relatively short generation period(1 vs 2 year for a cow), easy of handling, well adaptation, high fertility, convenient and inexpensive. This article covers the methods of superovulation, estrus synchronization, embryo collection and transfer techniques, pregnancy diagnosis and subsequent pregnancy and kidding rates for the production of transgenic Korean native black goats. More than one hundred goat kids have been produced as a result of our transgenic goat project via microinjection of foreign gene into pronuclei, in vitro culture, transfer of various stages of fresh and frozen-thawed microinjected embryos into oviducts or uteri of recipient does. We have got two transgenic goats carrying a transgene targeting the expression of recombinant human granulocyte colony stimulating factor(hG-CSF) to the mammary gland so far. Since collection and transfer of embryos in this species is usually accomplished by laparotomy, exteriorization of the reproductive tract for surgical embryo collection leads to the formation of post-operative adhesions. Nonsurgical or laparoscopic technique to reduce adhesions from repeated surgeries has great advantages in improving embryo production and transfer especially from valuable donors. We will discuss this later.
Purified compound with intestinal immune system-modulating properties, GWE-2c, was isolated from methanol extract of Gelidium amansii by sequential procedures with silica gel column, LH-20 Sephadex gel column, and thin-layer chromatographies. In the presence of GWE-2c, strong immunoactivity in Peyers patch cell-mediated bone marrow cells was observed in vitro. In vivo intestinal immune-modulating activity was also enhanced by crude phenolic compound (GWE) of G. amansii in a dose-dependent manner. Investigation of production of several cytokines in Peyer's patch cells upon stimulation with GWE in vivo revealed the levels of granulocyte-macrophage colony-stimulating factor (GM-CSF) and interleukin (IL)-6 increased. Results suggest that the phenolic compound from G. amansii represents immunopotentiator and biological response modifier at in vitro and in vivo levels.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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