• 한국식품과학회지
• /
• 제24권5호
• /
• pp.477-481
• /
• 1992

품질이 좋은 된장을 제조하기 위한 연구의 일환으로 재래식 된장과 Aspergillus oryzae와 Bacillus natto를 혼합한 된장을 제조해서 발효기간에 따른 대두조직의 변화를 조사한 결과 가압, 가열처리에 의하여 세포벽이 붕괴되거나 ghost 상태를 보였고 표피부와 내부의 세포질은 원형질 분리가 현저한 차이가 있으며 protease에 의한 당단백 구상체의 융합과 amylase에 의하여 전분이 분해되어 작은 공포를 보였으며 발효에 의한 균침투 과정이 시일이 경과함에 따라 표피부에서 내부로 이행되어지며 Aspergillus oryzae와 Bacillus natto 혼합 된장의 표피부와 유세포에서 점질물이 보인다. 또한 발효시간이 경과함에 따라 염색성이 나빠지고 세포벽이 다각형으로 되는데 재래식 보다는 Aspergillus oryzae와 Bacillus natto 혼합구가 현저하였다.

• 한국미생물·생명공학회지
• /
• 제13권3호
• /
• pp.179-184
• /
• 1985

성적 화합성 heterothallic 2부체와 1부체인 Saccharomycopsis lipolytica에서 시트르산 생산성을 비교하였다. 교잡과 세포융합에 의한 2부체는 random spore 분석과 단상화에 의하여 확인되었다. ATCC 44601과 IFO 1209 균주는 IFO 1550와 IFO 1551 균주보다 시트르산과 이소시트르산을 많이 생산하였다. 2부체에 의한 시트르산 생산양식은 양친 1부체 균주의 중간정도이였다. IFO 1550와 IFO 1551 균주의 citrate synthetase와 isocitrate lyase의 비활성은 ATCC 44601과 IFO 1209 균주에서 보다 높았고 이들 효소의 비활성과 시트르산 생산간에는 상관관계가 없었다.

• 농업과학연구
• /
• 제41권3호
• /
• pp.237-243
• /
• 2014

Human Glucagon like peptide-1 (GLP-1) is an incretin hormone that promotes secretion of insulin. In order to eliminate the formation of the soluble aggregate, Ala19 in GLP-1 was substituted with Thr, resulting in a GLP-1 mutant GLP-1A19T. The gene synthesis of GLP-1A19T and the fusion of 6-lysine tagged ubiquitin gene were accomplished by using the overlap extension polymerase chain reaction. The ubiquitin fused GLP-1A19T (K6UbGLP-1A19T) is expressed as form of inclusion body with little formation of the soluble aggregation in recombinant E. coli. In order to produce K6UbGLP-1A19T in large amounts, fed-batch fermentation was carried out in a pH-stat feeding strategy. Maximum dry cell weight of 87.7 g/L and 20.4% of specific K6UbGLP-1A19T content were obtained. Solid-phase refolding using a cation exchanger was carried out to renature K6UbGLP-1A19T. The refolded K6UbGLP-1A19T aggregated little and was released GLP-1A19T by on-column cleavage with ubiquitin-specific protease-1. The molecular mass of GLP-1A19T showed an accurate agreement with its theoretical molecular mass.

• Journal of Microbiology and Biotechnology
• /
• 제23권7호
• /
• pp.923-931
• /
• 2013

Rapamycin, known as an inhibitor of Target of Rapamycin (TOR), is an immunosuppressant drug used to prevent rejection in organ transplantation. Despite the close association of the TOR signaling cascade with various scopes of metabolism, it has not yet been thoroughly investigated at the metabolome level. In our current study, we applied mass spectrometric analysis for profiling primary metabolism in order to capture the responsive dynamics of the Chlamydomonas metabolome to the inhibition of TOR by rapamycin. Accordingly, we identified the impact of the rapamycin treatment at the level of metabolomic phenotypes that were clearly distinguished by multivariate statistical analysis. Pathway analysis pinpointed that inactivation of the TCA cycle was accompanied by the inhibition of cellular growth. Relative to the constant suppression of the TCA cycle, most amino acids were significantly increased in a time-dependent manner by longer exposure to rapamycin treatment, after an initial down-regulation at the early stage of exposure. Finally, we explored the isolation of the responsive metabolic factors into the rapamycin treatment and the culture duration, respectively.

• 한국식품과학회지
• /
• 제22권6호
• /
• pp.611-617
• /
• 1990

Vitamin $B_{12}$의 생산성을 높이기 위하여 Bacillus natto와 vitamin $B_{12}$ 생산균주로 알려진 Bacillus megaterium IAM 1166 균주간의 종간 원형질체 융합을 시도하였다. 변이원 처리에 의해 활성이 우수하며 genetic marker로써 $thr^-try^-rif^r$인 Bacillus natto SH-34 및 $arg^-ade^-lys ^-str^r$의 genetic marker를 가진 Bacillus megaterium BK-13을 분리하였다. 원형질체 융합을 행하기 위하여 $500\;{\mu}g/ml$ lysozyme 처리시 원형질체 형성률과 재생률은 99% 및 67%를 나타내었다. 변이주 Bacillus natto SH-34 및 Bacillus megaterium BK-13간에 $1.0{\times}10^{-5}$을 나타내었다. 융합주 MNF-72는 vitamin $B_{12}$ 생산용 배지에서 $7.85\;{\mu}g/ml$의 높은 생산성을 나타내었으며, 융합주 MNF-72를 sodium alginate로 고정화를 하여 회분식 및 연속식 발효를 행하였을 때 72시간에 $0.58\;{\mu}g/ml.hr$ 및 $0.80\;{\mu}g/ml.hr$의 vitamin $B_{12}$를 생산하였다.

• 한국미생물·생명공학회지
• /
• 제40권1호
• /
• pp.50-56
• /
• 2012

Wnt/${\beta}$-catenin 신호전달체계는 세포의 분화와 증식, 기관의 발생과 조절을 담당하는 중요한 세포내 신호전달체계이다. 발생과정에서 Wnt/${\beta}$-catenin 신호전달체계의 작용이 지방세포로의 분화를 억제하고 조골세포와 신경세포로의 분화는 촉진한다는 많은 연구들이 보고되어 있으며, 현재 Wnt/${\beta}$-catenin 신호전달체계의 조절을 통한 여러 질병의 치료와 예방에 대한 관심이 대두되고 있다. 본 연구에서는 세포를 기반으로 한 초고속 저분자 스크리닝 시스템을 이용하여 Wnt의 상승제인 silybin을 발굴하였다. silybin은 Wnt가 존재 않을 경우에는 ${\beta}$-catenin 단백질의 수준에 영향을 미치지 않지만 Wnt가 존재할 경우, mRNA 발현양의 변화 없이 세포질내의 ${\beta}$-catenin 단백질의 수준을 증가시킨다. 또한 silybin에 의해 증가된 ${\beta}$-catenin으로 인해 지방세포분화에 중요한 전사인자라고 알려진 PPAR-${\gamma}$와 C/EBP-${\alpha}$의 발현을 억제한다. 따라서 이 연구에서는 silybin이 세포질내 ${\beta}$-catenin 단백질의 수준을 증가시킴으로써 Wnt/${\beta}$-catenin 신호전달체계를 활성한다는 사실을 제시하였다.

• Journal of Microbiology and Biotechnology
• /
• 제20권3호
• /
• pp.550-557
• /
• 2010

Escherichia coli (E. coli) heat-labile enterotoxin B subunit (LTB) was regarded as one of the most powerful mucosal immunoadjuvants eliciting strong immunoresponse to coadministered antigens. In the research, the high-level secretory expression of functional LTB was achieved in P. pastoris through high-density fermentation in a 5-1 fermentor. Meanwhile, the protein was expressed in E. coli by the way of inclusion body, although the gene was cloned from E. coli. Some positive yeast and E. coli transformants were obtained respectively by a series of screenings and identifications. Fusion proteins LTB-6$\times$His could be secreted into the supernatant of the medium after the recombinant P. pastoris was induced by 0.5% (v/v) methanol at $30^{\circ}C$, whereas E. coli transformants expressed target protein in inclusion body after being induced by 1 mM IPTG at $37^{\circ}C$. The expression level increased dramatically to 250-300 mg/l supernatant of fermentation in the former and 80-100 mg/l in the latter. The LTB-6$\times$His were purified to 95% purity by affinity chromatography and characterized by SDS-PAGE and Western blot. Adjuvant activity of target protein was analyzed by binding ability with GMI gangliosides. The MW of LTB-6$\times$His expressed in P. pastoris was greater than that in E. coli, which was equal to the expected 11 kDa, possibly resulted from glycosylation by P. pastoris that would enhance the immunogenicity of co-administered antigens. These data demonstrated that P. pastoris producing heterologous LTB has significant advantages in higher expression level and in adjuvant activity compared with the homologous E. coli system.

• 한국식품영양과학회지
• /
• 제24권5호
• /
• pp.779-784
• /
• 1995

5'-GMP(5'-Guanylic acid) 생산 융합균조 fusant RC102를 고정화하여 5'-GMP을 연속적으로 생산하고자 하였다. 균체 고정화용 담체로서 k-carrageenan, polyacrylamide, Ca-alginate 및 agar 등 4가지 담체에 고정화한 결과 최적 담체로서 3% k-carrageenan을 선정하였으며, 이담체에 고정화한 균체를 이용하여 5'-GMP 연속적으로 생산하였다. 고정화 균체에 의한 5'-GMP 생산의 최적 온도 및 pH은 $32^{\circ}C$, pH 8.0, 미량온소로서 $Mn^{2+}과\;Zn^{2+}$의 농도는 각각 $30\mu\textrm{g}/L,\;1{\times}10^{-6}%$이었다. $Mn^{2+}$이 풍부하고 값싼 CSL(Corn Steep Liquor)을 배지로서 사용하기 위해서 penicillin G와 D-cycloserine 및 POSEA(polyoxyethylene stearylamine) 농도 최적 농도는 각각 0.8unit/ml, 0.8unit/ml, 그리고 5mg/ml으로 나타났으며, 항생물질 보다 계면활성제가 효과적이었다. 이상의 최적 조건에서 고정화 fusant RC102는 15일간 안정되게 5'-GMP를 생산하였다.

• 한국미생물·생명공학회지
• /
• 제28권2호
• /
• pp.80-86
• /
• 2000

$30^{\circ}C$에서 에탄올 발효력이 우수한 Saccharomyces carlsbergensis와 $42^{\circ}C$에서 성장력이 우수한 Kluyveromyces maxianus를 원형질체 융합을 통하여 고온에서도 발효력이 우수한 효모 균주를 개발하고자 하였다. 원형질체 융합을 위해 원형질체 형성율의 최적 조건을 조사하였는데, 두 균주 모 두 삼투안정제는 1.2M KCl, 세포벽 분해 효소의 농도와 처리 시간은 각각 200 (unit/ml)와 90분으로 동일하였고, 전처리용액으로서 EDTA와 mercaptoethanol의 농도, 그리고 최적 pH는 두 균주가 차이를 보여 S. carlsbergensis가 각각 10-20 mM/ml, $4.0\mu$l/ml, 그리고 7.0이었고, K. marxianus의 경우 20mM/ml, 2.5-4 $\mu$l/ml, 그리고 8.0이었다. 원형질체 형성을 위한 최적 조건하에서 원형질체 형성을 S. carlsbergensis의 경우 92.94%, K marxianus는 98%였으며, 두 균주의 원형질체 융합율은 $1.4\times10^{-6}-4.8$\times10^{-7}$으로 나타났다. 두 균주를 융합시킨 결과 SG배지$ 30^{\circ}C$에서 6-8일 배양 후에 27주의 융합주들을 획득하였고, 이 중에서$ 42^{\circ}C$에서 성장을 보인 융합주는 6주이었다. $42^{\circ}C$ 그리고 16%(w/v) 포도당이 함유된ㄴ 배지에서 3일 발효 후 모균주들이 3.2-3.4%(w/v)의 에탄올을 생산하였는데 비해 융합주 SK41-4와 SK53-22는 같은 조건에서 모두 5.2%(w/v)의 에탄올을 생산하였다. 고온내성에 대한 안정성을 조사한 결과, SK53-22 경우 세포 분열이 거듭됨에 따라 안정성이 감소하였으나, SK41-4는 30세대 세포분열 후 100.0%로서 안정성이 매우 높았다.

• 한국식품영양과학회지
• /
• 제36권8호
• /
• pp.1031-1037
• /
• 2007

홍삼 융합청국장을 다양한 식품소재로 활용하고자 가수 분해 조건에 따른 특성변화를 조사하였다. 그 결과 4종류의 protease에 따른 홍삼 융합청국장 가수분해물의 특성은 protease(KMF-G)가 가수분해도, 칼슘결합능, 총 페놀화합물 함량이 가장 높은 것으로 나타났으며, 혈전용해능과 ACE 저해활성 또한 87.10 unit, 67.17%로 가장 높게 나타났다. Protease(KMF－G) 농도에 따른 영향을 조사한 결과 0.02%에서 적합하였다. 홍삼 융합청국장의 가수분해시간에 따른 영향은 60분과 90분에서 가장 양호한 결과를 나타내었으나 유의적 차이가 나타나지 않았으며, 홍삼 융합청국장 가수분해물의 불쾌취와 쓴맛은 60분 이상에서 개선되었으므로 최적 가수분해시간은 60분으로 설정할 수 있었다. 홍삼 융합청국장의 총 진세노사이드 함량은 9.197 mg/g이고, 홍삼 융합청국장 가수분해물의 함량은 11.707 mg/g이었다. 이상의 결과 protease(KMF-G), 0.02%를 첨가하여 60분간 가수분해 하였을 때 이화학적 특성, 혈전용해능 및 ACE 저해활성이 향상된 홍삼 융합청국장 가수분해 조건을 설정할 수 있었다.