• 생명과학회지
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• 제24권11호
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• pp.1252-1257
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• 2014

DMSO는 배양포유류세포 동결보존의 동결보호제로써 일반적으로 사용 되어져 왔지만, DNA 메틸화 및 히스톤의 수식에 의해 일부 세포에서는 분화를 일으키는 것으로도 알려져 있다. 동결보존시의 배양세포의 안정된 분화형질유지에는 메틸화를 일으키는 DMSO 이외의 동결보호제의 사용이 필요하다. 세포독성이 낮고, 동물정자동결보존에 효과적인 것으로 알려진 아미도 화합물이 동일하게 포유류의 배양세포의 동결보존에서 동결보호작용이 있는지를(8종류의 아미드 화합물) 배양 마우스 혈관내피세포를 이용해 조사했다. 조사한 아미드 화합물 중에 아세트아미드와 락트아미드의 2종류가 배양세포에 대해서 동결보호작용이 있고, 가장 효과적인 것은 농도가 1.5 M의 락트아미드이다. 배양세포의 동결보존에 관해서는 삼투압 스트레스를 받지 않을 필요가 있기 때문에, 1.5 M 락트아미드 용액을 제작 시, 용매를 각 희석율의 PBS로 하고, 삼투압을 바꾼 동결 보존액에 동결세포의 생존율을 조사했다. 그 결과, 0.4배 농도의 PBS가 삼투압 스트레스를 가장 낮고 생존율이 가장 높음을 확인했다. 동결보존배지에 고 분자량재료를 첨가하면 세포생존율이 개선되는 것이 알려져 있기 때문에 BSA, HES, 데키스트란의 효과를 조사했다. 그 결과, 락트아미드를 이용한 동결보존배지는 $0.4{\times}PBS$를 이용한 1.5 M 락트아미드용액에 1%의 BSA를 첨가한 경우, DMSO의 동결보호작용에 필적하는 동결보호작용을 나타내는 것을 확인했다.

• 한국발생생물학회지:발생과생식
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• 제12권1호
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• pp.67-76
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• 2008

Reactive oxygen species(ROS)에 의한 산화적 손상은 냉동보존 과정과 체외 배양과정 중 세포 생존률 감소의 주된 요인 중 하나이며, 특히 줄기세포의 경우 냉동보존 후 쉽게 분화하거나 사멸하는 경향이 있음이 잘 알려져 있다. 따라서 본 연구는 체외 배양된 인간 조혈모 줄기세포의 냉동보존 시 선별된 항산화제를 처리하여 항산화제가 줄기세포의 생존 및 자동분화에 미치는 영향을 조사하고자 하였다. 해동 후 세포의 생존률은 $\alpha$-tocopherol과 ascorbic acid 처리군이 대조군($62.7{\pm}8.0%$)에 비해 높은 생존률을 보였고, 그 중 150 uM $\alpha$-tocopherol처리군($70.5{\pm}7.0%$)이 가장 높은 생존률을 보였다. 세포막 손상은 대조군 및 실험군 모두에서 나타나지 않았다. 자동분화율에 있어서는 모든 실험군에서 대조군($10.1{\pm}1.6%$)과 유의한 차이를 보이지 않았으나, 150 uM $\alpha$-tocopherol ($7.3{\pm}2.6%$) 처리군에서 가장 낮은 자동분화율을 나타내었다. 본 실험의 결과, 항산화제는 인간 조혈모 줄기세포 냉동보존 시 생존율을 향상시키며, 특히 $\alpha$-tocopherol은 인간 조혈모 줄기세포의 냉동보존 과정 동안 효과적인 항산화제로 작용할 것이라 생각된다.

• 한국수산과학회지
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• 제21권2호
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• pp.80-84
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• 1988

방어, 참돔, 피조개, 굴 4종의 어패육에 V. vulnificus M-8을 접종하여 저장온도와 시간에 따른 균수의 변화를 시험한 결과는 다음과 같다. 1. V. vulnificus의 저온저항성은 $-20^{\circ}C$의 $1.5\%$ 식염-인산완충희석수에서는 32시간에 거의 사멸하였으며, 방어육 균질액에서는 인산완충희석수에서 보다 감소가 완만하였고 72시간 이후에도 균이 검출되었다. 그리고 $4^{\circ}C$ 저장에서도 균의 감소가 현저하였다. 따라서 이 균의 저온저항성은 약하지만 단시간 냉동 및 냉장에 의한 균의 사멸은 어렵다는 것을 알 수 있었다. 2. 어패육에 접종하여 $30^{\circ}C$에 저장한 시료중의 V. vulnificus의 증식은 일반적으로 16시간만에 최대균수에 달하였으나 피조개의 경우는 12시간으로 약간 빨랐으며 특히 방어육에 있어서는 초기에 감소하는 특징과 더불어 균의 증식속도가 완만하였다. 그리고 가열처리육보다 생육에서의 균의 증식이 빠르게 나타났다.

• Journal of Korean Neurosurgical Society
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• 제48권1호
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• pp.20-30
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• 2010

Objective : We determined whether the expression of GRIM-19 is correlated with pathologic types and malignant grades in gliomas, and determined the function of GRIM-19 in human gliomas. Methods : Tumor tissues were isolated and frozen at $-80^{\circ}C$ just after surgery. The tissues consisted of normal brain tissue (4), astrocytomas (2), anaplastic astrocytomas (2), oligodendrogliomas (13), anaplastic oligodendrogliomas (11), and glioblastomas (16). To profile tumor-related genes, we applied RNA differential display using a $Genefishing^{TM}$ DEG kit, and validated the tumor-related genes by reverse transcription polymerase chain reaction (RT-PCR). A human glioblastoma cell line (U343MG-A) was used for the GRIM-19 functional studies. The morphologic and cytoskeletal changes were examined via light and confocal microscopy. The migratory and invasive abilities were investigated by the simple scratch technique and Matrigel assay. The antiproliferative activity was determined by thiazolyl blue Tetrazolium bromide (MTT) assay and FACS analysis. Results : Based on RT-PCR analysis, the expression of GRIM-19 was higher in astrocytic tumors than oligodendroglial tumors. The expression of GRIM-19 was higher in high-grade tumors than low-grade tumors or normal brain tissue; glioblastomas showed the highest expression. After transfection of GRIM-19 into U343MG-A, the morphology of the sense-transfection cells became larger and more spindly. The antisensetransfection cells became smaller and rounder compared with wild type U343MG-A. The MTT assay showed that the sense-transfection cells were more sensitive to the combination of interferon-$\beta$ and retinoic acid than U343MG-A cells or antisense-transfection cells; the antiproliferative activity was related to apoptosis. Conclusion : GRIM-19 may be one of the gene profiles which regulate cell death via apoptosis in human gliomas.

• IMMUNE NETWORK
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• 제10권6호
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• pp.239-246
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• 2010

Background: Monoclonal antibodies (mAbs) recognizing Class III epitope of CD34 are essential for flow cytometric diagnosis of leukemia. Methods: 27H2 mAb was developed from a mouse alternatively immunized with human acute leukemia cell lines, KG1 and Molm-1. Using flow cytometric analysis of various leukemic cell lines and peripheral blood, immunohistochemical study of frozen tonsil, we characterized 27H2 mAb. Antigen immunoprecipitated with 27H2 mAb immunobloted with anti-CD34 mAb. A case of bone marrow sample of acute lymphoblastic leukemia (ALL) patient was obtained at CBNU Hospital. For epitope identification enzyme treatment with neuraminidase and O-sialoglycoprotein endopeptidase (OSGE) and blocking assay with known classIII mAb (HPCA-2) were done. Results: Only KG1 and Molm-1 revealed positive immunoreactivity. Immunohistochemical staining disclosed strong membranous immunoreactivity on high endothelial venules. Antigen immunoprecipitated by 27H2 mAb showed approximately 100 kDa sized band immunoblotted with anti-CD34 under non-reducing conditions. Epitope recognized by 27H2 mAb disclosed resistancy to both neuraminidase and OSGE treatment and completely blocked with known class III mAb preincubation. CD34 positive leukemic cells in BM of pre B cell ALL patient detected by FITC-conjugated 27H2 and HPCA-2 were identified with similar sensitivity. Conclusion: A novel murine mAb recognizing class III epitope of human CD34 with high affinity, which is useful for flow cytometric diagnosis of leukemia, was developed.

• 대한약침학회지
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• 제17권1호
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• pp.7-12
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• 2014

Objectives: The objective of this study is to investigate the effects of Salviae Miltiorrhizae Radix hot aqueous extract on nitric oxide (NO) and prostaglandin $E_2$ ($PGE_2$) production and on 1,1-diphenyl-2-picryl hydrazyl (DPPH) free-radical scavenging in macrophages. Methods: Salviae Miltiorrhizae Radix (300 g) was heated at $100^{\circ}C$ with distilled water (2 L) for 4 hours. The extract was filtered and concentrated to 100 mL by using a rotary evaporator, was frozen at $-80^{\circ}C$, and was then freeze-dried by using a freezing-drying system. The RAW 264.7 macrophage was subcultured by using $10-{\mu}g/mL$ lipopolysaccharide (LPS). In order to evaluate cytotoxicity, we performed 3-(4,5-dimrthylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide (MTT) assays and measured the cell viability. The NO production was measured by using Griess assays, and the $PGE_2$ production was measured by using enzyme immunoassays. The antioxidant activity, the 1,1-diphenyl-2-picryl hydrazyl (DPPH) free-radical scavenging capability, was measured by using the DPPH method. Results: Cell viability with the 1-, 5-, 25-, 125- and $625-{\mu}g/mL$ Salviae Miltiorrhizae Radix hot aqueous extract was not significantly decreased compared to the cell viability without the extract. When 125 and $625{\mu}g/mL$ of Salviae Miltiorrhizae Radix hot aqueous extract were used, nitric oxide (NO) production in LPS-stimulated RAW 264.7 macrophages was significantly inhibited compared to that in the control group. When 25, 125, and $625{\mu}g/mL$ of Salviae Miltiorrhizae Radix hot aqueous extract were used, $PGE_2$ production in LPS-stimulated RAW 264.7 macrophages was significantly inhibited compared to that in the control group. The 125- and $625-{\mu}g/mL$ Salviae Miltiorrhizae Radix hot aqueous extracts had high DPPH free-radical scavenging capabilities in RAW 264.7 macrophages. Conclusion: This study indicates that Salviae Miltiorrhizae Radix hot aqueous extract suppresses NO and $PGE_2$ production and improves DPPH free-radical scavenging capability. Thus, it seems that Salviae Miltiorrhizae Radix hot aqueous extract may have an anti-inflammation effect and antioxidant activity.

• 한국가축번식학회지
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• 제22권1호
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• pp.1-9
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• 1998

본 연구는 체외에서 성숙된 소 미수정란을 electron microscope grid와 동해제인 EFS30을 이용하여 초급속 동결하였을 때 정상적인 배 발달의 유도 가능성 여부를 조사하고 동해제 및 동결방법의 유해성 여부를 indirect immunocytochemistry방법으로 확인하고자 실시하였다. 동해제는 30% ethylene glycol, 0.5 M sucrose, 18% ficoll과 10% FBS가 들어 있는 PBS로 된 EFS30을 사용하였다. 본 연구에서 얻어진 결과는 다음과 같다. 동해제와 동결과정이 난자의 microtubule, microfilament 및 chromatin의 형태에 미치는 영향을 indirect immunocytochemistry방법으로 조사하였던 바, 동해제 노출 뿐 아니라 동결에 의해서도 대조군과 차이를 나타내지 않았다. 초급속 동결이 소 미수정란의 체외수정에 미치는 영향을 검토했을 때, 총 정자침투율(96.7%, 90.0%), 정상 자응전핵 형성율(74.6%, 68.9%)과 난자당 정자수(1.50, 1.44)가 동결군과 대조군에 있어서 차이는 볼 수 없었다. 또한, 초급속 동결-융해 후의 체외발달능을 조사했던 경우, 85.5%의 높은 난자 생존율과 74.5%의 난할율, 그리고 31.4%의 배반포 형성율을 얻었다. 이러한 결과는 난자의 생존율을 제외한 수정율과 배반포 형성율에 있어서 대조군(76.0%, 34.6%)과 노출군(77.9%, 33.0%)의 결과와 매우 유사한 것이었다. 이와 더불어, 각 처리군에서 얻어진 배반포기배를 Hoechst 염색방법으로 총세포수를 조사하였을 때도 그 차이는 확인할 수 없었다. 따라서 체외에서 성숙된 소 미수정란은 EM grid와 EFS30 동결액을 이용한 초급속 동결방법으로 동결하였을 때 정상적인 배발달을 유도할 수 있다는 것을 알 수 있었다.(收量)은 양공시두부(兩供試頭部) 모두 괴근장(塊根長)과 정(正)의 상관(相關)이, 분기수(分岐數)와는 부(負)의 상관(相關)이있었다.(發芽率)이 98.1%이던 것이 68.8%로 감소(減少)하였다. 3. 온도변화(溫度變化)에 따른 수수의 발아소요일수(發芽所要日數)는 12일(日)($15/10^{\circ}C$), 6일(日)($25/20^{\circ}C$) 및 3일(日)($40/35^{\circ}C$)로 온도(溫度)가 상승(上昇)함에 따라 비례적(比例的)으로 단축(短縮)되었다. 옥수수 수는 16일(日), 7일(日) 및 3일(日)이 소요(所要)되었다.量)은 $24.6{\sim}36.7%$로서 건엽중(乾葉中)의 함량(含量)보다 월등히 높았고 조단백질함량(粗蛋白質含量)은 $2.0{\sim}5.3%$로서 건엽중(乾葉中)의 함량(含量)보다 현저히 낮았다. 특(特)히 P.931의 건경중(乾莖中)의 조섬유함량(粗纖維含量)은 다른 작물(作物)에 비해 현저(顯著)히 높은 편이었다.적차이(量的差異)를 나타냈다.間)에는 부(負)(-)의 상관(相關)이 있다.($P{\leq}0.01%$). 5. NEL 및 starch value 환경온도(環境溫度)가 상승(上昇)됨에 따라 감소(減少)된다. 4 엽기(葉期) sorghum식물(植物)의 환경온도(環境溫度)를 달리 하였을 때 NEL가치(價値)는 각각(各各) 4.87MJ($30/25^{\circ}C$), 5.46MJ($25/20^{\circ}C$) 및 5.81MJ/kg($18/8^{\circ}C$)로 변(變)하여 고온(高溫)에서 net energy lactation 축적(蓄積)이 크게 감소(減少)되었다.다. 그러나 기온(氣溫)이 낮은 조건(條件)

• 해부∙생물인류학
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• 제31권4호
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• pp.133-142
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• 2018

조직표본의 실제적인 3차원 구조에 대한 정보를 3차원 조직학이라고 하였다. 무른 성분들이 섞여 있고, 물을 포함 하고 있는 조직 내부의 미세구조의 3차원적 분석을 위해 방사광의 X선을 광원으로 하는 위상대조 미세단층 촬영이 활용되고 있다. 하지만, X선 위상대조영상 분석에서 물을 포함하고 있는 조직에서는 위상대조가 제대로 구현되지 않다는 것을 알게 되었다. 이러한 현상을 해결하기 위해 다양한 방법들을 적용하였으며, 표본을 얼렸을 때 위상대조가 강화된다는 사실을 확인하였다. 방사광 전파위상대조 동결미세단층촬영은 포항가속기연구소 X선 영상빔라인에서 수행하였다. 표본을 동결상태로 유지하면서 $0.18^{\circ}$ 간격으로 $180^{\circ}$ 회전하였으며, 표본을 통과한 X선에 의해 섬광기에 맺힌 영상을 광학렌즈로 확대하여 CCD카메라로 모았다. 각 표본 전체 투사영상을 OCTOPUS 소프트웨어로 재구성하여 2차원 단면영상으로 만들고, Amira 소프트웨어를 이용하여 3차원 영상으로 재구성하였으며, 단면영상에서 각 구조에 대한 구역화와 랜더링 작업을 수행하였다. 물에 의한 위상대조 방해 영향을 줄이기 위해 표본을 얼렸을 때 위상대조는 강화되었으나 동결팽창에 의한 조직변형이 관찰되었다. 표본을 막힌 공간에 넣고 주위를 포매제로 채워 급속냉동 동안 표본이 압박되도록 하였을 때 위상대조의 강화와 동결팽창에 의한 조직변형을 줄일 수 있었다. 결론적으로, 생체조직 내부 미세구조의 비파괴, 고해상도 3차원 영상분석에 있어 조직표본을 동결포매제로 포매 후 급속냉동하고, 방사광에서 방출되는 X선을 광원으로 하는 전파위상대조 동결미세단층촬영법은 효과적인 방법이 될 수 있을 것으로 기대한다.

• 대한치과교정학회지
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• 제27권4호
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• pp.607-621
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• 1997

이 연구의 목적은 중추신경계에서는 동통의 전달을 조절하며 말초조직에서는 혈관 이완, 면역체계의 조절, 탐식기능 조절 등의 염증에 관여되며 골 생성에도 관여하여 치아이동시 중요한 기능을 할 것으로 추측되고 있는 CGRP의 생성 장소인 삼차신경절내의 세포체의 크기에 따른 CGRP면역 반응성의 변화를 관찰하여 삼차 신경절내 CGRP면역양성을 띄는 각 크기의 세포들의 치아이동의 시간 경과에 따른 반응을 밝혀보고자 하는 것이다. 생후 9 주령의 Sprague-Dawley계 백서 30 마리를 정상 대조군 6 마리, 3 시간 교정력 적용군 5 마리, 12 시간군 4마리, 1 일군 5마리, 3 일군 5 마리, 7 일군 5 마리로 나누어 실험군은 각 해당 시간동안 상악 우측 제 1대구치에30gm내외의 교정력을 가한 후 희생시켰다. 희생시킨 백서의 삼차 신경절을 적출 하여 냉동 절편을 형성한 후 토끼의 항체를 이용하여 면역화학 염색을 시행하였다. 삼차 신경절의 CGRP 면역양성 신경세포체를 크기에 따라 소형 ($20{\mu}m$ 미만), 중형($20-35{\mu}m$), 대형($35{\mu}m$ 초과)으로 나누어 교정력 적용시간에 따른 변화를 관찰하였다. 1. 삼차 신경절내 전 신경세포체중 CGRP면역양성 신경세포체가 차지하는 비율은 정상 대조군이 33.0%였으며 교정력 적용후 1 일 후에는 24.5%로 감소하였으나 7 일 후에는 41.8%로 증가하였다. 2. 정상 대조군에서 CGRP 면역양성 신경세포체중 소형, 중형, 대형은 각각 51.4%, 44.0%, 4.7%였다. 3. 소형의 CCRP 면역양성 신경세포체는 3시간, 12시간 군에서 높게 나타났다. 4. 중형의 CGRP면역양성 신경세포체는 3일, 7일군에서 대형의 CGRP면역양성 신경세포체는 7 일군에 높게 나타났다. 위를 종합하여 볼 때 치아이동 초기에는 CGRP 면역양성 신경세포체중 소형의 세포가, 후기에는 중형, 대형의 세포가 반응한다는 것을 알 수 있었다.

• 대한화장품학회지
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• 제23권3호
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• pp.101-107
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• 1997

Phellinus linteus was artificially cultivated in kangwon province in Korea. The air-dried phellinus linteus was frozen in liquid nitrogen tank and powdered in jar. 10g of the powder was extracted with each 200g of ethanol, methanol, distilled water and 1,3-butylene glycol/distilled water 4 hours under refluxing and then the liquidextract was concentrated under reduced pressure. As a result of analysis by high performance liquid chromatography and thin layer chromarography, many kinds of sugar and flavonoids were detected. Also we knew that phellinus linteus' extract had a strong UV-ray absorption. In the efficacy test for applying to cosmetics, free radical scavenging effect was confirmed. As a result, 2% of sample was the most potent inhibitory effect and the free radical savenging activity, was 0.31%. This is more effective than any other meterial. In the test of antioxidative activity against lipid autoxidation, phellinus linteus' extract had a good effect by 46% while vitamine E was 42.3%. The immunological activity of phellinus linteus was showed through the activation of macrophage cell. Actually, phellinus linteus activated macrophage function of 1.1-1.8 times including nitrite production compared to control. The whitening effect of phellinus linteus was showed through the inhibition of tyrosinase activity, melanin biosynthesis of S. bikiniensis and B-16 melanoma cells. Phellinus linteus' extract was showed strong mushroom tyrosinase inhibitory activity with IC50 value of 0.5% and inhibited melanin biosynthesis with 28mm inhibition zone at 0.005%/paper disc in S. bikinniensis, a bacterium used as an indicator organism in this work. Also it inhibited melanin biosynthesis in B-16 melanoma cells with a minimum inhibitory concentration of 0.134%.